4 Этап.

Через 12-14 часов учитывают развернутую реакцию агглютинации, изучают характер роста на среде Ресселя, идентифицируют выделенную чистую культуру по биохимической активности, гемолитическим свойствам, по чувствительности к антибиотику полимиксину, по чувствительности к бактериофагу С Мукерджи IV типа и бактериофагу Эль-тор. V.eltor гемолизирует эритроциты, лизируется бактериофагом Эль-тор II, растет в присутствии полимиксина. V.cholerae не вызывает гемолиза эритроцитов, чувствителен к бактериофагу С Мукерджи IV типа, не растет в присутствии полимиксина.

Окончательное заключение о выделении и дифференцировании холерных вибрионов дают через 36-48 часов.

Серологический метод

Является вспомогательным, применяется для ретроспективной диагностики холеры, выявления вибрионосителей и оценки напряженности постинфекционного и поствакцинального иммунитета. Для этого ставят реакцию агглютинации или РПГА, а также определяют вибриоцидные антитела в реакции лизиса in vitro. Положительный ответ дают при наличии агглютинирующих антител в титре 1:80-1:320, а вибриоцидных 1:1000.

Ускоренные методы обнаружения холерных вибрионов

1. Иммобилизация вибрионов холерными сыворотками и типовыми холерными фагами.

Капли испражнений или материала с поверхности пептонной воды обрабатывают холерной О-сывороткой, типовыми сыворотками Огава и Инаба или типовыми холерными фагами. Готовят из них препараты "раздавленная капля", которые исследуют в микроскопе, снабженном темнопольным или фазово-контрастным устройством. В положительном случае через 3-5 минут движение вибрионов прекращается.

2. Иммунофлюоресцентный метод.

Препараты из исследуемого материала обрабатывают флюоресцирующей противохолерной сывороткой и исследуют в люминисцентном микроскопе.

Положительным результатом считается обнаружение в препарате даже единичных вибрионов с ярким желто-зеленым свечением в виде блестящего ободка по периферии клетки.

Положительный результат можно получить через 1-2 часа после начала исследования при концентрации вибрионов не менее 10⁶ клеток в 1 мл, поэтому рекомендуется предварительное подращивание материала на питательных средах.

Препараты для диагностики кишечных инфекций

1. Агглютинирующие ОВ-сывороткии против энтеропатогенных сероваров E.coli (ОВ-коли-сыворотка О26; ОВ-коли-сыворотка О55 и т.д.). Получают гипериммунизацией кроликов взвесью бактерий соответствующей серологической группы E.coli. Применяют для постановки реакции агглютинации с целью определения серологической группы эшерихий.

2. Сальмонеллезные групповые, адсорбированные О- и монорецепторные Н-агглютинирующие сыворотки применяют для постановки реакции агглютинации для определения вида возбудителя при брюшном тифе и пищевых токсикоинфекциях.

3. Брюшнотифозные О- и Н-диагностикумы - взвеси брюшнотифозных бактерий, убитых нагреванием (О-диагностикумы) или обработкой формалином (Н-диагностикумы). Применяют для серологической диагностики брюшного тифа в реакции Видаля.

4. Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентификации шигелл получают из крови кроликов, иммунизированных определленными видами шигелл. Применяют для серологической идентификации возбудителей дизентерии.

5. Дизентерийный аллерген - Disenterinum - является диагностическим препаратом, используемым для постановки кожных аллергических проб. Представляет собой белковые фракции, полученные из шигелл Флекснера и Зонне. Вводится внутрикожно.

6. Наборы бактериофагов для типирования энтеропатогенных эшерихий, шигелл, сальмонелл.

7. Холерный фаг. Типовые холерные фаги применяются для идентификации и типирования холерных вибрионов. Поливалентный холерный бактериофаг используется для лечебно-профилактических целей.

8. Противохолерная агглютинирующая О-сыворотка, сыворотки для определения сероваров Огава и Инаба. Получены из крови кроликов иммунизированных холерными вибрионами. Применяют для серологической идентификации и определения сероваров холерных вибрионов в реакции агглютинации.