Біотест на токсичність за інгибуванням подовження корінців салату посівного Lactuca sativa l

Обладнання, прилади і матеріали: чашки Петрі, скляні або пластикові 100×15 мм або 100×20 мм; листки фільтрувального паперу, розрізані за розмірами чашок Петрі; піпетки на 1, 5, 10 см³; посуд для розчинення речовин; насіння посівного салату; термостат 22±2°С з вологим повітряним середовищем і світлонепроникненими дверцями.

Даний біотест аналізує ріст корінців та оцінює ранні стадії росту і виживання рослин. На відміну від традиційних біотестів, основаних на проростанні насіння, короткостроковий (120 годин) тест за ростом корінців оцінює тільки водорозчинні компоненти зразку (поверхнева вода, підземна вода, витяжки з ґрунту або осаду). Як правило, ріст корінців пригнічується при більш низьких концентраціях токсиканту, ніж проростання насіння. Тому він є більш чутливим індикатором біологічного впливу. Біотести можуть виконуватись на насінні будь-якої кількості видів, які економічно вигідні, доступні, швидко проростають і розвиваються. Найчастіше для цього тесту використовують насіння посівного салату Lactuca sativa L.

Підготуйте і підпишіть необхідну кількість чашок Петрі з фільтрувальним папером (покладеним переважно в 2 шари), розміщуючи його всередині чашок Петрі, для контрольного і досліджуваного зразка.

1. Відберіть насіння однакового розміру, форми і кольору для тестування, використовуючи 20-25 насінин для одної чашки Петрі.

2. Приготуйте водні розчини зразків (запропоновано розчинення – 1:1, 1:5, 1:10 і 1:20 в 20 см³ об'єму). З метою економії часу проводять попереднє тестування зразків (використовують 10 насінин на один тест), а випробування в повному обсязі – тільки на тих зразках, які пригнічують довжину корінців більше, ніж на 20% порівняно з контролем.

3. Розмістіть приблизно 5-7 см³ зразку, розведеного зразку або контрольної води в кожну чашку. Об'єм повинен бути таким, щоб папір фільтру зволожився, але без надлишку вологи (без води, яка б залишилась невсотаною).

4. Розмістіть насіння в кожну чашку Петрі рядами, 4-5 рядів в залежності від кількості насіння, що використовується. Потім закрийте чашки Петрі.

5. Поставте чашки Петрі в темний, вологий термостат, установіть температуру на рівні 22± 2°С на 120 годин (5 діб).

6. Після інкубації запишіть число насінин, які проросли та виміряйте довжину корінців в мм. Довжину коріння вимірюють від потовщення (вузлика) до його кінця.

Обробка експериментальних даних

1. Запишіть кількість контрольних і досліджуваних насінин, які проросли. Ця інформація може дати приблизну оцінку токсичності зразку.

2. Виміряйте кожний корінець по закінченню 120 годин інкубації і вирахуйте середнє значення росту корінця для кожного зразку, розведеного зразку і контролю. Для того, щоб виміряти довжину корінців, розмістіть проросле насіння на склі або плексигласі і вимірюйте від точки потовщення (гіпокотиль) до кінця корінця.

3. Вирахуйте ЕК₅₀ і ЕК₂₀ (концентрація, яка зменшує довжину корінця на 50% і 20% відносно контроля), нанесіть на вісь V дані довжини корінців в мм, а на вісь X – концентрації зразків. Проведіть уіінії від осі У паралельно осі X із точок з 50% і 20% від середньої контрольної довжини. Там, де ці лінії перетнуться з лінією концентрації, і знаходяться ті розведення зразку, що викликають 50% (ЕК5о) та 20% (ЕК2о) пригнічення довжини корінця.