Дробление и бластуляция
.docТема: ДРОБЛЕНИЕ И БЛАСТУЛЯЦИЯ
Цель занятия: изучить ранние этапы дробления разных типов голобластического дробления (на примере лошадиной аскариды, морского ежа, лягушки),
Препарат 9. Дробление яиц лошадиной аскариды. Железный гематоксилин.
При малом увеличении в полости матки видно множество зародышей в стадии двух или четырех бластомеров. Следует выбрать подходящие зародыши и подробно изучить их под большим увеличением.
В противоположность подавляющему большинству яиц веретено первого деления дробления у аскариды ориентировано меридионально, и первая борозда проходит приблизительно экваториально. В яйцах, завершивших первое деление дробления, видны два бластомера одинаковой величины, на образование которых израсходован весь материал зиготы. Это свидетельствует о полном и равномерном дроблении. В пенистой цитоплазме бластомеров находится интерфазное ядро с глыбками хроматина и ядрышком.
Веретена второго деления дробления располагаются перпендикулярно (анимальный бластомер разделяется меридиональной бороздой, а вегетативный – широтной). В результате четыре образовавшихся бластомера образуют Т-образную фигуру. Затем в следующей интерфазе вегетативная пара бластомеров поворачивается относительно анимальной, и Т-образная фигура преобразуется в ромбическую.
На ранних этапах дробления в яйцах отчетливо видны редукционные тельца: первые два – под оболочкой яйца, третье – или на поверхности зародыша, или в перивителлиновом пространстве.
Задание: зарисовать яйцо аскариды на первых двух делениях дробления. Указать тип дробления.
Рис. 1 Дробление (какое?) яйцеклетки лошадиной аскариды. Железный гематоксилин. Об. х 40.
А – стадия двух бластомеров;
В– стадия четырех бластомеров (указать: до интерфазного поворота или после него, ориентируясь по форме зародыша).
Препарат (без номера). Дробление яйцеклетки иглокожих.
Препарат представляет собой расположенные свободно под покровным стеклом и окрашенные гематоксилин-эозином зародыши морского ежа на разных стадиях дробления от зиготы до целобластулы (у морских ежей она округлая).
Задание: Зарисовать зародыши на стадиях: зиготы, двух, четырех, восьми бластомеров и целобластулы с соблюдением размеров и взаиморасположения бластомеров. Указать тип дробления.
Рис. 2. Дробление (какое?) яйцеклетки морского ежа. Гематоксилин-эозин. Об. х40.
А – стадия зиготы;
Б – стадия двух бластомеров;
В – стадия четырех бластомеров;
Г – стадия восьми бластомеров;
Д – стадия целобластулы.
Препарат 10. Дробление яйца лягушки. Меридиональный срез икринки. Гематоксилин-пикрофуксин.
Препарат следует рассматривать при малом увеличении. Икринки, используемые при приготовлении препаратов, обычно состоят из двух, четырех, восьми и более бластомеров, не все из которых попадают в плоскость сечения. Поэтому их число на срезе, чаще всего, меньше чем в целой икринке. Наличие на срезе двух бластомеров свидетельствует, что срез сделан с икринки на стадии двух или четырех бластомеров. Обнаружение на срезе двух анимальных (меньших по размеру) микромеров и двух вегетативных макромеров, отделенных меридиональной и широтной бороздами свидетельствует, что срез сделан на стадии восьми бластомеров. Иногда на препарате видно нечетное число бластомеров, что зависит от плоскости среза.
Помимо размеров микромеры отличаются от макромеров более значительной пигментацией (при окрашивании гематоксилин-пикрофуксином желток окрашивается в желтый цвет, а пигмент выглядит коричневым).
Срезы дробящихся яиц лягушки иллюстрируют их полное неравномерное дробление. Следует отметить полость, иногда наблюдаемую между бластомерами, которая не имеет отношения к бластоцелю, а является результатом фиксации (артефактом). Бластоцель же появляется на стадии 32-х бластомеров.
Задание: Научиться различать стадии дробления зародыша лягушки. Зарисовать при малом увеличении зародыш лягушки, желательно на стадии восьми бластомеров. Использовать цвет для обозначения различий между макро- и микромерами.
Рис. 7. Дробление (какое?) яйцеклетки лягушки (меридиональный срез). Гематоксилин-пикрофуксин. Об х8. Стадия (скольки?) бластомеров.
Обозначения: 1– анимальные микромеры;
2 – вегетативные макромеры;
3 – меридиональная борозда;
4 – широтная борозда.
Препарат 11. Бластула лягушки. Меридиональный срез. Гематоксилин-пикрофуксин.
Препарат следует рассмотреть при небольшом увеличении, расположив амфибластулу анимальным полюсом вверх. Зародыш имеет сферическую форму. Его стенка (бластодерма) состоит из нескольких слоев клеток, бластоцель расположен эксцентрично (смещен к анимальному полюсу). Хорошо заметны более тонкая пигментированная анимальная часть – крыша, более массивная светлая вегетативная часть – дно и расположенная между ними экваториальная или «краевая» зона.
Ранняя амфибластула. Крыша бластоцеля состоит из одного слоя микромеров, которые меньше по размерам, сильнее пигментированы, содержат меньшее количество желтка, чем крупные вегетативные макромеры (пигмент микромеров унаследован из кортикального слоя яйца). Он располагается как вокруг ядра, так и вдоль внешнего края клеток, которые пока сохраняют округлую форму, но довольно плотно примыкают друг к другу.
Макромеры значительно богаче желтком, который располагается в них в виде крупных округлых гранул, но лишены пигмента. Эти клетки также имеют округлую форму, лишь местами соприкасаясь между собой.
Между микро- и макромерами в краевой зоне располагаются клетки промежуточного размера – мезомеры.
Поздняя амфибластула. Крыша бластоцеля состоит из 2 – 3 рядов микромеров, которые утрачивают округлые очертания и плотно прилегают друг к другу, при этом в их расположении намечается эпителиальный характер. Пигмент наследуют только клетки внешнего слоя, в остальных микромерах он утрачивается. Клетки массивной вегетативной части в этот период еще сохраняют округлую форму и не проявляют признаков эпителизации. В «краевой» зоне мезомеры формируют 3 – 4 ряда клеток, тогда как в вегетативной стенке клетки не образуют правильных рядов
Следует обратить внимание, что размеры бластулы не превышают размеров яйца. Это связано с тем, что в процессе дробления происходит распределение единой цитоплазмы яйца между образующимися бластомерами без увеличения ее объема. При этом восстанавливается нарушенное ядерно-плазменное отношение.
Задание: рассмотреть зародыш лягушки, определить стадию бластулы и зарисовать при малом увеличении. На большом увеличении рассмотреть крышу бластоцеля, обращая внимание на распределение пигмента. На рисунке показать распределение пигмента в клетках амфибластулы.
Рис 1 Амфибластула лягушки (какая?). Гематоксилин-пикрофуксин. Об. х 8.
Обозначения:
1– крыша;
2– дно;
3 – краевая зона;
4 – бластоцель;
5– микромеры;
6 – макромеры;
7– мезомеры.
Контрольные вопросы:
1. Каковы особенности первых делений дробления у лошадиной аскариды? Какой это тип дробления?
2. Каковы особенности первых делений дробления у лягушки? Какой это тип дробления?
3. В чем особенности строения бластулы лягушки ? К какому типу она относится?
4. Как отличить раннюю амфибластулу лягушки от поздней?