Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Практикум к экзамену.doc
Скачиваний:
104
Добавлен:
06.12.2013
Размер:
325.12 Кб
Скачать

Проведение анализа

Добавить в кювету

Опытная проба

Холостая проба

Стандартная проба

1. Образец (например, сыворотка)

25 мкл

--

--

2. Стандарт

--

--

25 мкл

3. Дистиллиро-ванная вода

--

25 мкл

--

4. Реагент 1.

1 мл

1 мл

1 мл

Перемешать содержимое пробирок, инкубировать 5 мин при 37С, или 10 мин при 20-25С. Измерить оптическую плотность А1против холостой пробы при длине волны 540-560 нм.

5. Реагент 2

250 мкл

250 мкл

250 мкл

Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при комнатной температуре или 5 мин при температуре 37С. Измерить оптическую плотность А2опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 540-560 нм. ВычислитьА = А2 – А1 для образца и стандарта.

Расчет

Расчет по стандарту концентрации общего билирубина в сыворотке крови проводят по формуле:

Аоп

С (мкмоль/л) = ----------- Сст,

Аст

где А – разность оптических плотностей А1 и А2;

Сст – концентрация стандарта (мкмоль/л).

Если концентрация общего билирубина превышает 513 мкмоль/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.

Клинико-диагностическое значение:Билирубин – это продукт распада гемоглобина. Свободный (неконъюгированный) билирубин совершенно неполярен и почти нерастворим в воде, поэтому для транспортирования его в крови от селезенки к печени образуется комплекс с альбумином. В печени билирубин конъюгирует с глюкуроновой кислотой, а образующийся комплекс билирубин–глюкуроновая кислота (связанный билирубин) экскретируется в желчные протоки.

Гипербилирубинемия может бить вызвана увеличенным образованием свободного билирубина в результате гемолиза (гемолитическая/ прегепатитная желтуха), повреждения паренхимы печени (паренхиматозная/ интрагепатитная желтуха) или закупорки желчных протоков (обтурационная/ постгепатитная желтуха).

Хроническая врожденная гипербилирубинемия (преобладание свободного билирубина) называется синдромом Гилберта и встречается довольно часто.

Высокие уровни билирубина наблюдаются у 60-70% новорожденных из-за усиленного послеродового разрушения эритроцитов и отставания в активности ферментов деградации билирубина.

Общепринятые методы анализа определяют либо общий, либо прямой билирубин. Прямой билирубин – это конъюгированный, растворимый в воде билирубин. Следовательно, неконъюгированный (свободный) билирубин может быть оценен как разница между общим и прямым билирубином.

Тема 7. Биохимия крови и мочи

Лабораторная работа № 13.

Определение компонентов мочи с помощью диагностических полосок (HUMAN-Test Combina)

Принцип метода: В основе работы тест-полосок лежат методы сухой химии. Полоски предназначены для полуколичественного определения компонентов мочи по результатам цветных и ферментативных реакций в толще полоски.

Интенсивность окраски тестовой области полоски сравнивается с цветовой шкалой для каждого компонента.

Оборудование и реагенты:

  1. Тест-полоски;

  2. Свежесобранная моча;

  3. Цветовые шкалы для показателей на этикетке контейнера для тест-полосок.