1. Теоретическая часть

   1. Изоферменты, их биологическая роль. Полиферментные комплексы. Понятие о метаболоне.

   2. Изменение активности ферментов в онтогенезе.

   3. Основные направления клинической энзимологии.

      1. Энзимопатии. Определение. Классификация Степень клинических проявлений энзимопатий. Первичные (наследственные) энзимопатии. Причины возникновения. Механизм развития первичных и вторичных метаболических нарушений при энзимопатиях. Вторичные (приобретенные) – токсические и алиментарные энзимопатии. Причины возникновения. Механизм развития метаболических нарушений. Клинические проявления.

      2. Энзимодиагностика, принципы и объекты энзимодиагностики (кровь, моча, слюна, ликвор, пот и др.). Характеристика основных ферментов сыворотки крови (клеточные, секреторные и экскреторные). Типы изменения активности ферментов при патологии (гипо-, гипер- и дисферментемия). Задачи энзимодиагностики.

      3. Энзимотерапия. Использование ферментов для заместительной терапии. Лечение хирургических, сердечно-сосудистых, онкологических и др. заболеваний. Иммобилизованные ферменты. Липосомы, вирусные векторы, их применение.

      4. Использование ферментов в лабораторной практике для определения концентрации субстратов и активности ферментов.

      5. Использование ферментов в промышленности и производстве.

2. Практическая часть

   1. Решение задач.

   2. Лабораторная работа.

   3. Проведение контроля конечного уровня знаний.

Задачи

1. Активность какого фермента повышается при болезнях костной ткани:

а) холинэстеразы; б) щелочной фосфатазы; в) амилазы; г) аланинаминотрансферазы (АлАТ); д) лактатдегидрогеназы (ЛДГ); е) кислой фосфатазы?

2. Активность какого фермента изменяется при болезнях печени и отравлении фосфорорганическими веществами:

а) холинэстеразы; б) щелочной фосфатазы; в) амилазы; г) аланинаминотрансферазы (АлАТ); д) лактатдегидрогеназы (ЛДГ); е) кислой фосфатазы?

3. Активность какого фермента повышается при раке предстательной железы:

а) холинэстеразы; б) щелочной фосфатазы; в) амилазы; г) аланинаминотрансферазы (АлАТ); д) лактатдегидрогеназы (ЛДГ); е) кислой фосфатазы?

4. Ингибиторы протеаз (контрикал, трасилол, гордокс) подавляют активность трипсина, калликреина, плазмина, образуя с ними неактивные комплексы. При каком заболевании можно применять эти лекарственные средства?

а) инфаркт миокарда; б) язва желудка; в) острый панкреатит; г) острый аппендицит; д) фенилкетонурия; е) сахарный диабет?

5. Наибольшая активность АлАТ обнаруживается:

а) в миокарде; б) в скелетных мышцах; в) в почках; г) в крови; д) в печени; е) в головном мозге?

6. Молекула ЛДГ состоит из субъединиц типа:

а) М и В; б) М, В и Н; г) В и Н; д) только В; е) Н и М?

7. При инфаркте миокарда повышается преимущественно активность:

а) креатинкиназы; б) холинэстеразы; в) альфа-амилазы; г) щелочной фосфатазы?

Лаборатоpная работа Количественное определение активности амилазы мочи по Вольгемуту

Принцип метода. Определение активности амилазы в биологических жидкостях (моча, сыворотка крови, слюна) основано на определении минимальной активности (количества) фермента, катализирующего в стандартных условиях гидролиз добавленного крахмала. Амилазная активность мочи выражается количеством миллилитров раствора крахмала, которое расщепляется ферментом, содержащимся в 1 мл неразведенной мочи, при температуре 45 ºC за 15 мин.

Ход работы. Берут 10 пронумерованных пробирок и приливают в каждую по 1 мл физиологического раствора. Затем в 1-ю пробирку добавляют 1 мл исследуемой мочи. Содержимое этой пробирки перемешивают, несколько раз втягивая и выпуская жидкость из пипетки. Набирают в пипетку 1 мл смеси и переносят во 2-ю пробирку, и процедуру повторяют вплоть до 10-й пробирки. Из 10-й пробирки 1 мл смеси отбрасывают. При этом получается следующее разведение мочи:

№ пробирки	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
Разведение	1:2	1:4	1:8	1:16	1:32	1:64	1:128	1:256	1:512	1:1024
Гидролиз крахмала

В каждую пробирку добавляют по 1 мл физраствора и по 2 мл 0,1 % раствора крахмала. После перемешивания содержимого пробирки термостатируют 15 мин при температуре 45 °С. После инкубации пробирки охлаждают водопроводной водой и ставят в штатив по порядку. Прибавляют в каждую пробирку по 1 капле раствора йода и перемешивают. Отмечают пробирку с наибольшим разведением мочи, при котором произошло полное расщепление крахмала с йодом. Полученные данные заносят в таблицу.

Расчет. Активность амилазы можно рассчитать по формуле , где n – количество светлых пробирок (в которых произошел гидролиз крахмала). Так, если первые 3 пробирки обесцветились, активность амилазы мочи равна единицам.

Клинико-диагностическое значение. В норме активность амилазы мочи равна 16–64 единицам.

Определение активности амилазы мочи и сыворотки крови широко используется в клинической практике для диагностики заболеваний поджелудочной железы. При острых панкреатитах амилазная активность мочи и сыворотки крови увеличивается в десятки раз, особенно в первые сутки заболевания, а затем, при благоприятном исходе, постепенно возвращается к норме. При тотальном панкреонекрозе активность фермента исчезает. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует. В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эндемическом паротите, что указывает на одновременное поражение поджелудочной железы вирусом паротита.

Вывод (записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку).

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Рекомендуемая литература

Основная

1. Кухта, В.К и др. Биологическая химия: учебник / В.К. Кухта, Т.С. Морозкина, Э.И. Олецкий, А.Д. Таганович; под ред. А.Д. Тагановича. – Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. – С. 46-49, 82-86.

2. Биохимия: Учебник для вузов / Под ред. Е.С. Северина. – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – С. 80-83, 118-123.

3. Филиппович, Ю. Б. Основы биохимии. – 4-е изд. – М.: Агар, 1999. – С. 114-146.

4. Николаев, А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 78-80, 97-100.

5. Марри Р. и др. Биохимия человека: в 2-х т.: Пер. с англ., М.: Мир, 2004. – Т.1: С. 13-16, 63-65.

6. Березов, Т. Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. – М.: Медицина, 1998. – С. 157–168.

Дополнительная

7. Руководство по клинической лабораторной диагностике / под ред. М.А. Базарновой – Киев: Выща школа, 1990. – С. 167–186.

8. Зилва Ф., Пеннел Дж. Клиническая химия в диагностике и лечении. – М.: Медицина, 1986. – С. 372–388.

Занятие 6

Биологическое окисление-1. Цикл Кребса. Пути потребления кислорода в организме.

Цель занятия: сформулировать современные представления о путях и механизмах получения, депонирования и утилизации энергии в живых организмах.

Исходный уровень знаний и навыков

Студент должен знать:

1. Элементы химической термодинамики. Первый и второй законы термодинамики. Понятие об энергии Гиббса.

2. Суть и механизм окислительно-восстановительных реакций.

3. Строение коферментов NAD⁺, NADP⁺, FAD, FMN, их роль и механизм участия в окислительно-восстановительных реакциях.

Студент должен уметь:

1. Выполнять качественные реакции на субстраты энергетического обмена.

Структура занятия