20) Что такое метод elisa
Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА, англ.enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) — лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакцияантиген-антитело. Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием фермента в качестве метки для регистрации сигнала.
Из-за разнообразия объектов исследования — от низкомолекулярных соединений до вирусов и бактерий, и многообразия условий проведения ИФА существует большое количество вариантов этого метода.
Возможна классификация по типу иммунохимического взаимодействия на первой стадии анализа (в которой происходит связывание определяемого вещества). Если в системе присутствуют только анализируемое соединение и соответствующие ему центры связывания (антиген и специфические антитела), то метод является неконкурентным. Если же на первой стадии в системе одновременно присутствует анализируемое соединение и его аналог (меченное ферментом анализируемое соединение или анализируемое соединение, иммобилизованное на твердой фазе), конкурирующие за ограниченное количество центров специфического связывания, то метод является конкурентным.
Примером неконкурентного формата ИФА является «сэндвич»-метод. К носителю с иммобилизованными антителами добавляют раствор, содержащий анализируемый антиген. В процессе инкубации на первой стадии на твердой фазе образуется комплекс антиген-антитело. Затем носитель отмывают от несвязавшихся компонентов и добавляют меченные ферментом специфические антитела. После вторичной инкубации и удаления избытка конъюгата антител с ферментом определяют ферментативную активность носителя, которая пропорциональна начальной концентрации исследуемого антигена. На стадии выявления специфического иммунокомплекса антиген оказывается как бы зажатым между молекулами иммобилизованных и меченных антител, что послужило поводом для широкого распространения названия «сэндвич»-метод. Ферментативнаяреакция (цветная реакция) проходит в присутствии перекиси водорода и субстрата, представленного неокрашенным соединением, которое в процессе пероксидазной реакции окисляется до окрашенного продукта реакции на заключительном этапе проведения исследования. Интенсивность окрашивания зависит от количества выявленных специфических антител. Результат оцениваетсяспектрофотометрическиили визуально.
«Сэндвич»-метод может быть использован для анализа только тех антигенов, на поверхности которых существуют, по крайней мере, две антигенные детерминанты. На этом формате основано большое количество тест-систем для иммуноферментной диагностики различных инфекций: ВИЧ-инфекция, вирусныегепатиты,цитомегаловирусная,герпесная, токсоплазменная и другие инфекции.
21) Назовите методы синхронизации охоты у различных сельскохозяйственных животных
| ||||||
|
Синхронизация охоты - это коррекция гормонального статуса коров и тёлок для одновременного проявления эструса у группы животных. Синхронизация охоты как биотехнологический метод применяют для регулирования темпов воспроизводства крупного рогатого скота, равномерного осеменения, лактации, родов и эффективного использования производственных помещений.
К синхронизации охоты не допускаются животные с острыми и/или хроническими заболеваниями желудочно-кишечного и/или дыхательного тракта с ацикличными или атрофированными яичниками больные инфекционными заболеваниями в период беременности, если нет показаний для стимуляции родов или аборта не достигшие физиологической зрелости, согласно стандартам породы чрезмерно истощенные или ожиревшие больные любым видом эндометрита со зрелыми фолликулярными или лютеиновыми кистами
К синхронизации половой охоты допускаются животные С кистами, находящимися на начальной стадии развития С персистентным желтым телом С гипофункцией яичника
Синхронизация охоты: Компания SYVA Laboratorios предлагает препараты Гонасил и Лютеосил, которые позволят работать по двум различным схемам синхронизации.
Схема 1 Рекомендована для нетелей и коров мясных пород
*Если животное пришло в охоту, то проводят искусственное осеменение **Если животное не пришло в охоту, то повторяют эту схему через 14 дней.
Схема 2 Рекомендована для коров молочных пород
Первый день. Инъекция Гонасила: Гонасил стимулирует секрецию фолликулостимулирующего (ФСГ) и лютеинизирующего гормонов (ЛГ). передней доли гипофиза. ФСГ стимулирует развитие и созревание фолликула, которое сопровождается образованием эстрогенов, вызывающих течку, общее возбуждение и охоту.
Восьмой день. Инъекция Лютеосила: Лютеосил вызывает регрессию желтого тела, наличие которого препятствует развитию и созреванию новых фолликулов. В результате снижается уровень прогестерона и происходит созревание новых фолликулов.
10 день. Инъекция Гонасила: Гонасил стимулирует секрецию ФСГ и ЛГ и запускается процесс развития и созревания новых фолликулов . Через 16-20 часов у группы животных происходит овуляция и образование желтого тела.
11 день. Проводят искусственное осеменение без выявления половой охоты у данной группы животных |
