Лр №3
.doc
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Башкирский государственный аграрный университет» |
Методические указания |
|
С2.Б.11 Ветеринарная микробиология и микология |
|
Кафедра инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы
|
С2.Б.11 ВЕТЕРИНАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ И МИКОЛОГИЯ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
к лабораторным работам
Направление подготовки
111801 Ветеринария
Профиль подготовки
специализация Ветеринарная фармация
Квалификация выпускника
специалист
Уфа 2013
УДК637.12.04/.07:378.147
ББК 36.95+74.58
А 65
Рекомендовано к изданию методической комиссией факультета биотехнологий и ветеринарной медицины (протокол № 2 от « 04 » сентября 2013 г.)
Составитель: профессор, д-р биол. наук А. В. Андреева
доцент, канд. биол. наук З. З. Ильясова
Рецензент: зав. кафедрой морфологии, патологии, фармации
и незаразных болезней, д-р ветеринар. наук Гимранов В.В.
Ответственный за выпуск: |
зав. кафедрой инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы, д-р биол. наук, профессор Андреева А.В. |
г. Уфа, БГАУ, кафедра инфекционных болезней,
зоогигиены и ветсанэкспертизы
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3
Сложные методы окраски: по Граму и Цилю-Нильсену
(кислотоустойчивых микроорганизмов)
Цель занятия. Приготовить, окрасить сложным методом и зарисовать препараты из микробных культур. Отработать методику сложного метода окраски приготовленных препаратов.
Материалы и оборудование. Рабочие растворы красок, спирт ректификат 96%, дистиллированная вода, фильтровальная бумага, предметные стекла, бактериологические петли, пинцеты, пробирки с микробными взвесями, микроскопы, сливные чашки, мостики, карандаши или чернила по стеклу, песочные или другие часы, горелки (спиртовки), спички, кедровое масло, окрашенные препараты стрептококка и диплококка, таблица - морфология микробов.
Пробирки с взвесями бактерий (сальмонелл, стафилококков, эшерихий, вакцинного штамма сибирской язвы, атипичных микобактерий), спирт, раствор Люголя, генцианвиолет, фуксин Циля, 5% раствор серной кислоты, синька Леффлера, микробиологические петли, сливные чашки с мостиками, вода в колбах для смыва красителей с мазков, карандаши или чернила по стеклу, горелки, (спиртовки), микроскопы, иммерсионное (кедровое) масло, таблицы методов окраски.
Сложные методы окраски - применение нескольких растворов красителей и реактивов. Они основаны на физико-химических различиях состава микробных клеток. Эти методы позволяют помимо морфологии бактерий, определить их тинкториальные особенности (различное окрашивание при использовании специальных методов) и наличие или отсутствие структурных элементов клетки (капсула, спора), что имеет важное дифференциально-диагностическое значение. Химический состав и строение клеточной стенки микробов различны, поэтому они окрашиваются одними и теми же красителями по-разному и неодинаково отдают их при последующем обесцвечивании этиловым спиртом, кислотами и другими реактивами. Части микробной клетки избирательно реагируют на красящие растворы. На этом свойстве основаны сложные (дифференциальные) методы окрашивания микробов. Для сложного окрашивания используют несколько красителей. В лабораторной практике применяют методы Грама, Циля–Нильсена, Козловского и др.
Окраска по Граму. Метод Грама (модификация по Синеву). Этот метод позволяет все микроорганизмы разделить на две группы: грамположительные (Гр+) и грамотрицательные (Гр–).
На фиксированный мазок наносят:
-
Кусочек фильтровальной бумаги пропитанной 1%-ым спиртовым раствором генцианвиолета. Наносят на бумажку 2-3 капли воды и окрашивают 2-3 минуты. Бумажку снимают, не промывают.
-
Наносят раствор Люголя на 2 минуты, смывают.
-
Обрабатывают 96%-ным этиловым спиртом в течение 20-30 секунд и тщательно промывают мазок водой.
-
Окрашивают мазок фуксином в течение 2-3 минут и промывают водой.
-
Высушивают и микроскопируют.
Микроскопическая картина: грамположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные – в розовый.
Окраска микроорганизмов по этому методу зависит от химического состава клеточной стенки (наличие муреина и частично липида), цитоплазмы и pH среды.
Окраска по Цилю-Нильсену. На фиксированный мазок наносят:
Небольшой кусок фильтровальной бумаги, на него наносят раствор карболового фуксина, снизу препарат подогревают над пламенем горелки до появления паров и оставляют на «мостике» 5-7 минут. Затем краску с бумажкой сливают (не промывая). Наносят 3-5% раствор серной кислоты, окрашивают 5-7 минут, хорошо промывают водой. Затем добавляют раствор метиленовой сини (по Леффлеру), окрашивают 4-5 минут. Препарат промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.
Микроскопическая картина: кислото-спиртоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет (не обесцвечиваются кислотой), некислотоустойчивые – в синий (окрасившись первоначально фуксином в красный цвет, легко обесцвечиваются кислотой и воспринимают дополнительную окраску метиленовой сини).
Задания
1 Приготовить и окрасить препарат методом Грама.
2 Зарисовать препараты из микробных культур.
3 Отработать методику сложного метода окраски по Цилю-Нильсену.
Вопросы для самоконтроля знаний
1 Что такое сложные способы окрашивания?
2 Какие существуют сложные способы окрашивания?
3 Методика окрашивания по Граму.
4 Методика окрашивания по Цилю-Нильсену?
Библиографический список
-
Асонов, Н. Р. Микробиология [Текст] : учеб. для студ. Вузов по спец. 310700 «Зоотехния» / Н. Р. Асонов. – 4-е изд., перераб. И доп. – М.: Колос, 2001.
-
Ветеринарная микробиология и иммунология [Текст] : учеб. для студ. вузов по спец. «Ветеринария» / Н. А. Радчук, Г. В. Дунаев, Н. М. Колычев [и др.] ; под ред. Н. А. Радчука. – М. : Агропромиздат, 1991.
-
Кисленко, В. Н. Ветеринарная микробиология и иммунология [Текст]: учебник для студ. Вузов, обуч. По спец. 111201 «Ветеринария» / В. Н. Кисленко, Н. М. Колычев. – М. : КолосС, 2006 – 2007.Ч .1Общая микробиология
-
Кисленко, В. Н. Ветеринарная микробиология и иммунология [Текст]: учебник для студ. Вузов, обуч. По спец. 111201 «Ветеринария» / В. Н. Кисленко, Н. М. Колычев ; Международная ассоциация «Агрообразование». – М. : КолосС, 2006 – 2007.Ч.3 Частная микробиология
-
Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии [Текст] : учеб. для студ. вузов по спец. «Ветеринария» / Р.Г.Госманов, Н.М. Колычев, А.А. Барсков. – Омск: Изд-во ОМГАУ, 2008. – 309 с.
-
Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии [Текст] : учеб. для студ. вузов по спец. «Ветеринария» / В.Н. /В.Н.Кисленко. – М.: КолосС, 2005. – 230 с.
-
Руководство по микробиологии и иммунологии [Текст]: учеб. пособие для студ. Вузов, обучающихся по спец. «Ветеринария», «Ветеринарно-санитарная экспертиза» : допущено МСХ / [Н. М. Колычев и др.] ; под. Общ. Ред. Н. М. Колычева, В. Н. Кисленко. - Новосибирск: Арта, 2010. - 254 с