- •Тема 1. Строение и функции белков
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 2. Ферменты
- •Проведение анализа
- •Тема 3. Химия и обмен углеводов
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 4. Химия и обмен липидов
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 5. Белковый обмен
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Коэффициент Де Ритиса
- •Проведение анализа
- •Тема 6. Обмен сложных белков
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 7. Биохимия крови и мочи
- •Проведение анализа
- •Тема 8. Биохимия слюны
- •Проведение анализа
- •Тема 9. Биохимия костной ткани
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
Проведение анализа
Добавить в кювету |
Опытная проба |
Холостая проба |
Стандартная проба |
1. Образец (например, сыворотка) |
25 мкл |
-- |
-- |
2. Стандарт |
-- |
-- |
25 мкл |
3. Дистиллиро-ванная вода |
-- |
25 мкл |
-- |
4. Реагент 1. |
1 мл |
1 мл |
1 мл |
Перемешать содержимое пробирок, инкубировать 5 мин при 37С, или 10 мин при 20-25С. Измерить оптическую плотность А1против холостой пробы при длине волны 540-560 нм. | |||
5. Реагент 2 |
250 мкл |
250 мкл |
250 мкл |
Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при комнатной температуре или 5 мин при температуре 37С. Измерить оптическую плотность А2опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 540-560 нм. ВычислитьА = А2 – А1 для образца и стандарта.
Расчет
Расчет по стандарту концентрации общего билирубина в сыворотке крови проводят по формуле:
Аоп С (мкмоль/л) = ----------- Сст, Аст |
где А – разность оптических плотностей А1 и А2;
Сст – концентрация стандарта (мкмоль/л).
Если концентрация общего билирубина превышает 513 мкмоль/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.
Клинико-диагностическое значение:Билирубин – это продукт распада гемоглобина. Свободный (неконъюгированный) билирубин совершенно неполярен и почти нерастворим в воде, поэтому для транспортирования его в крови от селезенки к печени образуется комплекс с альбумином. В печени билирубин конъюгирует с глюкуроновой кислотой, а образующийся комплекс билирубин–глюкуроновая кислота (связанный билирубин) экскретируется в желчные протоки.
Гипербилирубинемия может бить вызвана увеличенным образованием свободного билирубина в результате гемолиза (гемолитическая/ прегепатитная желтуха), повреждения паренхимы печени (паренхиматозная/ интрагепатитная желтуха) или закупорки желчных протоков (обтурационная/ постгепатитная желтуха).
Хроническая врожденная гипербилирубинемия (преобладание свободного билирубина) называется синдромом Гилберта и встречается довольно часто.
Высокие уровни билирубина наблюдаются у 60-70% новорожденных из-за усиленного послеродового разрушения эритроцитов и отставания в активности ферментов деградации билирубина.
Общепринятые методы анализа определяют либо общий, либо прямой билирубин. Прямой билирубин – это конъюгированный, растворимый в воде билирубин. Следовательно, неконъюгированный (свободный) билирубин может быть оценен как разница между общим и прямым билирубином.
Тема 7. Биохимия крови и мочи
Лабораторная работа № 13.
Определение компонентов мочи с помощью диагностических полосок (HUMAN-Test Combina)
Принцип метода: В основе работы тест-полосок лежат методы сухой химии. Полоски предназначены для полуколичественного определения компонентов мочи по результатам цветных и ферментативных реакций в толще полоски.
Интенсивность окраски тестовой области полоски сравнивается с цветовой шкалой для каждого компонента.
Оборудование и реагенты:
Тест-полоски;
Свежесобранная моча;
Цветовые шкалы для показателей на этикетке контейнера для тест-полосок.