лекции по микре гомель

• контактно-бытовой.

Специфическая профилактика и лечение. Для специфической профилактики применяют живую ослабленную вакцину из штамма Грита (вариант М-44), который выращивают в желточных мешках 6−7-дневных куриных эмбрионов. В первую очередь вакцинируют лиц, подвергающихся опасности заражения по профессиональной деятельности и прибывающих для работы в неблагополучные по Ку-лихорадке районы. Прививка одноразовая, накожная. Ревакцинацию проводят через два года. Наилучший этиотропный эффект при лечении Ку-лихорадки оказывают тетрациклины и левомицетин.

Лабораторная диагностика риккетсиозов

Методы выделения риккетсий

Альтернатива культуральному методу — детекция и идентификация ДНК риккетсий в ПЦР (молекулярно-генетическая диагностика). Серодиагностика риккетсиозов (основной метод)

Используемые серологические реакции: РИФ (непрямая), реакция агглютинации риккетсий (РАР), РНГА, РСК, ИФА с растворимым антигеном R.prowazekii.

РНГА в серодиагностике сыпного тифа РНГА при сыпном тифе ставится с единым групповым антигеном и не

может быть использована для дифференциации риккетсиозов в пределах группы.

Для дифференциации эпидемического (R.prowazekii) и эндемического (R. typhi) сыпного тифа параллельно ставят РА с двумя диагностикумами. В случае эндемического сыпного тифа диагностический титр с R. typhi в 3−4 раза превосходит титр к риккетсиям Провацека.

231

РНГА при дифференциации первичного сыпного тифа от болезни Брилла В сыворотке заболевших первичноактивной формой сыпного тифа обнаруживаются IgM, а у реконвалесцентов и при болезни Брилла — IgG. Для дифференциации первичного сыпного тифа от повторного используют обработку сыворотки 2-меркаптоэтанолом, что приводит к разрушению дисульфидных связей IgM и потере их активности, не изменяя в то же время структуры и иммунологической специфичности действия IgG.

Для дифференциации первичного сыпного тифа от болезни Брилла в настоящее время используется иммуноферментный анализ (тест-системы для обнаружения IgG, IgM и суммарных иммуноглобулинов).

Кожно-аллергическая проба для диагностики Ку-лихорадки. Используют корпускулярный аллерген из автоклавированных коксиелл Бернета. Вводят его внутрикожно в объеме 0,1 мл в область предплечья. В положительных случаях через 30−36 ч возникает гиперемия с инфильтратом диаметром

20−25 мм.

ПАТОГЕННЫЕ ХЛАМИДИИ

Таксономия

Царство Procaryotae, отдел Gracilicutes, порядок Chlamydiales, семейство: Chlamydiaceae.

Роды: Chlamydia, Chlamydophila

Виды: Chlamydia trachomatis, Chlamydophila psittaci, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydophila pecorum

Отличие хламидий от истинных прокариот:

•мелкие размеры элементарных телец (внеклеточных форм) — 0,3−0,6−1,5 мкм;

•облигатный внутриклеточный паразитизм (хламидии не имеют систем мобилизации энергии, используют АТФ клетки хозяина);

•длительная персистенция в организме хозяина;

•непрокариотный цикл размножения.

Морфология и цикл развития

Основные стадии жизненного цикла хламидий:

1)элементарные тельца — мелкие (0,2−0,5 мкм) электронноплотные шаровидные структуры, имеющие компактный нуклеоид и ригидную трехслойнуюклеточнуюстенку;

2)инициальные (исходные), или ретикулярные тельца — большие

(0,8−1,5 мкм в диаметре) сферические образования, имеющие сетчатую структурус тонкойклеточнойстенкойифибриллярнымнуклеоидом; 3) промежуточные тельца — промежуточная стадия между элементарными и ретикулярными тельцами.

232

Элементарные тельца являются инфекционной, а ретикулярные — вегетативнойформойхламидий.

Вегетативные формы размножаются путем бинарного деления внутриклеточно, но не инфекционны, когда выделяются из клеткихозяина. Жизненный цикл хламидий начинается с того, что элементарные тельца фагоцитируются клеткой-хозяином, а затем в течение нескольких часов реорганизуются, увеличиваются в размерах и превращаются в ретикулярные формы, которые размножаются путем поперечного деления. Образующиеся дочерние формы также размножаются путем бинарного деления. Жизненный цикл заканчивается, когда возникающие промежуточные формы реорганизуются (уплотняются), уменьшаются в размерах и превращаются в элементарные тельца. После разрыва стенки везикулы и мембраны клетки-хозяина вновь образовавшиеся хламидий высвобождаются, и элементарные тельца, инфицируя другие клетки, повторяютциклразвития.

При окрашивании по Романовскому-Гимзе хламидии приобретают голубой или фиолетовый цвет. Хламидий хорошо видны и в неокрашенном состоянии при микроскопии влажных препаратов под стеклом с помощью фазовоконтрастной оптической системы.

Рисунок 12 − Цикл развития хламидий

233

Факторы патогенности хламидий:

•компоненты клеточной стенки (блокируют слияние фагосом с лизосомами фагоцитов);

•экзотоксины;

•эндотоксины.

Классификация представителей семейства Chlamydiaceae и вызываемые ими заболевания

Лабораторная диагностика

Исследуемый материал:

•соскоб конъюнктивы глаза при трахоме;

•мокрота при орнитозе;

•соскоб и отделяемое уретры, вагины,моча при урогенитальном

хламидиозе. Используемые методы

1.Цитологический метод. Обнаружение хламидийных включений в пораженных клетках.

2.Иммуноцитологический метод. Выявление антигенов в исследуемом материале в РИФ, ИФА.

3.Молекулярно-генетический метод (ПЦР и др.).

5.Серодиагностика: ИФА (обнаружение IgM, IgG), непрямая РИФ, РСК, РТГА. Ставятся с парными сыворотками.

6.Аллергодиагностика.

234

Лекция 22

Общая вирусология. Принципы диагностики, специфической профилактики и терапии вирусных инфекций. Противовирусный иммунитет.

Предмет изучения раздела медицинской вирусологии - эпидемиология, патогенез, клиника заболеваний, вызываемых вирусами, а также методы лабораторной диагностики, специфической профилактики и лечения вирусных инфекций.

Вирусы — автономные генетические структуры, способные функционировать и размножаться в восприимчивых к ним клетках животных, растений, простейших и бактерий. Они не являются организмами, но, тем не менее, представляют собой своеобразную форму жизни.

Фундаментальные cвойства вирусов:

1.Наличие в качестве генома одного типа нуклеиновой кислоты ДНК или РНК.

2.Особый дисъюнктивный способ размножения, т.е. воспроизводство структур вирусов в клетке в разных местах и в разное время с последующим формированием зрелых вирионов путем самосборки.

3.Отсутствие собственных белоксинтезирующих и энергообменных систем.

Формы существования и структурная организация вирусов

Для вирусов характерны две формы существования

•внеклеточная, корпускулярная (покоящаяся) — вирион, элементарное тельце;

•внутриклеточная:

а) репродуцирующаяся б) интегративная

Вирусы репродуцируются только в живых клетках. Они прикрепляются своими специфическими рецепторами к рецепторам пермиссивной (чувствительной) клетки. Специфические рецепторы определяют и дальнейшую судьбу вирусной частицы, ее доставку в определенные участки цитоплазмы или ядра, где вирус способен инициировать инфекционный процесс.

Просто организованные вирусы животных содержат прикрепительные белки в составе капсида, а у сложных вирусов эти белки входят в состав суперкапсида и часто представлены множественными молекулами.

Проникновение вируса в клетку может происходить двумя путями:

— путем виропексиса или эндоцитоза;

235

— путем слияния вирусной и клеточной мембран. Чаще всего эти два механизма дополняют друг друга.

После проникновения в клетку вирус теряет свои оболочки и инфекционную активность. Эта фаза носит название эклипс-фазы. Нуклеиновая кислота вируса освобождается и генетическая информация вируса может быть реализована.

ДНК-содержащие вирусы по месту репродукции в клетке делят на 2 группы:

•ядерные ( не имеют в своем составе ДНК-полимеразы);

•цитоплазматические (содержат в своем составе ДНК-полимеразу). Синтез вирусных белков осуществляется в клетке на рибосомах.

Существует два способа формирования вирусных белков:

•иРНК транслируется в гигантский белок-предшественник, который затем нарезается на зрелые функционально активные белки;

•короткие иРНК сразу транслируются с образованием зрелых белков, которые лишь незначительно модифицируются.

Сборка вирионов происходит в клетке по принципу белокнуклеинового и белок-белкового узнавания. Выход вирусов из клетки происходит двумя путями:

•простые вирусы выходят путем «взрыва» или лизиса;

•сложные вирусы выходят путем почкования, сохраняя на какое-то время жизнеспособность клетки.

Классификация вирусных инфекций.

На уровне клетки:

•автономная;

•интеграционная.

При автономной инфекции вирусный геном реплицируется независимо от клеточного. Этот тип инфекции может протекать как продуктивная или как абортивная.

Различают понятия «дефектные вирусы» и «дефектные частицы». Дефектные вирусы — это вирусы, не способные вообще размножаться без участия других вирусов-помощников, а дефектные частицы — это отдельные частицы которые могут появляться в общей популяции полноценных вирусов, при заражении с «высокой множественностью инфекции» При интеграционной инфекции вирусный геном включается в состав

клеточного генома и реплицируется как составная часть клеточного. Вирусные последовательности в составе клеточного генома называются провирусом или провирусной ДНК.

236

В зараженных вирусами клетках как в организме, так и в клеточных культурах развиваются изменения специфические и неспецифические. Деструкцию клетки, возникающую при цитолитической инфекции, называют цитопатическим эффектом, а вирус, вызывающий этот эффект, называют цитопатогенным.

Кнеспецифическим изменениям относят:

•нарушение проницаемости клеточных мембран;

•хромосомные абберации;

•вакуолизацию цитоплазмы клетки;

•скопление в клетках продуктов распада.

Специфические изменения:

•вирусные включения, внутриядерные или цитоплазматические;

•образование симпластов.

Специфические и неспецифические изменения приводят к деструкции клеток, а вирусы, которые приводят к деструкции, называют

цитопатогенными.

Цитопатогенный эффект вирусов на клетки макроорганизма лежит в основе патогенеза большинства вирусных инфекций.

В лабораторной практике учет цитопатического эффекта позволяет проводить индикацию вируса в культуре клеток.

Экология вирусов и эпидемиология вирусных инфекций.

Вирусы лишены белоксинтезирующих систем, являются автономными генетическими структурами, навсегда привязанными к внутренней среде организма — от простейшей прокариотной клетки до организма человека. Эти все организмы и являются экологической нишей вирусов.

Эпидемиология вирусных инфекций не имеет отличий от эпидемиологии других инфекций. В этой цепи различают источники инфекции, факторы передачи и заражаемые восприимчивые объекты.

Источником инфекции может быть человек или животное. Факторы передачи вирусных болезней те же, что и при других

инфекционных заболеваниях: воздух, вода, пища, почва, предметы обихода.

Механизмы и пути передачи вирусов также не отличаются от таковых при бактериальных инфекциях за исключением возможности генетического пути передачи вирусов. Генетическая передача характерна для онкогенных вирусов и обусловлена интеграцией их генома с геномов половых клеток.

237

•продолжительность течения инфекции;

•проявление клинических симптомов;

•выделение вируса в окружающую среду. На уровне организма инфекции разделяют на:

•очаговые;

•генерализованные.

Распространение вируса в организме может происходить в основном

по трем системам:

•по лимфатической системе ( вирус кори, краснухи, аденовирусы);

•гематогенным путем (большинство вирусов);

•нейрогенным путем (вирус бешенства, простого герпеса,

полиомиелита).

Скорость распространения вирусов в организме и достижение ими чувствительных органов и тканей определяют длительность инкубационного периода.

По клиническому течению различают острые и персистентные

инфекции.

Острые инфекции чаще всего сопровождаются выделением вируса в окружающую среду, инфекция длится недолго, окончание ее сопровождается элиминацией — удалением вируса благодаря иммунным механизмам.

Острая инфекция может завершиться выздоровлением или гибелью организма а протекать может в клинической (манифестной) форме, или в инаппарантной.

При продолжительном взаимодействии вируса с организмом возникает персистентная инфекция (ПИ).

ПИ может быть латентной, хронической и медленной.

•Латентная инфекция — это скрытая инфекция, не сопровождающаяся выделением вирусов в окружающую среду. На уровне клетки это обычно абортивный нелитический процесс. Возможна активация вируса и переход инфекции в острую или хроническую формы.

•Хроническая инфекция — длительно текущий инфекционный процесс, характеризующийся сменой периодов ремиссий периодами обострений, при которых вирус выделяется в окружающую среду.

•Медленные инфекции — это своеобразное взаимодействие определенных вирусов с организмом, характеризующееся длительным инкубационным периодом, длящимся многие месяцы, годы и последующим медленным, но неуклонным развитием

238

симптомов заболевания, ведущих к тяжелому нарушению функций органов, в основном ЦНС, и к летальному исходу. Персистентные инфекции являются серьезной проблемой медицины

и вирусологии. Удельный вес таких инфекций намного превышает таковой острых. Персистенция вирусов обусловливает их сохранение как биологического вида, является причиной изменчивости свойств вирусов и их эволюции.

Патогенез вирусных инфекций

Патогенез вирусного заболевания определяется следующими факторами:

•тропизмом вируса;

•скоростью репродукции вируса и количеством инфекционных частиц в потомстве;

•реакцией клеток на размножение в них вирусов;

•реакцией организма на изменение клеток и тканей.

Тропизм вирусов — универсальное свойство их. В зависимости от

поражения тех или иных органов и тканей различают нейроинфекции,

кишечные инфекции, респираторные инфекции и др. Для вирусов фенотипическим проявлением патогенности является вирулентность и инфекционность. Вирусы не синтезируют белков, поэтому для них нет понятия токсигенности, как и токсичности. Интоксикация при вирусных инфекциях обусловлена всасыванием продуктов распада клеток макроорганизма, разрушенных вирусами.

Факторы противовирусной защиты.

Противовирусную защиту реализуют гуморальные, клеточные и общие факторы, которые осуществляют как специфические реакции — противовирусный иммунитет, — так и неспецифическую резистентность.

Противовирусная защита имеет следующие особенности:

•защитные барьеры направлены против двух форм вируса — внеклеточного и внутриклеточного;

•защита осуществляется на трех уровнях — организменном, клеточном и молекулярном;

•защита направлена против как самого вируса, так и против вирусинфицированной клетки;

•защита обусловлена преимущественно подавлением вирусной репродукции, а не уничтожением вируса;

•значительную роль играют неспецифические факторы защиты.

Неспецифические факторы защиты. Интерфероны.

Интерфероны (ИФН) — мощные индуцибельные белки, способные продуцироваться в любой ядерной клетке позвоночных. Известны четыре основных действия интерферона:

239

•антивирусное,

•иммуномодулирующее,

•антипролиферативное или противоопухолевое,

•радиопротекторное.

Взависимости от клеток-продуцентов интерфероны человека подразделяют на три группы:

•α-интерферон, продуцируемый лейкоцитами человека;

•β-интерферон, продуцируемый фибробластами;

•γ-интерферон, или иммунный интерферон, продуцируемый Т- лимфоцитами.

α-ИФН используются против вирусных заболеваний, γ-ИФН применяют для иммунного модулирования при иммунных дефицитах и злокачественных заболеваниях.

ИФН индуцируют «антивирусное состояние» клетки — резистентность к проникновению или блокаду репродукции вирусов.

Механизм действия ИФН универсален, независим от генетического материала вирусов, т.е. одинаково действуют на репродукцию разных вирусов, но ИФН обладают видотканевой специфичностью.

Противовирусный иммунитет

Против вирусов образуются антитела различных классов. Главную роль играют антитела против протективных антигенов, которыми обычно являются суперкапсидные антигены сложных вирусов или поверхностные наружные антигены простых.

Антитела препятствуют адсорбции, пенетрации, дезинтеграции вирусов, действуют совместно с комплементом, который покрывает вирионы и лизирует их.

Главное значение в противовирусном иммунитете имеют клеточные механизмы.

Их осуществляют:

•Т-цитотоксические клетки, связываются с клеткоймишенью через TCR и HLA I класса;

•К-клетки — осуществляют зависимую от антител клеточную цитотоксичность, связываясь с вирусными антигенами на поверхности инфицированных клеток через антитела;

•NK-клетки — распознают измененные молекулы MHC II на поверхности инфицированных вирусом клеток, связывают антиген на поверхности клетки с помощью NK-рецептора и убивают их, выделяя перфорины.

Иммунопатологические механизмы защиты.

•Накопление иммунных комплексов, содержащих инфекционный вирус.

240