ординат – значения оптической плотности (единица измерений - экстинкции).
0.4
0.20
0.12
0.04
0.1 |
0.25 |
0.50 |
1.0 С, % |
График зависимости оптической плотности растворов белка в пробах с сульфосалициловой кислотой от концентрации белка
Дайте обоснованные ответы на следующее:
1.Как узнать, осажден ли полностью белок из биологической жидкости после 50% насыщения её сульфатом аммония?
Дополнительные сведения: жидкость после 50% насыщения сульфатом аммония и фильтрования прозрачна.
2.Изоэлектрическая точка исследуемого белка равна 5.3.
Назвать аминокислоты, преобладающие в составе белка.
3.Плазма крови насыщена сульфатом аммония. При этом выпали в осадок белки.
Как разделить белки на глобулины и альбумины, если у Вас имеется только центрифуга и дистиллированная вода?
4.Как изменится электрический заряд растворенной в воде аминокислоты при изменении реакции среды в кислую и основную сторону?
5.Перечислить химические связи в белковой молекуле в последовательности от прочных к слабым.
6.Какие связи участвуют в образовании белков-сополимеров?
7. Назвать связь, обеспечивающую образование первичной структуры полипептида.
10
8.Назвать связи, поддерживающие вторичный и третичный уровни организации белковой молекулы,назвать процессы, которые могут вызвать их разрушение.
9.Что представляет собой водородная связь, какие химические элементы способны участвовать в её образовании ?
10.В чем заключается доля доменной структуры в функционировании белков?
11.На каком этапе формировании белковой молекулы необходимы шапероны? Что может произойти с молекулой белка при их отсутствии в клетке?
12.В каком участке представленного ниже полипептида могут находиться точки изгибов, какие участки могли бы иметь спиралевидную конфигурацию?
ала-гли-тир-про-мет-фен-цис-ала-цис-ала-гис-ала-цис-фен-гис-про-гис-ала.
13.. За счет каких связей может образоваться сополимер из двух нижепредставленных пептидов?
а) ала-мет-арг-цис-ала-гли-сер-гли-цис-тре;
б) лиз-глу-арг-цис-арг-гли-тре-сер-лиз-тре-глу-сер.
14.Как, используя биуретовый метод определения белка и сульфат аммония, установить соотношение между альбуминами и глобулинами сыворотки крови?
15.Отношение количества альбуминов к количеству глобулинов в сыворотке крови больного равно 1,5. Рассчитайте содержание глобулинов, если концентрация альбуминов равна 5,0 г%.
16.Назовите две основные конфигурации белковой молекулы и укажите различия между ними.
17.На каком уровне пространственной организации различают белки глобулярные и фибриллярные?
18.Назвать важнейшие группы основных белков.
19.Почему протамины и гистоны отличаются основным характером ?
20.Почему протамины и гистоны коагулируют при сильном нагревании только в сильно щелочной среде ?
11
ЗАНЯТИЕ 3 «Химия сложных белков. Определение компонентов фосфо- и нуклеопротеидов»
Цель занятия: ознакомиться с классификацией и структурой сложных белков, в особенности нуклеопротеидов, которым принадлежит ведущая роль в хранении и передаче генетической информации (ДНК и РНК), а также с важнейшим хромопротеидов (гемоглобином).
Студент должен знать:
1.Классы сложных белков, принцип их деления на классы, принцип номенклатуры
2.Химическую природу простетических групп сложных белков.
3.Компоненты простетической группы нуклеопротеидов и хромопротеидов (в частности, гемоглобина).
4.Пространственную организацию нуклеиновых кислот.
5.Различия в составе и структуре РНК и ДНК
6.Функции ДНК и РНК, виды РНК, их локализацию.
7.Простетическую группу гемоглобина, её компоненты, роль железа в составе гема.
8.Факторы, воздействие которых может вызывать изменения структуры ДНК с информационными последствиями.
Студент должен уметь:
1.Построить (схематически) комплементарную цепь к участку заданного фрагмента одной из цепей ДНК.
2.Определить по результатам качественного анализа гидролизата нуклеиновых кислот, подвергалась гидролизу ДНК или РНК
3.Различать виды гемоглобина и использовать принятые для них обозначения (оксигемоглобин, восстановленный гемоглобин, карбоксигемоглобин и т.д.
12
4. Найти ошибки в представляемых для оценки отрезках якобы комплементарных цепей ДНК
Студент должен получить представление: о преимущественной локА-
лизации в организме человека сложных белков, их биологическом значении, об угрозах, которыми являются для существования видов мутагенные воздействия.
Аудиторная работа
Лабораторная работа (Определение компонентов фосфо-
инуклеопротеидов)
1.Выделение казеина из молока. Казеин (один из фосфопротеидов) содержится в молоке в виде растворимой кальциевой соли, которая при подкислении распадается, и казеин выпадает в осадок. Избыток кислоты мешает осаждению, так как при значениях рН ниже 4,7 (изоэлектрическая точка казеина) молекулы белка перезаряжаются, и казеин вновь переходит
враствор.
Ход работы. К 2 мл молока добавить равный объем дистиллированной воды и 2 капли 10%-ной уксусной кислоты. Казеин, выпадающий в виде хлопьев, собрать на фильтре и промыть водой.
2. Гидролиз нуклеопротеидов
Ход работы. В круглодонную колбу поместить 1 г дрожжей, добавить 20 мл 10%-ного раствора серной кислоты и столько же дистиллированной воды. Колбу закрыть пробкой с обратным холодильником и кипятить под тягой 1,5 ч при слабом нагревании. Жидкость охладить, довести дистиллированной водой до исходного объема, фильтровать. Фильтрат использовать для следующих качественных реакций:
а) биуретовая реакция (для обнаружения полипептидов). К 5 каплям полученного гидролизата прибавить 10 капель 10%-ного раствора едкого натра и 1 каплю 1%-ного раствора сернокислой меди. Жидкость окрашивается в розовый цвет;
б) серебряная проба (для обнаружения пуриновых оснований). К 5 каплям гидролизата прилить 5 капель 2%-го аммиачного раствора азотнокислого серебра. Через 3-5 мин выпадает небольшой бурый осадок серебряных соединений пуриновых оснований;
в) качественная реакция Молиша (для обнаружения пентозной группировки). К 10 каплям гидролизата прилить 2 - 3 капли 1%-ного раствора тимола в этаноле, перемешать и по стенке опустить равный объем концентрированной серной кислоты - отчетливое красное кольцо;
г) молибденовая проба (для обнаружения фосфорной кислоты). К 5 каплям гидролизата прилить 5 капель молибденового реактива и кипятить несколько минут. Появляется лимонно-желтое окрашивание, а при охлаждении - желтый кристаллический осадок комплексного соединения фосфорномолибденовокислого аммония.
13
Дать обоснованные ответы предложенные ниже задания:
1.Какие структурные компоненты входят в состав ДНК? В какой последовательности связаны они между собой?
2.Построить комплементарную цепь к участку. представленного ниже фрагмента ДНК (- А - Г - Г - Ц - Т- Г-Т) так, чтобы образовавшаяся цепь представляла собой фрагмент РНК:
3.Построить комплементарную цепь к участку одной из цепей ДНК, представленному ниже:
-А - Г - Г - Ц - Т -
:: : : :
-? - ? - ? - ? - ? -
4.Найдите ошибки в представленном ниже фрагменте ДНК:
-Т - У - А - У - Ц - Т - Т - Г-
: : : : : : : :
А- А - Т - А - Г - А - А - У-
5.Олигонуклеотид гидролизовали двумя способами. В первом случае в гидролизате определили мононуклеотиды А, Г, Ц и Т (последний находится в гидролизате в количестве, превышающем остальные в 2 раза), а также динуклеотиды Г - А, А - Т и Т - Т. Во втором случае, наряду со свободными нуклеотидами нашли динуклеотид Г - Ц.
Определите последовательность нуклеотидов в исходном продукте?
6.Исследуемый раствор обнаруживает положительную биуретовую реакцию, образует осадок при кипячении и добавлении концентрированных минеральных кислот, а также сульфосалициловой кислоты.
Составить план исследования, цель которого - выяснить, находятся в растворе простой или сложный белок. Если обнаружится сложный белок, как установить (или исключить), что он является гемоглобином.
7.Объяснить, на чем основано деление сложных белков на классы.
8.Дать краткую характеристику всех классов сложных белков.
9.Запомнить структурные формулы простетических групп нуклеиновых кислот.
14