микробиология шпоры / билет 17

Билет 17.

1.Особенности культивирования аэробных, анаэробных, микроаэробных и капнофильных бактерий.

Влияние температуры: бактерии подразделяют на психрофилы(5…10 С), мезофиллы (25…37 С), термофилы (45…90 С). Оптимальную температуру обеспечивают в термостатах.

Влияние света: для роста болезнетворных бактерий свет не нужен, они не являются фототрофами и культивируются в темноте. Прямые солнечные лучи убивают все микроорганизмы кроме фототрофных.

Влияние состава газовой среды:

Аэробы требуют для своего роста присутствие молекулярного кислорода в количестве 21%, что соответствует его концентрации в обычной атмосфере.

Факультативные анаэробы способны расти как в аэробных, так и в анаэробных условиях. Аэробные бактерии выращивают в тонком слое жидкой или на поверхности плотной питательной среды. В идких средах растут преимущественно на поверхности.

Облигатные анаэробы. Их культивирование включает удаление из них растворенного кислорода и снижение окислительно-восстановительного потенциала при помощи окислителей.

Культивирование микрофилов проводят в специальных герметически закрывающихся термостатах, соединенных с баллоном, содержащим инертный газ. После загрузки посевов в термостате необходимую часть воздуха замещают газом что обеспечивает микроаэрофильные условия. Микроаэрофилы растут в виде тонкого диска несколько ниже поверхности среды, в зоне оптимальной концентрации кислорода.

Культивирование капнофилов: не могут размножаться без повышенного содержания углекислого газа. Чашки и проик помещают в анаэростат, откачивают необходимый объем воздуха и добавляют углекислый газ. Либо посевы помещают в эксикатор, туда же ставят горящую свечу и закрывают крышку.

2. Кооперация клеток при иммунном ответе.

Кооперация клеток в иммунном ответе.

В формировании иммунного ответа включаются все звенья иммунной системы- системы макрофагов, Т- и В- лимфоцитов, комплемента, интерферонов и главная система гистосовместимости.

В кратком виде можно выделить следующие этапы.

1. Поглощение и процессинг антигена макрофагом.

2. Представление процессированного антигена макрофагом с помощью белка главной системы гистосовместимости класса 2 Т- хелперам.

3. Узнавание антигена Т- хелперами и их активация.

4. Узнавание антигена и активация В- лимфоцитов.

5. Дифференциация В- лимфоцитов в плазматические клетки, синтез антител.

6. Взаимодействие антител с антигеном, активация систем комплемента и макрофагов, интерферонов.

7. Представление при участии белков МНС класса 1 чужеродных антигенов Т- киллерам, разрушение инфицированных чужеродными антигенами клеток Т- киллерами.

8. Индукция Т- и В- клеток иммунной памяти, способных специфически распознавать антиген и участвовать во вторичном иммунном ответе ( антигенстимулированные лимфоциты).

Аг-представляющие клетки фагоцитируют микроорганизм и перерабатывают его, расщепляя на фрагменты (процессинг Аг). Фрагменты Аг выставляются на поверхности Аг-представляющей клетки вместе с молекулой МНС. Комплекс «Аг-молекула МНС класса II» предъявляется Т-хелперу. Распознавание комплекса Т-хелпером стимулирует секрецию ИЛ-1 макрофагами. Т-хелпер под действием ИЛ-1 синтезирует ИЛ-2 и рецепторы к ИЛ-2; последний стимулирует пролиферацию Т-хелперов, а также ЦТЛ. Таким образом, после взаимодействия с Аг-представляющей клеткой Т-хелпер приобретает способность отвечать на действие ИЛ-2 бурным размножением. Биологический смысл этого явления состоит в накоплении Т-хелперов, обеспечивающих образование в лимфоидных органах необходимого пула плазматических клеток, вырабатывающих АТ к данному Аг. В-лимфоцит. Активация В-лимфоцита предполагает прямое взаимодействие Аг с молекулой Ig на поверхности В-клетки. В этом случае сам В-лимфоцит перерабатывает Аг и представляет его фрагмент в связи с молекулой МНС II на своей поверхности. Этот комплекс распознает Т-хелпер, отобранный при помощи того же Аг. Узнавание рецептором Т-хелпера комплекса Аг-молекула МНС класса II на поверхности В-лимфоцита приводит к секреции Т-хелпером ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, под действием которых В-клетка размножается, образуя клон плазматических клеток (плазмоцитов). Плазмоциты синтезируют антитела. Часть зрелых В-лимфоцитов после антигензависимой дифференцировки циркулируют в организме в виде клеток памяти. Антитела, специфически взаимодействуя с антигенными детерминантами (эпитопами) на поверхности микроорганизмов, образуют с ними иммунные комплексы, что ведет к активации мембраноатакующего комплекса системы комплемента и лизису микробных клеток. Кроме того, иммунные комплексы, включающие микроорганизмы и специфические антитела, быстрее и легче захватываются фагоцитирующими клетками организма при участии Fc-рецепторов. При этом ускоряется и облегчается внутриклеточная гибель и переваривание. Защитная роль антител в антитоксическом иммунитете определяется также их способностью нейтрализовать токсины. Секреторные иммуноглобулины класса А обеспечивают местный специфический иммунитет слизистых оболочек, препятствуя прикреплению и проникновению патогенных микроорганизмов. Вместе с тем гуморальная защита малоэффективна против внутриклеточно паразитирующих бактерий, риккетсий, хламидий, микоплазм, грибов, простейших и вирусов. Против этих возбудителей более эффективны клеточные механизмы специфического иммунитета, к которым относится иммунное воспаление - реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и цитотоксическая активность Т-киллеров, NК-клеток, макрофагов.

3.Возбудитель бруцеллеза.

Бруцеллез – хроническая инфекционная болезнь, проявляющаяся абортами, задержанием последа, эндометритами и расстройством воспроизводительной функции животных. Восприимчивы многие виды с/х жив-х и человек.

Возбудитель бактерии рода Brucella: B.melitensis – овцы и козы; B. Abortus – КРС; B. Suis – свиньи, олени, зайцы. B. ovis – овцы; B. Canis – собаки.

Лабораторная диагностика основана на результатах бактериологического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование: Материал: абортированный плод с плодными оболочками, околоплодная жидкость, истечения из родовых путей, желудок плода, кусочки печени, селезенки, пробы молока (последние порции). При убое животнх берут паренхиматозные органы. Объектами исследования могут быть молочные продукты и объекты внешней среды.

Обнаружение возбудителя в исследуемом материале без выделения культуры: Бактериоскопия (мазки окрашивают по Граму, одним из специальных методов: по Козловскому, Стампу) Бруцеллы – грам - короткие палочковидные или кокковидные бактерии, формируют микрокапсулу. В окрашенном препарате располагаются одиночно, реже парами, короткими цепочками. Для обнаружения антигенов применяют МФА и ИФА.

Выделение и идентификация культуры возбудителя: Культуральные свойства: аэробы, температурный оптимум 37…38 С, рН 6,8…7,2. Материал засевают на специальные питательные среды: печеночно-глюкозо-глицериновый агар и бульон, картофельный агар, сывороточно-декстрозный агар. Некоторые виды бруцелл растут только при повышенном содержании в атмосфере оксида углерода( abortus, ovis). Поэтому половину посевов инкубируют в обычной атмосфере, другую – в атмосфере, содержащей 10…15% окиси углерода. Посевы культивируют в течение 30 сут. Рост появляется на 7…10 сут.

На плотных средах формирует мелкие, прозрачные, круглые, с ровными краями, гладкой поверхностью, с голубоватым оттенком колонии. Возможно появление шероховатых R-колоний. По мере старения колонии мутнеют и могут темнеть. На жидких питательных средах рост бруцелл проявляется равномерным помутнением среды, образованием голубоватого пристеночного кольца, позднее формируется небольшой осадок. Клетки бруцелл в мазках из культур, окрашенных по методам Грама и Козловского не отличаются от таковых в препаратах. Спор и жгутиков не образуют.

Серологическая идентификация: культуры идентифицируют в РА на стекле с S- и R-бруцеллезными диагностическими сыворотками. Если культура дает положительную РА с обеими или любой одной из этих сывороток, то её относят к бруцеллам.

Ферментативная активность: для более подробного определения видовой принадлежности изучают потребность в CO2, способность к образованию H2S, ферментации аминокислот, углеводов. Также исследуют способность к росту на питательных средах с красителями тионином и фуксином, чувствительность к бруцеллзным бактериофагам.

Биопроба: в опыт берут животных, в сыворотке которых не обнаружено антитела к возбудителю. Положительный результат биопробы – появления антител в титре 1:10, животные не погибают, далее проводят вскрытие с бактериологическим исследованием.

Серологическая диагностика: пробирочная РА, РА на стекле, РСК, РДСК, кольцевую реакцию с молоком, РДП.

В хозяйствах применяют аллергическую диагностику.