Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Микра / Зачеты / 2 / Колок 2 (2).doc
Скачиваний:
621
Добавлен:
13.02.2016
Размер:
420.35 Кб
Скачать

31. Диагностические иммунные сыворотки. Методы их получения. Монорецепторные адсорбированные диагностические сыворотки и тест-системы. Гибридомная технология. Методы получения моноклональных антител.

32. Качественная и количественная оценка серологических реакций: титр иммунных сывороток, диагностический титр, нарастание титра антител, аффинность, авидность.

Сложные серологические реакции (3–х компонентные: Aг+Ig+C):

а) видимые: иммобилизация; иммунного прилипания; лизиса (в том числе гемолиза);

33. Механизмы течения и проявления реакций агглютинации. Прямая реакция агглютинации (реакция Грубера, пробирочная развернутая реакция).

Реакция агглютинации (от лат. agglutinatio - склеивание) - склеивание корпускул (бактерий, эритроцитов и др.) антителами в присутствии электролитов - натрия хлорида.

Реакция агглютинации проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например,

бактерий), "склеенных" антителами.

РА используют для: Определения возбудителя, Определения антител в сыворотке крови больного

Методы постановки:

Реакция агглютинации на стекле. К капле агглютинирующей сыворотки (разведение 1 : 20) добавляют взвесь бактерии, выделенных от больного. Образуется хлопьевидный осадок.

Развернутая реакция агглютинации с сывороткой крови. К разведениям сыворотки добавляют диагностикум.

Реакция агглютинации:

а) с корпускулярным антигеном:

прямая: пластинчатая; объемная;

непрамая: латекс-агглютинация; ко-агглютинация; реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) = пассивной гемагглютинации (РПГА).

34. Нагрузочные реакции агглютинации. Постановка и учет реакции непрямой гемагглютинации (рига). Оценка результатов. Латекс-агглютинация. Реакция коагглютинации.

В РПГА выявляют антитела сыворотки крови с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который представляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами. Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде пуговки. В РОПГА применяют антительный эритроцитарный диагностикум - эритроциты, на которых адсорбированы антитела.

35. Реакция преципитации. Варианты постановки (кольцепреципитация по Асколи, двойная диффузия в агаре

по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия в агаре по Манчини, иммуноэллектрофорез).

Реакция преципитации:

а) с растворимым антигеном:

  • объемная (например, реакция кольцепреципитации);

  • в геле (иммунодиффузия):

  1. простая (по Манчини);

  2. двойная или встречная (по Оухтерлони);

  • реакция нейтрализации токсина антитоксином (РН) (например реакция флокулляции);

  • другие варианты:

    1. иммуноэлектрофорез;

    иммуноблотинг.

    Реакция преципитации - РП (от лат praecipilo осаждать) - это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах, избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.

    Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. Широкое распространение получили разновидности реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэпектрофорез и др.

    Реакция кольцепреципитации. Реакцию проводят в узких преципитационных пробирках: на иммунную сыворотку наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата.

    Реакция двойной иммунофиффузиии по Оухтерлони. для постановки реакции растопленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку и после затвердевания в нем вырезают лунки. В лунки геля раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу. В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы. У многокомпонентных систем между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата; у идентичных АГ линии преципитата сливаются; у неидентичных АГ - . пересекаются.

    Реакция радиальной иммунодиффузии. Иммунную сыворотку с расплавленным агаровым гелем равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген в различных разведениях. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др. Иммуноэлектрофорез - сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации: смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза, затем в канавку параллельно ) зонам электрофореза вносят иммуннук сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитации.

  • Соседние файлы в папке 2