
- •05201051003 Мазепа
- •1Тцр — полимеразная цепная реакция
- •Внедрение в практику.
- •1.2.2 Диагностика хеликобактерной инфекции
- •2.3. Диагностика парентеральных вирусных гепатитов. Парентеральные вирусные гепатиты - группа инфекционных
- •1.3 Внедрение и использование пцр в практическом здравоохранении Российской Федерации.
- •2.Собственные исследования
- •2.1. Материалы и методы
- •2.1.2. Методы.
- •2,5 Мкл праймеров по 5-15 пмоль/мл каждого; 5 мкл 10-кратного реакционного буфера 2,5 мкл dNtp по 1мМ каждого; 1 мкл Tag-пoлимepaзы 0,5 е.А. 29 мкл деионизованной воды
- •1. Готовили реакционную смесь для амплификации из расчета на 1 пробу: буфер — Змкл, аЫтр - 3 мкл,
- •2.2.1.1. Выбор приборов для проведения пцр и фиксирования результатов.
- •2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 - Фрагменты гена шигоподобного токсина vt1.
- •2.2.2.4, Алгоритм использования метода пнр в диагностике бактериальных оки
- •Первичное обследование лиЦ—
- •2.2.3.2. Сравнительный анализ результатов детекции h.Pylori. Полученных традиционными и молекулярно-биологическими методами.
- •2.2.3.3. Изучение распространенности h.Pylori у больных с различными формами гастродуоденальной патологии
- •Тип патологии
- •2.2.4.4. Изучение вероятности вертикального пути передачи вгс и вгв.
- •Положительный результат
- •Продолжение лечения
- •Отрицательный результат
- •Назначение лечения
- •Назначение лечения
- •Отрицательный результат Продолжение лечения
- •2.2.5.1. Место пцр в общей системе методов диагностики нуги.
- •Выявлены u.Urealyticuym m hominis
- •IПри необходимости выявление возбудителей в отдельных субстратах
- •Список источников литературы.
- •307 307Приложение 1
- •310Частота выявления возбудителей нуги по сезонам 1998-2008 годов.
Положительный результат
в одном или обоих разведениях +
Определение генотипа ВГС + I
Выявлен генотип 1Ь Выявлены генотипы . 1а.2.За
Назначение лечения Назначение лечения
ной
кДНК (качественный анализ)
Отрицательный
результат
Назначение
лечения
оложительныи
результат
I
ПЦР
- исследование 10 и 100 кратных
Отрицательный
результат
I
Назначение
лечения
4
I
Через 3 недели с момента начала лечения Повтор качественного анализ
I
Положительный результат
г- ->
" 1
Продолжение лечения
эльный
результат Проведение полуколичественного
анализа
При отсутствии снижения вирусной нагрузки смена препарата и изменение курса лечения
Рис.26. Алгоритм проведения ПЦР обследования больных на наличие РНК ВГС перед назначением курса терапии и в процессе лечения
.Выделении ДНК из плазмы (сыворотки ) крови)
ж:
ПЦР
- исследование разведенной ДНК
(качественный анализ)
Отрицательный результат
Назначение лечения
¡Положительный
результат
ПЦР - исследование в10,100 и 1000 кратных разведений ДНК (полуколичественный анализ
)
А.
Назначение лечения
Положительный
результат в одном, двух или трех
разведениях
Ж
Назначение лечения
Назначение лечения
Через 3 недели с момента начала лечения Повтор качественного анализ
Отрицательный результат Продолжение лечения
Положительный
результат
Проведение полуколичественного анализ
а
При отсутствии снижения вирусной нагрузки смена препарата и изменение курса лечения
Рис. 27. Алгоритм проведения ПЦР обследования больных на наличие ДНК ВГВ перед назначением курса терапии и в процессе лечения
.2.2.5 ПЦР в диагностике негонококковых урогенитальных инфекций
К группе возбудителей негонококковых урогенитальных инфекций (НУГИ) отнесены микроорганизмы различных таксономических групп — простейшие, дрожжевые грибки, истинные бактерии, бактерии-мембранные и внутриклеточные паразиты, вирусы. Разнообразие нозологических форм, наличие ассоциаций микроорганизмов, сходство клинических картин заболеваний значительно затрудняет диагностику НУГИ. Сложившейся и устоявшейся схемы диагностики НУГИ в настоящее время не имеется
Анализ данных литературы и результатов собственных первичных исследований позволил установить спектр наиболее распространенных и значимых на сегодняшний день возбудителей НУГИ. Он представлен бактериями - мембранными паразитами (M.hominis и U.urealyticum), бактериями — внутриклеточными паразитами (C.trachomatis) и вирусами группы герпеса (Herpes simplex I/II типов, Cytomegalovirus).
На данном этапе работы проводилось определение роли и места метода ПЦР в диагностике НУГИ, изучение с помощью ПЦР распространения и особенностей циркуляции значимых возбудителей НУГИ, разработка оптимальных алгоритмов их выявления.