Морфологические и тинкториальные свойства.

V. cholerae представляют собой прямые или изогнутые подвижные палочки. Подвижность холерного вибриона связана с наличием одного жгутика (монотрих). Жгутик снабжён чехликом и продольным выростом, напоминающим ундулирующую мембрану. Подвижность холерных вибрионов является важным диагностическим признаком. Палочки грамотрицательные, короткие, не образуют спор и капсул. Диаметр палочек 0,5 мкм, длина 1,5-4,0 мкм. Для вибрионов характерен полиморфизм - типичные формы наблюдают в клиническом материале, в мазках из колоний доминируют палочковидные формы. Под действием пенициллина холерные вибрионы способны образовывать L-формы. Вибрионы хорошо окрашиваются анилиновыми красителями; для их окраски обычно используют водный фуксин Пфайффера и карболовый фуксин Циля.

Культуральные свойства. Холерный вибрион хорошо и быстро растет на обычных средах с высоким значением рН (7,6-8,0), хемоорганотроф, ферментирует углеводы с образованием кислоты без газа.

На плотных питательных средах возбудитель холеры образует небольшие круглые дисковидные прозрачные колонии S-формы с ровными краями, голубоватые в проходящем свете, что сразу отличает их от более грубых и мутно-белых колоний энтеробактерий. Старые культуры несколько грубеют и приобретают желтовато-коричневый оттенок. При посеве уколом в столбик желатина вибрион через 48-72 часа при 22-23°С вызывает воронкообразное разжижение.

В жидких средах вибрион вызывает помутнение и образование нежной голубоватой плёнки на поверхности, её края приподняты вдоль стенок пробирки; при встряхивании пленка легко разрушается и оседает на дно. На 1% пептонной щелочной воде (рН 8,6-9,0) холерный вибрион растёт, опережая рост бактерий кишечной группы, и через 6-8 часов образует нежную голубоватую плёнку и умеренную муть. Пептонная вода с добавлением 0,5-1% NaCl является наилучшей средой накопления для возбудителя холеры. В молоке вибрион быстро размножается, вызывая через 24-48 часов свертывание, а затем наступает пептонизация молока. Холерный вибрион предпочитает аэробные условия и быстро погибает в анаэробных условиях. Вибрионы хорошо растут при температуре 18-37ОС, рН 6,0-9,6. Температурный оптимум для холерных вибрионов составляет 37°С.

Для выделения холерного вибриона используются следующие селективные среды: - щелочной МПА и щелочной агар с кровью; - желточно-солевой агар; - среда ТСВS (тиосульфат-цитрат-бромтимоловый сахарозный агар).Чаще всего используют щелочной МПА, на котором холерный вибрион образует гладкие стекловидно-прозрачные с голубоватым оттенком дисковидные колонии вязкой консистенции.

Биохимические свойства.

Биохимическая активность холерного вибриона представлена в таблице 2.

Тест или субстрат	Vibrio cholerae	Вибрионы не О1 группы
Оксидаза	+	+
Лизиндекарбоксилаза	+	+
Орнитиндекарбоксилаза	+	+
Аргининдигидролаза	-	-
Образование Н25	-	-
Желатиназа	+	+
Образование газа при ферментации глюкозы	-	-
Ферментация:
маннозы	+	±
маннита	+	+
инозита	-	-
Агглютинация О1 - сывороткой	+	-

Холерные вибрионы сбраживают с образованием кислоты многие углеводы (глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит, лактозу, гликоген, крахмал и др.). Ферментация сахарозы, маннозы и арабинозы (так называемая триада Б. Хейберга) имеет диагностическое значение. По способности разлагать эти три углевода все вибрионы (холерные и холероподобные) разделяют на 8 групп. Холерные вибрионы разлагают только маннозу и сахарозу и принадлежат к 1-й группе Хейберга (таблица 3).

Таблица 3 - Биохимическая характеристика вибрионов по Хейбергу

Углеводы	Группы
	1	2	3	4	5	6	7	8
Сахароза	+	+	+	+	-	-	-	+
Манноза	+	-	+	-	+	-	+	-
Арабиноза	-	-	+	+	-	-	+	-

Холерные вибрионы обладают плазмокоагулирующим (свёртывают плазму кролика) и фибринолитическим (разжижают свёрнутую сыворотку по Лёффлеру) свойствами. Они свёртывают молоко и разлагают другие белки и их дериваты до аммиака и индола; Н₂S не образуют, восстанавливают нитраты и образуют индол (эту способность учитывают в нитрозоиндоловой реакции, также известной как холера-рот реакция).

Антигенная структура. У холерных вибрионов выделяют термостабильные О- и термолабильные Н-антигены. Холерные и холероподобные вибрионы имеют общий Н-антиген, но различаются по О-антигенам.

О-антигены. По структуре О-антигена выделяют 139 серогрупп вибрионов (О1 – О139). Холерный вибрион относится к группе О1. Принадлежность к ней отличает их от холероподобных и парахолерных вибрионов. Поэтому, несмотря на возможные биохимические различия, при исследовании на холеру обязательно проводят типирование О1-антисывороткой. О-антиген О1 группы холерных вибрионов неоднороден и включает А, В и С компоненты. Холерный вибрион имеет общий А-антиген и два типоспецифических антигена - В и С, по которым и различают три серотипа V. cholerae - серотип Огава (АВ), серотип Инаба (АС) и серотип Гикошима или Хикоджима (АВС). Холерный вибрион в стадии диссоциации имеет ОR-антиген. В связи с этим для идентификации V. cholerae используют О-сыворотку, ОR-сыворотку и типоспецифические сыворотки Инаба и Огава.

Н-антиганы - общие антигены для большой группы бактерий, поэтому их разделяют на А и В группы. В группу А входят холерные вибрионы; в группу В - вибрионы, биохимически отличные от холерных. Вибрионы группы В имеют неоднородную структуру О-антигена, их разделяют на 8 серологических подгрупп, состав которых совпадает с разделением на 8 биохимических групп схемы Хайберга.

Фагочувствительность. Для фаготипирования V. cholerae С. Мукерджи предложил наборы бактериофагов, которые позволяют выделить среди V. cholerae 16 фаготипов. Холерный диагностический фаг ХДФ-3 избирательно лизирует холерные вибрионы классического типа, ХДФ-4 - вибрионы Эль-Тор, а ХДФ-5 лизирует вирулентные вибрионы обоих типов и не лизирует нехолерогенные вибрионы.

Резистентность возбудителя холеры. Холерный вибрион мало устойчив во внешней среде и плохо переносит инсоляцию и высушивание, но хорошо и долго сохраняется и даже размножается в открытых водоемах и сточных водах, богатых органическими веществами, имеющих щелочную рН и температуру выше 10-12°С. В стоячих водоёмах возбудитель может сохраняться до 2-3 недель, в выгребных ямах - до 3-4 месяцев. Вибрион длительно сохраняется в продуктах с щелочным рН и высокой влажностью, а также на одежде и постельном белье, загрязнённых испражнениями больных. Вибрионы биотипа Эль-Тор более устойчивы во внешней среде, что позволяет легко выделять их из воды и испражнений. Все вибрионы очень чувствительны к действию дезинфектантов, особенно с кислым значением рН.

Холерные вибрионы хорошо выживают при низкой температуре; во льду сохраняют жизнеспособность до 1 месяца; в морской воде - до 47 суток, в речной воде – от 3-5 дней до нескольких недель, в кипяченой минеральной воде сохраняются более 1 года, в почве - от 8 дней до 3 месяцев, в свежих испражнениях - до 3 суток, на вареных продуктах (рис, лапша, мясо, каши и др.) выживают 2-5 дней, на сырых овощах - 2-4 дня, на фруктах - 1-2 дня, в молоке и молочных продуктах - 5 дней; при хранении на холоде срок выживания увеличивается на 1-3 дня. Холерные вибрионы при 80°С погибают через 5 минут, при 100°С - моментально.