лекции по микре гомель

2.Дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина, Плоскирева — плотные агаризованные среды, содержащие дифференцирующий углевод лактозу и обесцвеченный индикатор.

Разлагающие лактозу кишечные палочки дают рост окрашенных колоний в зависимости от типа среды: красный (среда Эндо), темно-синий (среда Левина). Лактозонегативные энтеробактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева дают бесцветные колонии.

3.Среды накопления чистой культуры ― двухсахарный агар Клиглера.

Среда состоит из столбика и скошенной части агаризованный среды с лактозой и глюкозой, индикатором и реагентами для определения сероводорода и уреазы.

Посев производят штрихом по поверхности скошенной части и уколом в столбик. При росте микробов глюкоза лучше разлагается в столбике, лактоза на скосе, в результате чего дифференцированно меняется цвет среды.

•Ферментация лактозы — изменение цвета скоса.

•Ферментация глюкозы — изменение цвета столбика.

•При образовании газа — пузырьки и разрывы в среде.

•При продукции сероводорода — почернение по ходу укола.

•При ферментации мочевины — изменение цвета среды на малиновый.

Идентификация выделенных чистых культур основана на морфологических, культуральных, биохимических признаках и антигенной структуре:

а) грамотрицательные палочки (признак общий для семейства); б) наличие капсулы (у клебсиелл); в) цвет колоний на чашечных средах;

г) подвижность (сальмонеллы и эшерихии подвижны, шигеллы и клебсиеллы неподвижны); д) биохимические свойства (ферментация углеводов пестрого ряда Гисса,

продукция индола, сероводорода, аммиака и др.); е) антигенная структура. Определяют в реакции агглютинации с

поливалентными и монорецепторными агглютинирующими сыворотками — серотипирование до серогруппы и серовара.

ЭШЕРИХИИ

Таксономия

Царство: Procaryotae; Отдел: Gracilicutes; Семейство: Enterobacteriaceae; Род: Escherichia; Вид: Escherichia coli.

В пределах вида по О-, Н- и К(В)- антигенам различают серогруппы и серовары.

151

Морфология и тинкториальные свойства. Подобно большинству энтеробактерий. Особенности: имеют жгутики (перитрихи), могут быть атрихи.

Биологические свойства

Хемоорганотрофы, факультативные анаэробы. Не требовательны к питательным средам и условиям культивирования. Для культивирования используются следующие типы питательных сред:

1.Простые — МПБ, МПА. Рост на МПБ в виде помутнения, на МПА — S- и R-типы колоний.

2.Дифференциально-диагностические — среды Эндо, Левина, Плоскирева

—плотные агаризованные среды, содержащие дифференцирующий углевод лактозу и обесцвеченный индикатор. Разлагающие лактозу кишечные палочки дают рост окрашенных колоний в зависимости от типа среды: красные (среда Эндо), темно-синие (среда Левина).

3.Среды накопления чистой культуры — агар Клиглера. E.coli, ферментирующая лактозу и глюкозу до кислоты и газа, дает пожелтение и разрыв среды на скосе и в столбике.

Ферментативная активность высокая. В отличие от других энтеробактерий, E.coli ферментирует лактозу и другие углеводы до кислоты и газа.

Антигены

Антигенная структура эшерихий типична для всего семейства энтеробактерий. Выделяют соматический (О-), жгутиковый (Н-) и поверхностный (К-) антигены. Основным является липополисахаридный О-антиген, специфичность которого положена в основу деления эшерихий на серогруппы (известно более 170 О-серогрупп).

Экология и распространение

Непатогенные эшерихии обитают в толстом кишечнике — нормальная микрофлора. Их относят к серогруппам О2, О7, О9 и др.

Физиологическая роль эшерихий кишечника.

Обеспечивают антиинфекционную защиту (колонизационная резистентность и стимуляция развития лимфоидной ткани).

С фекалиями эшерихии постоянно выделяются в окружающую среду, длительно сохраняясь в воде и почве. Они являются санитарнопоказательными микроорганизмами, указывающими на степень фекального загрязнения объектов внешней среды.

Диареегенные эшерихии принадлежат к определенным серогруппам.

152

Классификация патогенных эшерихий

ШИГЕЛЛЫ

Бактериальная дизентерия (шигеллез) — кишечная антропонозная инфекция, вызываемая бактериями рода шигелла, протекающая с

153

преимущественным поражением слизистой оболочки толстого кишечника, частым жидким стулом с примесью слизи и крови, общей интоксикацией.

Таксономия

Царство: Procaryotae; Отдел: Gracilicutes; Семейство: Enterobacteriaceae; Род: Schigella; Виды: S. dysenteriae; S. flexneri; S. boydii; S. sonnei.

Морфология и тинкториальные свойства (особенности)

Короткие, относительно толстые, с закругленными концами палочки. Атрихи.

Биологические свойства

Хемоорганотрофы, факультативные анаэробы, не требовательны к питательным средам и условиям культивирования. Дифференциально-диагностические среды Плоскирева, Левина, Эндо. Не разлагающие лактозу шигеллы дают рост неокрашенных колоний. Элективно-дифференциальной для шигелл является среда Плоскирева. Содержит соли желчных кислот, угнетающих рост эшерихий.

Среда накопления чистой культуры — агар Клиглера. Ферментирующие глюкозу и не ферментирующие лактозу шигеллы изменяют цвет среды только в столбике. Нет газообразования.

Ферментативная активность

1.Шигеллы ферментируют углеводы с образованием кислоты без газа.

2.Все шигеллы лактозонегативны, за исключением S. sonnei,

ферментирующей лактозу через 24−48 часов.

3.Все шигеллы не образуют H2S, не обладают уреазной активностью.

Антигены

Выделяют общие для семейства Enterobacteriaceae, родовые, видовые, групповые и типоспецифические О-антигены, а также К-антигены. Н- антигенов у них нет.

Факторы патогенности

1.Адгезия и колонизация слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта. Функцию адгезинов выполняют пили, белки наружной мембраны и ЛПС.

2.Факторы инвазии. Обеспечивают проникновение шигелл в энтероциты и размножение в них с одновременным проявлением цитотоксического действия.

3.Эндотоксин. Обладает энтеротропным, нейротропным и пирогенным действием.

4.Экзотоксин Шига — нейротоксин, цитотоксические свойства которого наиболее сильно выражены у S. dysenteriae.

5.Шигоподобные токсины (SLT-I, SLT-II). Синтез кодируется плазмидными генами. Взаимодействуют с аденилатциклазной системой, обладают диареегенным действием.

Эпидемиология, патогенез и клиника заболевания (особенности)

154

Источник инфекции — больной человек, носитель. Механизм передачи — фекально-оральный.

Патогенез (особенности): фекально-оральный путь поступления микроба в организм Æ адгезия, инвазия, внутриклеточное размножение в эпителиоцитах Æ разрушение клеток Æ выход шигелл в просвет кишечника Æ повторение цикла Æ развитие клинической картины заболевания.

Клиника заболевания определяется видом возбудителя. При шигеллезе Зонне преобладают симптомы гастроэнтерита; шигеллезе Флекснера — колитический синдром; шигеллезе Григорьева-Шиги — колит с нейротоксикозом (тяжелая форма инфекции).

Лабораторная диагностика

1. Бактериологический метод (основной).

Фекалии Æ посев на среды Плоскирева, Левина, Эндо Æ постановка РА на стекле бесцветных колоний со смесью шигеллезных сывороток Æ откол агглютинабельных колоний на среду Олькеницкого (изменение цвета среды в столбике) Æ определение серогруппы (серовара) в РА с группо- и типоспецифическими шигеллезными сыворотками на стекле и при положительном результате в пробирках Æ проба на подвижность (-) Æ определение биохимической активности Æ антибиотикограмма Æ циногенотипирование.

2.Серологический метод. Со второй недели заболевания постановка РА, РНГА с сывороткой больного — определение титра антител или динамики нарастания титра антител при повторной постановке реакций.

3.Экспресс-диагностика. Для выявления шигеллезных антигенов в исследуемом материале могут быть использованы РИФ, ИФА.

САЛЬМОНЕЛЛЫ Сальмонеллез — острая кишечная инфекция, вызываемая различными

серотипами бактерий рода Salmonella, характеризуется разнообразными клиническими проявлениями от бессимптомного носительства до тяжелых септических форм. В большинстве случаев протекает с поражением органов пищеварительного тракта (гастроэнтериты, колиты). Возможны генерализованные формы инфекции.

Брюшной тиф — тяжелое острое инфекционное заболевание, характеризующееся глубокой общей интоксикацией, бактериемией, увеличением печени и селезенки, энтеритом и специфическим поражением лимфатического аппарата тонкого кишечника.

В Беларуси сальмонеллезы занимают первое место в структуре острых кишечных инфекций бактериальной этиологии.

Таксономия

155

Царство: Procaryotae; Отдел: Gracilicutes; Семейство: Enterobacteriaceae; Род: Salmonella.

Род Salmonella включает два вида:

1.S. enterica, в пределах которого выделяют шесть подвидов: 1). S. enterica подвид enterica;

2). S. enterica подвид salamae;

3). S. enterica подвид arizonae;

4). S. enterica подвид diarizonae;

5). S. enterica подвид houtenae;

6). S. enterica подвид indica;

2.S. bongori.

Морфология и тинкториальные свойства — особенности. Перитрихи,

обладают активной подвижностью.

Биологические свойства

Хемоорганотрофы, факультативные анаэробы, не требовательны к питательным средам и условиям культивирования.

Используются следующие типы питательных сред:

1. Простые — МПБ, МПА. Рост на МПБ в виде помутнения, на МПА образуются нежные круглые, гладкие, полупрозрачные колонии диаметром 2−4 мм (S-тип). В случае диссоциации на плотных средах вырастают колонии R-типа.

2.Среды обогащения: селенитовый бульон, среда Мюллера.

3.Дифференциально-диагностические среды — Левина, Эндо, висмутсульфитный агар. Не разлагающие лактозу сальмонеллы на средах Левина, Эндо дают рост неокрашенных колоний. На висмут-сульфитном агаре — серо-черные колонии.

4.Среды накопления чистой культуры — агар Клиглера. Не ферментирующие лактозу сальмонеллы изменяют цвет среды только в

столбике и дают почернение среды (Н2S+). Ферментативная активность

Обладают меньшей ферментативной активностью по сравнению с E. coli. Не ферментируют лактозу и сахарозу. Ферментируют глюкозу, мальтозу, маннит с образованием кислоты и газа (КГ). Образуют сероводород, индолнегативны.

Антигены. Классификация.

Имеют О- (соматический), Н- (жгутиковый) и К- (капсульный) антигены. На основании иммунореактивности O- антигена и H- антигена выделены серотипы сальмонелл.

Серологическая классификация сальмонелл по антигенным формулам приведена в схеме Кауффмана-Уайта.

По О-антигенам проводится разделение сальмонелл на серогруппы, по Н- антигенам — на серотипы.

156

В настоящее время описано более 2500 серотипов сальмонелл.

У S. Typhi помимо О- и Н-антигенов имеет еще один поверхностный антиген, который они назвали антигеном вирулентности (Vi-антигеном).

Факторы патогенности сальмонелл:

1 факторы адгезии и колонизации;

2.факторы инвазии;

3.эндотоксин;

4.термолабильные и термостабильные энтеротоксины типов LT, ST и шигоподобный цитотоксин.

Экзотоксины выделяются лишь после разрушения бактериальных клеток. Заболевания, вызываемые сальмонеллами — брюшной тиф и сальмонеллезы.

Возбудитель брюшного тифа — S.Typhi, паратифов — S.Paratyphi A, S.Paratyphi B и S.Paratyphi C.

Брюшной тиф

Эпидемиология

Брюшной тиф относится к кишечным антропонозам. Единственным источником и резервуаром инфекции является человек. Источником инфекции чаще всего являются хронические бактерионосители возбудителя брюшного тифа, которые, оставаясь практически здоровыми, выделяют сальмонеллы в течение продолжительного времени (годы и даже десятки лет). Заражение людей происходит при употреблении инфицированной воды или пищи. Контактно-бытовой путь передачи S. Typhi наблюдается редко.

Патогенез

В развитии болезни выявляются следующие стадии:

1)инкубационный период. Возбудитель через рот проникает в тонкий кишечник; через лимфатические пути сальмонеллы проникают в лимфоидные образования подслизистой оболочки тонкого кишечника (пейеровы бляшки и солитарные фолликулы), размножаются в них, вызывая воспаление;

2)бактериемия (1-я неделя) — выход возбудителя в большом количестве в кровь. Часть бактерий распадается под действием бактерицидных свойств крови, высвобождается эндотоксин (ЛПС), развивается интоксикация;

3)стадия паренхиматозной диффузии (2-я неделя). Из крови сальмонеллы поглощаются макрофагами костного мозга, селезенки, лимфатических узлов, печени и других органов. В большом количестве возбудитель брюшного тифа накапливается в желчных ходах печени и в желчном пузыре;

4)выделительно-аллергическая стадия (3-я неделя). По мере формирования иммунитета начинается процесс освобождения от

157

возбудителя. Этот процесс осуществляют все железы: слюнные, кишечника, потовые, молочные (во время кормления ребенка), мочевыделительная система и особенно активно — печень и желчный пузырь. Выделяющиеся из желчного пузыря сальмонеллы опять поступают в тонкий кишечник, откуда часть их выделяется с испражнениями, а часть вторгается вновь в лимфатические узлы. Вторичное внедрение в уже сенсибилизированные узлы вызывает в них гиперергическую реакцию, которая проявляется в виде некроза и образования язв. Эта стадия опасна возможностью прободения стенки кишечника (язв), внутреннего кровотечения и развития перитонита; 5) стадия реконвалесценции (выздоровления) — (4-я неделя).

Клиника

Инкубационный период 12−14 дней. Заболевание начинается на стадии бактериемии. Характеризуется бредом, помрачением сознания, розеолезной сыпью. Тяжелыми осложнениями заболевания являются перитонит, кишечные кровотечения в результате некроза лимфатических образований тонкой кишки.

У людей, перенесших брюшной тиф, формируется напряженный, пожизненный иммунитет. Повторные заболевания наблюдаются редко. Методы диагностики — бактериологический и серологический.

Выбор исследуемого материала и метода диагностики в зависимости от этапа заболевания

158

Выделение гемокультуры

1.Посев крови на среду Раппопорт (в соотношении 1:10).

2.Высев со среды Раппопорт на среду Эндо.

3.Откол лактозонегативных колоний со среды Эндо на трехсахарный агар.

4.Учет биохимических свойств на трехсахарном агаре.

5.Серотипирование выделенной культуры в реакции агглютинации на стекле с поливалентными и монорецепторными О- и Н-сальмонеллезными сыворотками.

6.Биохимическая идентификация, определение антибиотикорезистентности.

Выделение копрокультуры (уринокультуры, биликультуры)

1.Посев на среду обогащения (Мюллера, селенитовый бульон).

2.Высев со среды обогащения на среды Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар.

3.Реакция агглютинации на стекле лактозонегативных колоний с сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками.

Дальнейший ход исследования см. «Выделение гемокультуры».

Серодиагностика тифо-паратифозных заболеваний. Используются следующие реакции:

1.Реакция Видаля — реакция агглютинации (антитела появляются в конце первой недели от начала заболевания). Реакция ставится с четырьмя диагностикумами: О-брюшнотифозный монодиагностикум, Н- брюшнотифозный монодиагностикум, ОН-паратифозный А диагностикум, ОН-паратифозный В диагностикум. Диагностический титр реакции равен

1:200.

2.Реакция непрямой Vi-гемагглютинации для выявления Vi-антител в сыворотке крови реконвалесцентов и бактерионосителей. Антиген — эритроцитарный Vi-диагностикум (взвесь эритроцитов, обработанных формалином и сенсибилизированных Vi-антигеном). Положительный результат — эритроциты оседают в виде диска с неровными краями, отрицательный — в виде “пуговки” с ровными краями.

Специфическая профилактика — вакцинация химической сорбированной брюшнотифозной моновакциной.

Сальмонеллезы

Эпидемиология

Первичным источником сальмонелл являются животные: крупный рогатый скот, свиньи, водоплавающие птицы, куры, синантропные грызуны и большое число других животных. Дополнительным источником может быть человек (больной, носитель).

159

При внутрибольничном сальмонеллезе человек является основным источником инфекции.

Механизм передачи — фекально-оральный, контактно-бытовой (при внутрибольничном сальмонеллезе).

Современная эпидемиология сальмонеллезов характеризуется ростом заболеваемости людей и животных и преобладанием в этиологической структуре нескольких доминирующих серотипов (S.Enteritidis и S.Typhimurium), на долю которых приходится до 90% случаев заболеваний сальмонеллезами. Среди возбудителей преобладают штаммы с множественной устойчивостью к антибиотикам.

Стадии патогенеза:

•попадание сальмонелл в ЖКТ с пищей;

•размножение и гибель;

•выделение факторов патогенности (эндотоксин, LT, ST энтеротоксины, цитотоксин);

•нарушение водно-солевого обмена;

•интоксикация

(гастроинтестинальная форма).

•При нарушении барьерной функции лимфоидного аппарата кишечника развивается бактериемия с поражением внутренних органов

(генерализованная форма инфекции).

Лабораторная диагностика

Исследуемый материал: рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, остатки пищевых продуктов.

I. Бактериологический метод. Этапы метода:

1.Посев на среду обогащения (Мюллера, селенитовый бульон);

2.Высев со среды обогащения на среды Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар;

3.Откол лактозонегативных колоний на трехсахарный агар;

4.Контроль чистоты выделенной культуры;

5.Учет биохимических свойств на трехсахарном агаре: глюкоза (КГ);

маннит (КГ), мальтоза (КГ); лактоза и сахароза ― нет ферментации; H2S+, индол-.

6.Серотипирование выделенной культуры в РА на стекле с поливалентными и монорецепторными О- и Н-сальмонеллезными сыворотками.

7.Биохимическая идентификация.

Определение антибиотикорезистентности. II. Серологический метод.

160