Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Радіобіологія фул вершин (передмовалесс, вступлесс етс. едишн)

.pdf
Скачиваний:
150
Добавлен:
07.03.2016
Размер:
5.97 Mб
Скачать

150

20.Чому рідинні сцинтиляційні детектори використовуються, в основному, для реєстрації -випромінювання біологічних зразків?

21.Принцип роботи рідинного сцинтиляційного детектору.

22.Наведіть основні складові частини сцинтиляційної рідини та обгрунтуйте доцільність їх використання.

23.Які існують сцинтиляційні рідини, що дозволяють вводити в

них певну кількість води? Яку вони мають ефективність реєстрації

3Н, 14С, 32Р?

24.Наведіть схему сцинтиляційного детектора та поясніть доцільність використання наведених в них пристроїв.

25.Що становить собою „тепловий шум” ФЕП? Які є методи його зниження?

26.В чому полягає суть явища люмінісценції?

27.Принцип роботи люмінісцентних детекторів.

28.Принцип роботи і які речовини використовуються для детектування іонізуючих випромінювань в детекторах:

1)радіотермолюмінісцентних;

2)радіофотолюмінісцентних.

29.Які діапазони доз виміру радіотермо– і радіофотолюмінісцентними детекторами?

30.Принцип роботи напівпровідникових детекторів.

31.Принцип роботи і особливості хімічних детекторів:

1)феросульфатних;

2)церієвих;

3)скляних за визначення прозорості.

33.Принцип роботи активаційних нейтронних детекторів. Які найбільш розповсюджені ядерні реакції у них використовуються?

34.Принцип роботи трекових детекторів нейтронів.

35.Принцип колориметричного методу дозиметрії.

36.В чому полягає суть цитогенетичного та молекулярно– генетичного методів біологічної дозиметрії?

151

Розділ 7. МОДЕЛІ РАДІАЦІЙНОГО УРАЖЕННЯ БІОЛОГІЧНИХ ОБ”ЄКТІВ

7.1. Одноударна "модель радіаційного ураження клітини

Принцип мішені започаткований у радіобіології , ввів у радіобіологію уявлення про опромінення клітини, як процесс пападання у надчутливу мішень «снарядами» -квантами та іонізуючими частинками. В математиці для опису такого явища було введено статистичний розподіл Пуассона ( Анрі Пуассон вивів цей тип розподілу випадкової величини –при дослідженні стрільби гармати по мішені об`ему - V кількістью зарядів -D. Цю роботу А.Пуасссон проводив для французської армії за завданням Наполеона). Пізніше випадкові процеси , що можна описувати математично, як розподіл Пуассона, отримали у теорії випадкових процесів загальну назву – Пуассонівські процеси.

Перші теоретики в радіобіології (А. Дессауер, Е.Д.Лі, Карл Циммер ті іншіі в 30-40 роки 20 століття ), запропонували аналогію між стрільбою по мішенях та опроміненням клітини, де існує чутлива до дії радіації – мішень, яку значно пізніше ототожнили з ядром клітини, а потім і з матричними макромолекулами. Це, підтверджене подальшими дослідженнями припущення, дало право широко використовувати розподіл Пуассона, як основний вид розподілу для опису статистики радіаційного ураження клітини.

Аналітично розподіл Пуассона може бути описаний слідуючою формулою:

 

 

P e-VD (V D)i /i!

( 7.1.)

 

 

 

i

 

 

де - Pi - ймовірність i –попадань у мішень об`емом -V

при

дозі опромінення

-D,

i ! факторіалвідомий у математиці вираз , що

означає добуток

цілих чисел - i (i -1)( i

-2) …0. Причому

-0 ! –

дорівнює 1. Графічно

розподіл Пуассона можна проілюструвати на

рис 7.1.

 

 

 

 

152

Pi 1

0,5

 

V1D3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

V1D2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

V1D1

 

 

 

 

 

 

 

0

1

2

3 4

5

6 7

8

9 10 11 12

n

 

 

Рис 7.1.Графічне уявлення про розподіл ймовірності

i-попадань –

до мішені з об`ємом – V1 – при різних дозах опромінення

D1

>D2 >D3 .

Тут показана розрахована ймовірність n-попадань у мішень

розміром – V1 при заданій дозі

опромінення – D, 1,2…

n -

та

більше попадань

у досліджувану мішень.

Якщо доза зростає,

то

графік розподілу переміщається вправо, бо при збільшенні дози опромінення - зростає ймовірність великої кількості попадань у мішень клітини, а от ймовірність того, що мішень не отримає жодного попадання наближається до -0 .

153

Карл Циммер

Вже перші радіобіологічні експерименти з клітинами простіших організмів, з ураженням білків ферментів (каталаза, наприклад), чітко показали наявність так званих одноударних мішеней. Тобто було достатньо одного попадання у чутливу мішень для ураження об`екту дослідження. Тобто ймовірність виживання такого об`екту визначалася ймовірністью того, що у мішень не буде зроблено ні одного попадання. Згідно розподілу Пуассона виживаність такого об`екту дослідження можна розрахувати , як перший член розподілу Пуассона :

P N/N

o

e- VD

(7.2.)

o

 

 

де N/No – виживаність N з поміж Noопромінених об`ектів, V – параметр моделі, що зв`язаний з розмірами мішені ураження. Одна з перших у теоретичній та експериментальній радіобіології, одноударна модель зіграла та продовжує відігравати важливу роль і в сучасній радіобіології. Вона дозволила зробити важливі оцінки розмірів елементарних мішеней. Цим методом були розраховані розміри гена, розміри активних центрів деяких ферментів і тощо. Як це робилося?

Для цих оцінок зручно було будувати дозові залежності радіобіологічних реакцій у напівлогарифмічному масштабі. Видно з

 

 

 

 

 

 

154

моделі

(7.2.) , що

Ln (N/No )

=

-

V D . Ясно, що

в

напівлогарифмічних

координатах,

це буде

рівняння прямої

лінії

(Рис.7.2.), тангенс кута нахилу якої буде

 

пропорційний розміру

надчутливої мішені

біологічного об`екту.

Тобто по такій моделі за

даними експерименту, є можливість оцінити параметри мішені. Є і інший спосіб розрахунку розмірів мішені ураження. (рис 7.3). Для

цього по дозовій залежності виживаності визначають

D 37 – дозу

при

котрій неуражені 37% мішеней. Тоді Ln (0,37 ) = -

V D 37 = -1.

D 37

– у літературі що визначать як D 0 – дозу при котрій у середньому по одному попаданню може відбуватися у кожній клітині.

Виживаність , ум. од.

n

 

 

 

1,0

 

 

1,0

10-1

 

 

10-1

10-2

 

 

10-2

10-3

 

 

10-3

500 1000

200 400

5

10

Поглинена доза випромінювання, Гр

а

б

в

 

Рис.7.2. Криві виживаності вірусів (а), диплоїдних дріжджів (б) і клітин людини (злоякісних) у культурі (Hela) (в)

Тоді V ~ 1/ D 37 буде пропорційним

розміру мішені. Тому у

радіобіологічний літературі

значення D 37

- часто використовують у

оцінці радіорезистентності

при формуванні каріота радіотаксонів.

Зрозуміло, що форма мішені ураження, може мати кульову або єліпсоідну форму, як ядро клітини. Форма гену, або хромосоми, вже не буде мати таку геометрію. Зрозуміло, що розмір та форма мішені може бути предметом дослідження.

155

Виживаність, ум.од.

1,8

n

 

 

 

 

1,0

 

 

 

 

0,9

 

 

 

 

0,8

 

 

 

 

0,7

 

 

 

 

0,6

 

 

 

 

0,5

 

 

 

 

0,4

 

 

 

 

0,3

 

а

 

 

0,2

 

 

Поглинена доза

 

 

 

0

 

 

 

випромінювання,

 

 

 

ум.од.

1

2

3

4

 

Рис.7.3. Оцінка параметрів кривої виживаності n і V0 ( n плече кривої виживаності D0 , LD37 - поглинена доза випромінювання, за якої

летальність становить 37%)

В 40-50 роки минулого століття мала розвиток спеціальна сфера радіобіологічного дослідження – ультра радіометрія з дослідження розмірів та форми мішені , які відповідальні за досліджувані радіобіологічні реакції та ефекти. Для цього Є.Д. Лі розробив спеціальний метод мікродозиметричного дослідження – метод приеднаних об`емів. Результатом такої роботи стали спеціальні номограми Лі придатні для таких досліджень.

7.2. Застосувуання номограмм Е.Д. Лі у радіобіології.

Використовуючи, розроблений ним метод приєднаних об`ємів, Е.Д. Лі розробив спеціальну номограмму для розрахунку параметрів мішені ураження (зокрема 2 r – діаметр чутливої мішені). На цій номаграммі у подвійному логарифмічному масштабі у координатах по осі абсцис – доза D 37 - отримана з кривої виживаності для даного об`екту дослідження у радах, по осі ординат – діаметр мішені у мкм (Див. Э.Д.Ли «Действие радиации на клетку»).

Таким чином були отримані ряд прямих ліній для різних видів випромінювання. Користуватися такою номограмою можна слідуючим чином. Наприклад, якщо в експерименті з виживаністью клітин після опроміненя гамма-квантами, отримано експоненційну дозову залежність, і значення D 37 - складає 200 Гр або 20000 рад. Тоді треба знайти на осі абсцис (верхня) значення 20000 рад и

156

опустити вертикальну лінію до перетину з лінію номограмми для гамма-променів. Визначивши таким чином лінію перетину , можна на осі ординат –справа – зробити оцінку 2 r – діаметру чутливої мішені. Для даного прикладу вона становитиме – 70 ммк. При опроміненні іншими видами випромінювань – використовують інші прямі на номограммі. Це дуже зручний метод при первинній оцінці очікуваних розмірів чутливої мішені відповідальної за радіаційний ефект на досліджуваних об`ектах. Слід додати, що номограмми побудовані не на весь діапазон значень -2 r – діаметру чутливої мішені та не весь можливий діапазон значень - D 37. Якщо, отримані дані по кривій виживаності, дозволяють визначити ЛД37, що складає дозу більше 20 Гр (2000 рад), тоді на даній номограмі неможливо оцінити 2 r. Для цього необхідно пропорційно змінити значення на осі ординат та на осі абсцис номограми. Це дозволить оцінювати

більші розміри

мішені ураження

для досліджуваного об`єкту

(зокрема, такою мішенню можуть бути

мембрани клітин). Важливо,

що розроблені Лі номограми дозволяють зробити принципову оцінку діаметру мішені , а значить оцінити, які структури клітини можуть

буди відповідальні

за

досліджувані

радіобіологічні

реакції.

Зрозуміло, що уражувана

мішень може

мати не

кулькову або

овальну форму. З радіаційної фізики

відомо,

що

головним

показником мішені при дії густо іонізуючого

випромінювання є на ії

об`єм , а площина поверхні. Якщо мішень, наприклад, має форму паличкі , то опромінення рідкоіонізюючою і густоіонізуючою радіацію будуть давати різні значення ЛД37. Тоді за номограмами Лі оцінки -2 r для цих варіантів опромінення будуть мати зовсім різні значення. У той же час при кульовій формі мішені , значення -2 r , отримані за цими дозовими кривими, будуть близькими. Таким чином, дослідження виживаності біологічних об`ектів різними видами випромінювання , при експоненційних типах кривих виживаності дозволяють оцінювати розміри та форму мішені відповідальної за аналізовану радіобіологічну реакцію. Зокрема таким методом були досліджені форми та розміри 3-х фото систем, відповідальних за фотосинтез у рослин. Вважаємо, що ці можливості радіобіології, для дослідження , ще дуже мало використовуються.

7.3.Модель багатьох попадань

157

В радіобіологічних дослідженнях зустрічаються ситуації коли мішень для ії інактивації потрібно уразити не один, а багато разів. Наприклад у дослідженні вимірюється вміст білків, які в геномі клітини кодуються к –різними генами. Для ураження їх синтезу необхідно у клітину попасти – к разів або більше, для повної інактивації цього процесу. Тоді виживаність (продовження синтезу досліджуваних білків) буде теоретично визначатися слідуючою формулою :

 

 

k 1

 

 

 

 

 

 

N/No e- VD (V D)i /i! Bk

(7.3)

 

 

 

i 0

 

 

 

 

 

Цей вираз представляє собою сумму

к-

членів розподілу Пуассона,

яка вже не буде мати

такої простої

форми

– як

одноударна

експоненційна

залежність

виживаності

(Рис 7.4.). В

к - таким

виразом

для подальшого використання будемо

заміняти усю

сумму –тобто виживаність

- об`екту дослідження

з к- ударністью.

Зрозуміло,

що

для іншіх

біосистем –

будуть інші значення, бо

ударність для кожного з них будуть

свої значення ударності мішені.

Виживаність

1,2

 

20

 

 

 

Число ударів у мішень

1,0

 

10

 

 

 

5

 

 

Виживаність

 

0,8

0,1

 

 

2

 

0,6

 

1

 

 

 

 

0,4

 

 

 

0,2

 

 

 

 

 

0,01

 

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

 

Доза опромінення, умовні одиниці

 

а

 

б

Рис 7.4. Дозові криві виживаності для об`єктів с різною ударністью мішені.а у звичайному масштабі ( S –образні, або сигмоідні, криві ; число ударів визначено на кривих); б у напівлогрифмічному масштабі)

158

Для розрахунку виходу однота двониткових розрівів ДНК у клітині, можна використовувати відповідну модель Чедвика –Линхута

(7.4):

N/N

o

e - (a D b D2 )

(7.4)

 

 

 

де а – параметр величини виходу однониткових розривів ДНК, b - параметр величини виходу двониткових розривів ДНК. Дана модель може бути використана для спеціального випадку дослідження виходу однота двониткових розривів у молекулі ДНК.Ця дозова залежність має вже квадратичний характер, і може бути отримана експериментально при дослідження виходу однота двониткових розривів ДНК.

7.4.Модель багатьох мішеней

Розглянемо ситуацію, коли у біологічного об`екту радіобіологічних досліджень m- різних мішеней з різними значеннями ударності. Згідно з законом Пуассона виживаність, яка має зміст і розмірність ймовірності, буде представлено своїми значеннями - Вк. Згідно з теорією ймовірності ( теорема множення ймовірностей) ймовірність того, що виживуть і не будуть уражені всі m – мішеней організму становитиме такий добуток (7.5) :

m

 

N/No Bk

(7.5).

k 1

Тоді ймовірність виживаності такого m-мішенного організму буде мати слідуючий вигляд(7.6):

m

 

 

N/No 1 - Bk

 

(7.6).

k 1

Зрозуміло, що користуватися параметрів кожної мішені формулами. Але при великих модель має у кривих експоненціальний характер.

такою моделлю для розрахунку значно важче, ніж попередніми значеннях дози, навіть така складна виживаності відносно простий

159

7.5.Модель Нормана-Етвуда

Розглянемо реальну ситуацію, коли у досліджуваного об`екту є m- одно ударних мішеней з однаковими розмірами – V. Тоді згідно загальної моделі ураження багатомішенної системи формула для їх виживаності буде мати вигляд(7.7) :

N/N

o

1 - (1 - e- VD )m

(7.7)

 

 

 

Цю модель називають по іменах ії авторів – Модель Нормана-Етвуда. Для спрощення моделі вираз у дужках можна розкласти у біном Ньютона :

1- (1- e- VD )m 1- m e -VD m ( e- VD ) 2 / 2! .

Ясно, що при великих дозах опромінення, всі члени біному окрім перших двох будуть дуже малі, тому ми можемо ними знехтувати. У цьому випадку формула (7.7) спрощується до (7.8):

N/N

o

1- (1 - m e-VD ) m e- VD

(7.8)

 

 

 

Або після логарифмування :

Ln (N/No ) Ln m - VD

(7.9)

Це рівняння прямої лінії. Число – m назвали екстраполяційним числом, яке можна інтерпретувати як кількість мішеней у клітин, з якими проводилися радіобіологічні дослідження виживаності. На рис 7.5. показано приклад отриманих дозових кривих виживаності та способу оцінки параметрів – m (число мішеней) та V- розміри кожної

зокремих мішеней.

Векспериментах з дріжджами різної плоідності В.І.Корогодін, отримав серію кривих виживаності, де екстраполяційні числа точно відповідали плоідності клітин дріжджів . Аналогічну серію кривих ми побудували для експериментів з субпопуляціями клітин різного розміру. Тут можна очікувати чіткої аналогії з багатомішенною ситуацією. У цій ситуації число клітин в опромінюваній субпопуляції означає теж кількість мішеней. Тому тут можна використати модель Нормана-Етвуда.