2.6.4. Испытание на вирусы лейкоза

Если это предписано в частной статье, вакцину нейтрализуют моноспеци­фической антисывороткой. Вакцину в количестве 10 доз прививают культуре фиб-робластов куриных эмбрионов, поддерживающей рост подгрупп А и В вируса лей­коза. Культуры должны состоять не менее, чем из пяти повторов, площадь каждо­го из которых составляет не менее 60 см². Субкультивирование фибробластов производят с интервалами от 3 до 4 дней; весь период поддерживания составляет не менее 9 дней. В конце последнего периода клетки собирают, ресуспендируют, получая концентрацию 10⁷ клеток в миллилитре, и готовят экстракт. Для каждого из экстрактов проводят испытание на связывание комплемента для групп-специфического антигена птичьего лейкоза. Параллельно проводят испытание для контрольных групп с привитым вирусом лейкоза подгрупп А и В. Если обнару­живаются любые свидетельства наличия вируса лейкоза, вакцина не выдержива­ет испытание. Если результаты не позволяют сделать определенный вывод, про­водят дальнейшее субкультивирование фибробластов и продолжают испытание до получения однозначного результата.

2.6.5. Испытание на посторонние вирусы с ис­пользованием клеточных культур

Используют жидкую вакцину или восстанавливают подлежащее испытанию количество вакцины, высушенной из замороженного состояния, применяя указан­ную на этикетке или другую подходящую жидкость. Если это предписано в частной статье, вакцину нейтрализуют моноспецифической антисывороткой. При необхо­димости разбавляют таким образом, чтобы 0,1 мл смеси содержали 10 доз вакци­ны. 0,5 мл смеси прививают культурам, полученным из куриных почек или печени куриных эмбрионов. Культуры выделяют из групп, не содержащих указанных пато­генов. Выдерживают для адсорбции в течение 1 часа при 37⁰С. Культуры должны состоять не менее, чем из пяти повторов, и иметь общую площадь не менее 150 см². Культуры наблюдают в течение не менее 5 дней, отмечая наличие любых специфических цитопатических эффектов, вызываемых вакциной. Если специфи­ческих эффектов не наблюдается, выполняют дополнительные испытания с клет­ками и жидкостями, отобранными из всех культур с интервалами не менее 5 дней, и проводят наблюдение в течение инкубационного периода, составляющего 20 дней. Конечные культуры испытывают также на наличие гемадсорбирующих аген­тов с использованием куриных эритроцитов. Гемадсорбирующие агенты пред­ставляют собой микроорганизмы или вирусы, вызывающие адсорбцию эритроци­тов на поверхности клеточных культур, на которых происходит их репликация. Ге-мадсорбцию можно наблюдать следующим образом: в конце периода испытания к отделенным и промытым монослоям клеточной культуры добавляют 0,5% суспен­зии промытых эритроцитов. По окончании периода адсорбции (20 минут при 4⁰С) монослой осторожно промывают раствором хлорида натрия в фосфатном буфе­ре рН 7,4 R и изучают под микроскопом. При наличии гемадсорбции на монослоях клеток наблюдаются скопления эритроцитов. Результаты испытания достоверны, если не менее 80% культур выживают после каждого посева. Вакцина не выдер­живает испытание, если наблюдаются любые цитопатические эффекты или обна­руживается наличие гемадсорбирующих агентов.