Биологический метод

Применяется для диагностики сальмонеллезов. Сальмонеллы пищевых токсикоинфекций в отличии от сальмонелл паратифа В патогенны для белых мышей. Этот признак используется для их дифференциации. В первый день исследования наряду с посевом патологического материала и пищевых продуктов производится пероральное заражение белых мышей, у которых развивается септицемия и они погибают через 1-2 суток. При вскрытии обнаруживают резко увеличенную селезенку, иногда и печень, а посев крови из сердца и материала из внутренних органов позволяет выделить культуры сальмонелл.

Ускоренные методы диагностики

Длительность классического бактериального исследования (4-5 дней) не всегда соответствует потребностям клиники и эпидемиологии. Особенно это относится к дизентерии с ее коротким и бурным течением.

Существуют два направления: 1) ускорение классического метода при помощи использования наиболее рациональных питательных сред, сокращение интервалов между пересевами и т.д.; 2) применение методов, основанных на знаниях антигенной структуры грамотрицательных микробов, на обнаружение специфического антитела или его фракции - полисахарида.

Для экспресс-диагностики дизентерии применяется люминесцентная микроскопия. Мазок из испражнений или колоний обрабатывают специфической люминесцирующей сывороткой и микроскопируют в люминесцентном микроскопе.

Лабораторная диагностика холеры

Основным в лабораторной диагностике холеры является бактериологический метод.

1 этап

Из патологического материала (испражнения, рвотные массы) готовят мазки, фиксируют спиртом или смесью Никифорова, окрашивают по Граму и микроскопируют. В дальнейшем при лабораторном подтверждении холеры хотя бы в одном случае мазки окрашивают только фуксином Пфейффера.

Вследствие большого полиморфизма наряду с типичными клетками в мазке можно обнаружить кокковидные, палочковидные и спиралевидные формы, что уменьшает ценность этого метода.

Из патологического материала готовят препарат "висячая капля" для обнаружения подвижного вибриона (фазово-контрастная микроскопия).

Обнаружение в мазках большого количества изогнутых грамотрицательных палочек и подвижных вибрионов в "висячей капле" дает возможность дать предварительный положительный ответ.

Одновременно с бактериоскопией исследуемый материал засевают на жидкие и плотные питательные среды. В качестве жидких сред обогащения рекомендуется 1% щелочная пептонная вода, 1% пептонная вода с теллуритом калия, жидкая среда Монсура и др. В качестве плотных питательных сред используют щелочной МПА и одну из селективных питательных сред: среду Аронсона, среду Монсура, ТСВS и др. Посевы термостатируют при температуре 37ºС.

2 этап

Через 5-6 часов из пленки или поверхности среды делают мазок, окрашивают по Граму, определяют подвижность в препарате "висячая капля". Проводят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с О-холерной сывороткой (0-1), разведенной 1:100, или реакцию иммобилизации холерного вибриона О-холерной сывороткой, результат которой учитывают при фазово-контрастной микроскопии. Ограничение подвижности вибрионов и образование агглютината наступает в течение 1-2 минут.

На основании полученных данных выдают второй предварительный результат, в котором отмечают подвижность вибриона и его отношение к агглютинирующей сыворотке.

Материал из пленки пересевают в чашки со щелочным агаром или селективной средой и одновременно делают пересев вторично на 1 % пептонную воду, изменения в которой изучают спустя 5-6 часов.

3 этап

Через 10-15 часов после посева изучают рост на второй среде накопления (пептонной воде), характер колоний на чашках, из колоний готовят мазки, окрашивают, определяют подвижность. Проводят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с холерным вибрионом, выросшем на чашках

с плотной средой, с О-холерной сывороткой, разведенной 1:100 и ориентировочную реакцию агглютинации с типовыми сыворотками Инабо и Огава в разведении 1:60 для определения серовара.

При положительной реакции и наличии характерных для холерного вибриона признаков выдают третий предварительный результат исследования.

Материал из колоний, давших положительную реакцию агглютинации высевают на: полиуглеводную среду (содержит 2-3% сахара), бульон, на лактозо-сахарозную среду Ресселя.

С молодой 3-4 час. бульонной культурой проводят развернутую реакцию агглютинации.