Основные режимы дозирования

Основные режимы дозирования: прямое, обратное, многократное дозирование. Прямое дозирование – весь забранный объём жидкости сбрасывается за один полный ход поршня, оно подходит для дозирования водных растворов. Обратное дозирование – в наконечник набирается объём жидкости больший по сравнению с необходимым. По окончании дозирования в наконечнике остаётся остаточный объём жидкости, который нивелирует погрешность, связанную с образованием пены. Этот способ дозирования используется для биологических, вязких и пенящихся жидкостей, а также дозирования очень малых объемов. Многократное дозирование предполагает повторяющиеся операции дозирования идентичных объемов жидкости. В этом случае используют электронные дозаторы, что позволяет повторять дозирование после однократного заполнения наконечника.

Построение калибровочного графика для определения концентрации общего белка в пробе.

Для построения калибровочного графика из основного стандартного раствора белка готовят 3 серии рабочих стандартных растворов (т.е. для каждой концентрации делают не менее 2 – 3 определений), как указано в табл. 1 (0,1 мл основного стандартного раствора содержит 0,01 г белка). Из каждого разведения берут по 0,1 мл рабочего раствора и вносят в пробирки, содержащие 5,0 мл рабочего биуретового реактива. Через 30-60 мин замеряют оптическую плотность стандартных и опытных проб против биуретового реактива.

Измерения абсорбции начинают производить с раствора меньшей концентрации.

Таблица 1

Построение калибровочного графика для определения общего белка сыворотки крови

№/№ пробирок	Стандартный раствор белка, мл	Физиологический раствор NaCl, мл	Концентрация белка, г/л
1 2 3 4 5 6 7	0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0	0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 -	40,0 50,0 60,0 70,0 80,0 90,0 100,0

По полученным данным строят калибровочный график на миллиметровой бумаге. На оси абсцисс (горизонтальной) обозначают значения концентраций, на оси ординат (вертикальной) – средние значения экстинкций, соответствующие взятым концентрациям белка. Через полученные точки (а при необходимости – между ними) проводят прямую линию. Масштаб выбирают так, чтобы линия располагалась под углом, близким к 45⁰(рис. 1).

Рис.1.Калибровочный график для определения общего белка сыворотки крови.

Е – экстинкция

С – концентрация белка

Иногда характер графика для большинства концентраций белка несколько отклоняется от прямой линии, однако если результаты стабильно повторяются, такой график вполне пригоден для работы.

Калибровочную кривую нужно время от времени проверять. При этом достаточно проверить 2 – 3 точки. Если они укладываются на прежнем графике, то он не переделывается. Для облегчения подсчетов составляют таблицу или вычисляют фактор пересчета Fделением концентрации белка на абсорбциюF = С_cm/E_cm.

Фактор пересчета F используют для расчета концентрации белка в исследуемой пробе. Для этого экстинкцию (абсорбцию) пробы Е_оп умножают на фактор пересчетаF:концентрация белка (г/л) = E_оп●F.