шпоры по вирусам

35.Превично-трипсинизированные кт. ЦПД вирусов.Первично трипсинизирванные: из люб орг и тк, 9-10 сут эмбриона, измельчают, отмыв от ФЭК ФБР, центрифугир (Ц), к осадку – 0, 25% трипсин, на магнитн мешалку на 30 мин при т 37. Трипсин расщипл кусочки тканей на отд клетки. Фильтруют через марлю, Ц в ФБР, р удаляют, осадок развод рост средой, доводя конц клеток до 40-80 тыс в 1 мл при пом кам Горяева. Клетки разлив по флаконам.ЦПД : после формирования монослоя удал рост среду, внос поддерж и доб вирус, помещ в термостат. Или с целью устран токсичности вируссод мат сначала могут внести вирус, ост на 1-2 часа, удалить вирус и внести поддерж среду. Флаконы – в термостат, кажд день – микроскопия под мал увел. через 2-3 суток в монослое обр пустоты, связ с ЦПД вируса. Флакон вынимают из термостата, удал поддерж среду, помещ в морозильн кам, где они сохр. При необходимости получ вируса флаконы 3 раза замор и размораж, доб ФБР и Ц, вирус – в надосад жидкости.

36.Серологическая диагностика вир болезней. Назначение, виды серолог реакций.В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела с образованием иммунных комплексов, которые можно обнаружить в тестах in vitro. Реакции: иммунодиффузии (диффузионной преципитации), иммуноэлектроосмофореза, связ комплемента,задержки гемагглют, непрямой гемагглют, задержки гемадсорбции, нейтрализации, иммунно-фрментн анализ.В реакциях обязат прин участ 2 компонента: АГ и АТ. АГ – чужеродное в-во белковой природы, кот в ответ на введение или попад в орг выз выработку АТ. Аг различ группоспецифич (для группы вирусов), штаммоспецифич. В кач АГ исп: пустулы и афты, надосад жид-ть, получ после Ц , мат, получ после заражен кур эмбр, культуральн жидк после термолизиса (в гомогенезатор, развод рост средой, титрование, разлив по флаконам, ампулам, высушивание). АГ мб живой и убитый (убита нк, а белк об ост)АТ выр органами имм сист (Т-клетками) в ответ на проникн в орг АГ.5 видов: A (сывороточн и секреторн – в железах); G (продуц после встречи М с АГ, при повторном проникновении АГ – сразу продуцир); M(перв встреч АГ, даёт маркеры для макрофагов); E(связ с гиперчувствит немедл типа);DРазличают АТ: комплементсвяз, преципитирующие, агглютинир, вируснейтрализующие.

37. Реакция диффузионной преципитации (РДП, РИД).Простая серологич реакц, прин уч 2 компонента: АГ и АТ (1 из них бывает неизвестен)Цель: идентифицир выделенный вирус и опред налич специфич АТ в сыв-ке.Ставят по методу Оухтерлони: при внесении АГ и сыворотки в агар, они диффундируют в его толще навстречу друг другу, в месте встречи – полосы преципитации серо-белого цвета.Методика: исп голодный агар фирмы Диффко (прозрачный), готовят из него 1% р-р и доб 0,5% NaCl, став на вод баню до полн распл агара, разлив по чашкам Петри, после застыв при пом спец пробойника дел лунки, оплавляют из на горелке для предупр подтек компонентов под толщей агара. В центр лунку – известный компонент (АГ или АТ), в периферич – неизв (АГ или АТ), на пов-то – комочек ваты, смоч дист водой, пом в термостат. Р учит через 24-48-72 часа. + - на границе между центр и порифер лунками – полосы преципитации.Контроли:1 с завед положит сыв и АГ, 2 с отр сыв и АГ.Ставят при диагностике лейкоза КРС, болезни Марека, инф.бруциальн болезни.

38. Реакция гемагглютинации.Не серологическая р.предложена Херстом в 1941 году (эритр цыплят склеив при добавлен к ним вир гриппа). Сущность: на пов-ти эритроцтов имеются рецепторы мукопротеидной природы, а на пов-тях гемагглют вирусов – АГ. При встреч АГ с эритр происх адсорбция вируса на пов-то эритроцита благодаря ферменту муциназе, причём вирус может адсорбироваться на пов-ти неск эр-тов. В рез адсорбции – «сеточка», однако р непродолжит, муциназа разруш рецепторы, расп на эритроцитах, кот осед на дно пробирки в виде пуговки.Компоненты: АГ и эритроциты.Цель: Выяснить, явл ли вирус гемаггл, опред титр вируса (идентифицир не можем, тк отсутств сыв-ка)Методика: Р став в плексиглаз планшетах. В лунки вносят по 0,2 см куб физраствора, в 1 лунку – вирус в развед 1 к 10, перемеш, перенос во 2, в 3, 4…(завис от предпол титра вируса), из последн лунки 0,2 см3 удал. Общий объём жидкости в пробирках – 0,2 см3. Затем в кажд лунку внос 1% эритроциты в объёме 0,2 см3. Р идёт при комнатной т 20-30 мин (в лунках в 1 – зонтик, в посл – пуговка). 1ГАЕ – макс развед вируса, при кот набл агглют 50% эритр. Планшетку накл, где агглют – там «слёзка».Контроль: физраствор + эритроциты.

39. Р. задержки гемагглютинации.Серологич р.: АГ, АТ, эритроциты.Цель: Идентификация, типизация, дифференциация вируса по диагностич сыв-кам, опред титра АТ в сыв-ке крови.Методика: в планшетки по 0,2 см3 физраствора, в 1 – 0,2 см3 сывортки, перемеш, далее – рд послед двукратн развед (завис от предполаг титра сыв-ки). Из послед лунки 0,2 см3 удал. В кажд – по 0,2 см3 вируса, должно сод 4 ГАЕ. Контакт 20-3- мин при комн т, затем в кажд лунку – по 0,4 см3 1% эритроцитов. Общий объём 0,8 см3. Можно исп микрометод – микродозы, аппликатор Токкачи, мал планшетки. Р учит через 20-30 мин (от пуговки до зонтика)Контроли: с завед положит сыв-кой, с отрицат, на самоагглют эр, ОБЯЗАТЕЛЬНО предворит став РГА.Диагностика: грипп, оспа, нью-касслская болезнь, с теми вирусами, кот обл гемаггл активностью или гемаггл АГ.

40. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)Ряд вирусов способны адсорбиров-тся на поверх-сти эритроц-тов не вызывая их склеивания ( (происх. Сенсабилизация эритр-тов) и если к таким эритр-там сенсабилизированных вирусом + специфичес-ю сыворотку происх. Агглютинация эритр-тов при помощи Ат сыв-ки. РНГА нужно отличать от РГА . РГА – эритр-ты агглютинир-тся при помощи вируса. РНГА – эритроц-ты агглют-тся благод-ря Ат .за счёт прекрепления Ат к вирусным частицам. Цель: 1. Опред-ть титр сыв-ки и динамику его нарастания. 2. Идентифи-ть выдел-ый в-с.Компоненты : это серологическая р-я Эритроцитарный диагностикум с адсорбированным на нём в-сом. И ислед-я сыв-ка.Антиген-ый диагностикум получают на биокомбинатах , д\я этого исп. Эрит-ты чел-ка. Барана,петуха. Обрабатывают формальдегидо, затем тонином, затем проводят сенсабил-цию эритр-тов в-сом. Сенсабилизация-соединение массы эритр-тов с в-сом. Сенсаб-ные эритр-ты разливают по флак-нам и формир-ют наборы в сост. Кот входят кроме Аг-нного и эритр-ного диагностикума. Входят «+» и «-» сыв-ка.( упаковыв-ют и отправ-ют в лаб-рию.) в лаб-рии исслед-ые сыв-ки инактивир-ют( чтобы уничтожить ингибиторы белки задерж-щие р-ю), делают ряд послед-х 2-кратных разведений.(по 0,2)В кажд. Лунку + антиг. Эритроц-ый диаг-кум развед-ый в соот. С наставлением кот. Прилагается к кажд. Набору. Р-ю на когтакт 20 – 30 мин. Комнатн. t учёт рез-тов р-ции.В р-ции увидим зонтик потом пуговку.Контроли :1С заведомо «+» сыв-кой 2С зав-мо «-» сыв-кой.3Эритроц-ый диаг-кум+ физ. р-р на самоагглютинацию. д\я идентификации в-са на биокомбинатах нарабатывают Ат-ный эритр-ный диаг-кум где на эритр-ты адсорб-тся Ат. При постановке р-ии РНГА делают разведение в-са 2-ву кратно, а затем к ним + Ат-льный эрит-ный диаг-кум.

41. РГАд и РЗАГАдРГАд. Не серолог-я р-ия . Компоненты:1. Заражен-ыу в-сом культ-ры клеток.2. 0.5% эритр-ты.Цель: опр-ние результа-сти заражения культур тк. Ещё до проявления цитопатогенного действия в-сов.Методика: из флакона с зараж-ми культ. Кл. удаляют поддерж-ю среду и + 0,2 см3 эритр-тов 0.5% -х выставл-ем на контакт 10-15 мин.II вариант. – не удаляя поддерж-ю среду + 0,5% эритр-ты 0,2 см3 контакт 10-15 мин. Учёт рез-товр-ции под микроскопом.Эритр-ты адсорб-тся на поверх-ти кл. пораж-х в-сом(+ случай р-ии). В (-) случае – эритр-ты смоются,в поле зрения единичные эритр-ты..Контроль: 1. Эритр-ты +к незараж-м кул. Тк. РЗГАд.Серол. Р-ия основана на том что специф-я иммун-я сыв-ка способна нейтрол-ть гемадсорб-щее действие в-са.Компоненты:1Зараж. В-сом кул.тк.2Иссл-я сыв-ка .30,5% эритр-ты.Цель.: 1). Опред-ть наличие Ат в сыв-ке 2).идентиф-ть в-с с помощью диагностич-ой сыв-кой.из флак-ов удаляют поддерж-ю среду и +0,2 см3. Сыв-ки и + 0,8 см3. Р-ра Хэнкса. Контакт 30-40 мин. Затем удаляют р-р Хэнкса и +0.5% эритр-ты, контак 10-15 мин, рез-ты р-ии учит-ют под микроскопом.В «+» случае –эрит-ты плывут в поле зрения .( не адсорб-тся)В «-» случ. Адсорб-тся на поверх-ти пораж-х кл.Контроли: 1.)с «+» сыв-кой – плывут2) с «-« сыв. – адсорб-тся3)исп. Не зараж-ые в-сом кул. Тк- эрит-ты плывут в поле зрения.

42. РН. Реа-ция нейтрализации.-это эталонная р-ия.благ-ря ей оценив-ют правиль-сть получ-х рез-тов др серолог. Р-ций.эту р-ю ставят при диагностике почти всех вирус-х забол-й кроме: Африк. Чумы свин.(АЧС),Элиутск.болезнь норок, Лейкоз КРС,ИНАН лош.,СПИД.Сущ-сть р-ции:при попадании в-са в орг-зм в крови жив-х и птиц появл-тся вирус нейтрал-щие Ат. Затем при повторной встрече орг-зма с в-сом . в-с-нейтрал-щие Ат не дают в-су разви-ться и нейтрализ-ют его, тем самым чувств-ые биолг-кие модели не испытыв-ют пораж-го действия в-са.Цель: 1) опред-ть титр Ат в сыв-ке кр. И динамику его нарастания.2) идентиф-ция и дифферен-ция выдел-го в-са.Компоненты: 1) Аг(м\б как изв-м так и не известным).Аг перед р-цией титровать. И Аг д\б живой(обязательно)..2) Ат сод-ться в сыв-ке кр. м\б извест-ной, и неиз-ой – её инактив-ют..3) чувст-ая биолог-я модель.(кул.тк, эмбрионы,лаб.жив-ные).Схема постановки р-ции.:1)Изв. В-с +неизв сыв-каДелают ряд послед-х разведений в-са(10кратных) и + постоянный V неизв. Сыв-ки.2)изв. Сыв-ка + неизв в-с – ряд послед-х разведений сыв-ки и +постоян-й V неиз в-с. В обоих вари-тах смесь сыв-ки с Аг выдер-ют 1-2ч. При t 37 С градусов. Или в течении 18 ч. При t(+4)С.В кажд. Из получ-х разведений заражают по 3-4 биол модели.Наблюдение за ними ведут в теч 5-12 сут и опр-ют за это время ЭД50.Р-ю опр-ют по м-ду Рида-Менча: опр титр в-са в смеси с норм сыв-кой. И в смеси с «+» сыв-кой. Затем высчит-ют индекс нейтрализации кот=отношению титра в-са в смеси с норм сыв к титру в-са в смеси с «+» сыв. И за «+» р-ю приним-ют индекс нейтр-ции кот =2 и более логарифмам, а за «-» 1 и менее лог-в.

43. ИФА.Исп-ют как д\я опр-я неизв Аг так и неизв Ат.Ставится 2мя м-дами: 1)гистохимический.2)твёрдофазным.1.Ат обраб-ют ферментами пераксидазы хрена а выяв-ют с помощ спец субстрата:5ть аминосалициловой к-ты и т.д. суб-рат под дейс-ем фер-та распад-тся образ-я цветной ряд ферментации, улавливают это в обычн микроскоп,м\ и визуально.Гистохимический м-д : прямой и непрямой м-ды.Прямой: на фиксир мазок зараж в-сами наносят специфич-ю сыв-ку в кот Ат обраб-ны ферментом пероксидазы хрена. Контакт во влаж-ой камере в термостате 37 С, 1-2ч. Промыв-ют физ р-ром. Сполас-ют дистил водой, сушат на в-хе и наносят неск капель субстрата, контакт 5-10 мин. Промыв-ют физ р-ром см в обыч-ый микроскоп. В + случае – голуб окрашивание кот потом переходит в коричневый цв.Непрям м-д.:на фик мзок зараж в-сом наносят специф-ю сыв сод-щую Ат.Контакт в термостате 1-2ч. 37 С - промыв-ют физ р-ром – сушат на в-хе и наносят антивид-ю иммун-ю перокси-ный каньюга-в термостат 1-2ч 37С контакт-ют.-промыв физ р-ром – сушат на в-хе-+неск капель субстрата 5мин- промыв физ р-ром – см в микроскоп – картинка таже.Твёрдофазный м-д: при нём исп микропанели с лунками в них + 0,2 мл гаммаглобулина получ-го из сыв сод Ат против предполаг-го воз-ля, контакт в термостате 1ч 37 С- затем целую ночь выдерж-ют в холодтльнике 4С утром выним-ют промыв буферным р-ром и вносят в-с-сод Аг 0,2 мл – 1-2ч 37С промыв буфер р-ром и +специф антивид-ой иммуноферментный канюга 1-2ч 37С терм-стат – промыв буф р-ром + субст-рат контакт 5-30 мин в тёмном месте при комнат t – см: если желт-оранж-я – «+», если нет окрашив-я «-», д\я контроля во всех м-дах исп зав-мо «+» и завед-мо «-»сыв-ки.

44. ПЦР-это амплификация ДНК инвитра с помощ ПЦР м\разм-ть опред-ую после-ть ДНК многократно в 100, 1000 иболее раз.Компоненты: 1)ДНК матрица кот имеет спецмф-ий фрагмент свойсв-ный только д\я данного орг-зма(м\о,в-са и т.д.). 2)праймеры это синтетич-е олигонуклеотиды, комплем-ые ДНУ на опр-х уч-ках этого фраг-та. 3) смесь дезоксинуклеотидтрифосфата кот явл мат-лом д\я синтеза нов ДНК и спец-ий ферм-нт тат-полимераза.(катал-ет послед-ное присоединение нуклеотид-х основ-ий к растущей цепи ДНК. Кажд цикл вкл 3 этапа:1) расплетение ДНК 2)присоединение праймеровна границе специф-го уч-ка напротивопол-х частях ДНК(t 66С 20 сек)3)достраивание цепей ДНК в противопол-х напрвлен-ях с уч-ков присоед-я праймеров. Катал-ется тат-полимеразой. Образ-тся специф-й фрагмент ДНК – наз. Ампликон. В дальнейшем он служит д\я синтеза нов цепей ДНК поэтому получ-тся бол кол-во иском-х цепей.

45. Элект-я микроскопия.Электр микроскоп – прим-ют д\я опр-я микроскоп-х обьектов, кот не увидеть под световым или люминис-м мик-пом. Микр-коп предс-ет собой бол-шую колону в верх части кот распол-тся вольфрамовая нить. Кот явл источником элект-нов. В сред части распол-тся препарат, он д\б тонким и его распол-ют на спец сеточке подложке и экран. При нач раб-ты в колонне созд-тся вакуум д\я пред-ния распыления электронов и далее на вольфрамовую нить подаётся напряжение. После чего соз-тся пучок элек-нов . кот при помощи сист электромаг-х линз фаусир-тся на препарате и взависим-ти от плотности препарата изображ-е будет более или меньше тёмное но изоб-ние всегда ч\белое препарат исл-ют не живой. Преимущ-ва м\видеть объекты кот нельзя увид в др микро-коп . недостаток: дорогой, исп неживой объект кот в процессе обработки м\несколько видоизмен-тся по форме.. изображ-е ч\белое.Электронная микроскопия вирусов, окрашенных методом негативного контрастирования, позволяет дифференцировать вирусы и определять их концентрацию. Применение электронной микроскопии в диагностике вирусных инфекций ограничивается теми случаями, когда концентрация вирусных частиц в клиническом материале достаточно высокая (105 в 1 мл и выше). Недостатком метода является невозможность отличать вирусы, принадлежащие к одной таксономической группе. Этот недостаток устраняется путем использования иммунной электронной микроскопии. Метод основан на образовании иммунных комплексов при добавлении специфической сыворотки к вирусным частицам, при этом происходит одновременная концентрация вирусных частиц, позволяющая идентифицировать их. Метод применяют также для выявления антител. В целях экспресс-диагностики проводят электронно-микроскопическое исследование экстрактов тканей, фекалий, жидкости из везикул, секретов из носоглотки. Электронную микроскопию широко используют для изучения морфогенеза вируса, ее возможности расширяются при применении меченых антител.

46. Титрация в-сов. Титр в-са и метод-ка опред-я титра в-сов. Ед. измерения титра в-сов.После того как сформир-тся монослой удал-ют ростов среду + поддер-ю и к + в-с и в термостат.Затем в-с удаляют и + поддерж-ю среду. После заражения в термостат и каж день проводят их микроскопию под малым увелич-ем микроскопа .ч\з 2-3сут в монослое поя-тся пустоты связанные с цитопатогенным дейст-ем в-са на кл-ки. После этого флаконы вынимают из термостата удаляют поддерж среду и помощают их в морозильную камеру где они и сох-тся . титрование в-са Цель: 1. Определ-е конц-ции в-сов в среде, 2. Титров-ние проводят при наработке вакцин, 3. При получении Аг д\я серол-х р-ий.. 4 с целью потбора точных доз д\я заражения лаб жив-х.Титр –это количество вирусов в ед. объема (обычно в 1 мл) суспензии.(мат-ла). Подсчитывают в электронном микроскопе или методом бляшек (см. Бляшки ) на к-ре клеток. В первом случае выявляют все вирионы, во втором – только инфекц.; 2) количество инфекц. ед., содержащихся в 1 мл вирусной суспензии. Определяют путем заражения 10-кратными разведениями материала животных, КЭ, к-р клеток. За титр вируса принимают наибольшее разведение, вызвавшее локальное или общее поражение тест-системы. В том и другом случае титр вируса выражают в виде десятичного логарифма.Наиб универ-ым явл м-дом опред титра в-са в ед 50%ифекционного действия. За ед-цу кол-ва в-са берут дозу кот способна вызв-тьинф-ый эфф-кт у 50%зараж-х жив-х. (ЭД50.).1 ЛД50-доза в-са убив-я 50 лаб жив,1ИД50-з в-са вызыва-я клинич-е симптомы или патологоанатомич-е измененияу 50%зараж лаб жив. 1ЭЛД50-д в-са. убива-щая 50% кур эмбрионов, 1ЭИД50-д в-савызыв-я изменения у 50% зараж-х кур эмбрионов, 1ЦПД50-д в-са вызыв-я цитопатический эфф-кт у 50% зараж кул клеток.

78. харак-ка бронхита птц(ИБП). Лаб диагн-ка болезни сред-ва для специф-ой профилактики. Вирус инфекционного бронхита кур1. Характеристика возбудителя Наименование вируса (ист справка) Систематика Болезнь, вызываемая типичным видом вируса рода Coronavirus, называется инфекционным бронхитом кур. Возбудителем является вирус Avian Infectious Bronchitis Coronavirus, который относится к семейству Коронавирусов (Coronaviridae), роду Коронавирус (Coronavirus) и типу Avian.Сем. Коронавирусов включает в себя РНК-содержащие вирусы. Вирионы круглой или эллиптической формы с булавовидными отростками до 20 нм, напоминающими вид солнечной короны. Нуклеокапсид 7-8 нм в диаметре. РНК вируса представлена двумя неравными фрагментами. Однако имеется мнение, что геном вируса представляет собой однонитевую нефрагментированную высокомолекулярную РНК. Плавучая плотность вириона колеблется от 1,16 до 1,27 г/см3. Оболочка вириона содержит липиды. Нейраминидаза не обнаружена. 1.4. Антигенные свойства Известно много штаммов вируса инфекционного бронхита кур (более 20 серотипов: Массачусетс, Коннектикут, Айова-97, Грей и др.), поэтому специфические антитела к вирусу образуются медленно. Кроме цыплят, можно заразить обезьян и пещерных летучих мышей. Индейки невосприимчивы, однако при интравенозном введении им вируса возникаем виремия Устойчивость вируса во внешней среде невысокая. Большинство штаммов вируса инактивируются при 560С за 10 мин. Вирус неустойчив к физико-химическим факторам, разрушается после трехминутного воздействия на него обычных дезинфицирующих средств (1-% раствора фенола, 0,5-% раствора формальдегида, раствора перманганата калия 1:10000, 70-%-ного этилового спиртаОпределение (синономы) Инфекционный бронхит кур (Bronchitis infectiosa avium) – высококонтагиозная, остро протекающая болезнь, главным образом кур, вызываемая вирусом сем. Coronaviridae (Коронавирус) и сопровождающаяся поражением органов дыхания у цыплят и репродуктивных органов со снижением яйценоскости у кур. 2.2. Краткая ист справка Вирус инфекционного бронхита кур впервые выделили Бич и Шалк в США в 1936г. 2.3.  Патологоанатомические изменения (кратко)При патологоанатомическом исследовании павших птиц наиболее часто изменения обнаруживают в органах дыхания (слизь и гиперемия слизистой оболочки носа, подглазничных синусов, трахеи, серозное или серозно-фибриозное воспаление бронхов и воздухоносных мешков). В верхних дыхательных путях у цыплят наблюдяется прозрачная жидкость. Слизистая оболочка покрасневшая, отечная. Поражения носовой полости, подглазничных синусов более выражены у цыплят младших возрастов. Легкие наполнены кровью, слизистая оболочка бронхов утолщена, развивается пневмония. В некоторых случая у цыплят поражаются воздухоносные мешки. Стенки их местами утолщается, становится непрозрачной У кур-несушек изменения обнаруживают только в яйцеводе и яичнике. Яйцевод уменьшается в длине, а яичник — в объеме. Фолликулы яичника плохо развиты. Просвет яйцевода может быть полностью или частично закрыт. В этом случае при нормально развитом яичнике яйца складываются в брюшную полость. 3. Лабораторная диагностика 3.1. Исследуемый материал Для диагностики инфекционного бронхита из птицехозяйств, где имеется подозрение на заболевание, в лабораторию направляют 5-10 цыплят с признаками поражения респираторных органов. Одновременно посылают 15-25 проб сыворотки крови от кур, подозрительных по заболеванию. В лаборатории от больных цыплят после убоя берут кусочки трахеи, гортани, легких и используют для выделения вируса на эмбрионах кур и для постановки биопробы на здоровых цыплятах. 3.2. Методылабораторной диагностики Методы, применяемые в лабораторной диагностике инфекционного бронхита кур:иммуноферментативнный анализ (ИФА) по выделению и идентификации вируса биопроба реакция преципитации в агаровом геле (РПГ) реакция нейтрализации (РН) на эмбрионах кур реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) 3.4.Дифференциальная диагностика При дифференциальной диагностике необходимо исключить ньюкаслскую болезнь, инфекционные ларинготрахеит, бурсит (болезнь Гамборо), оспу, респираторный микоплазмоз, заразный насморк. 3.5. Иммунитет и биопрепараты У переболевшей птицы образуется иммунитет. Куры передают потомству антитела, предохраняющие цыплят от заражения в первые 2-3 недели жизни. Для профилактики инфекционного бронхита применяют живые и инактивированные вакцины. Живые вакцины обеспечивают более напряженный и более длительный иммунитет, чем инактивированные. Так, живая вакцина из голландского штамма Noblis H-52 предохраняет птицу от прямого заражения штаммами Флорида, Хольт, Массачусетс, Коннектикут.

47. РСК.Сложн-я серол-я р-я. Ставят при диаг-тики ящура,чумы плотояд-х, гепатит плотояд-х.Приним-ют участие 2 сист и 5 компонентов. 1 сист – тест сист Аг,Ат,комплемент, 2 сист-индик сист – гемолизин,эритр-ты барана.Компоненты: Аг –м\б изв (разраб-ют на биокомбин-х) и неизв-ый (жив или инактив-ый).Сыв-ка извест – на биокомбин-х, и неизвестн-я её инактивируют при 55-60С в теч 30мин. Комплемент –литическое в-во белков природы, кот способ-но присоед-тся к комплексу Аг+Ат. Получ-ют от самцов морск свинок- лиофильно высушенный. Гемолизин – гемолит-я сыв-ка на биокомб-х путём гипериммуниз-я кроликов эритр-ми барана. Эритр-ты барана – в лаб-рии .Треб к р-ции: 1. Сыв д\б инактевированна. 2. Р-ю ставят в строгой после-сти :тест сист –вод баня 20мин 37С +гемм сист в вод баню на 30мин . 3. Кажд компонент вносят по 0,2 см3.в рабоч-х титрах. 4. Общ Vжидк-сти в проб = 1 мл или см3. 5. Физ р-р свежий без консервантов.Сущ-сть р-ции: 1. Если Аг и Ат специф-ны = обр-тся их комплекс и происх-т прис-ние к комплексу комплемента лизируя комплекс. Гемм сист эрит-ты и гемолизин всегда специфичны –обр комплекс но нет комплемента, не лизир-тся и оседает на дно проб-ки – прозр надосадочн жид-сть. 2. Если Ат и Аг не спец-ны комплекс не образ-тся свободн комплемент присое-тся к гемм сист и лизир-ет эритр-ты- столбик жид-сти красн прозрачн-й. Ставят главн опыт РСК. В 2 –х вариантах.:1.Если неизв Аг – исп нативный Аг неразвед-й т.е 1:2,1:4,1:8 + сыв-ка+комплемент в вод баню +гемм сист и на вод баню. 2. Если неизв сыв-ка – исп натив сыв-ку в развед-ии 1:2, 1:4, 1:8 +Аг диагностич + компл-т в вод баню + гем сист и на вод баню. Р-ю учитывают сразу и ч\з 2ч. После.Учёт рез-т : 100% ++++- на дне осадок из эрит-тов75%+++- осадок, желтоватая жидк-сть50%++-небол осадок. Столбик розовый25%+-остаток эритр-в, красн жид-сть«-» -полный гемолиз красн жидк-сть. На ++ и более – р-я счит-тся положит-ой. Контроли: Аг+Ат(сыв+Аг)- «+»-100%+сыв+физ р-р - «-» Аг+физ р-р – «-»

48. м-ды очистки и концентрации в-сов.Тельца-включения и м-ды их окрашив-я с исп свет микроскопии.В вируссод-м мат-ле в-в мало. д\я того чтобы их выделить в чистом виде н\удалить балластные в-ва. Цель: 1)д\изуч-я морфологии вир-в. 2) д\заражения ЧБМ.3) д\наработки Аг д\серолог р-ий 4) д\наработки вакцин.М-ды очистки и конц-ии . I. Физич-е : 1-термолизис( 3 р замораживают и размораж-ют пат мат.) 2- м-д мембранных фильтров ( мат-л пропуск ч\з бак фильтр затем ч\з мембр фильтр затем фильтр измельч-ют и помещ-ют в центрифужн-ю пробир-ку затее уентриб-ют 3 тыс оборотов 20 мин в-с в надосад жидк-сти). 3-ультрацентрифугирование основан на разделении ч-ц по массе в-с сод мат-л в физ р-р и центр-ют при 3-4 тыс оборотах/мин . надосад-ю жидк-сть разводят физ р-ром и центриф-ют при5-6 тыс обор\мин . 20 мин. Желательно чтобы цент-га была с охлаждением. Надосад-ю жидк-сть + физ р-р помещ в ультрацентр-гу и центриф-ют при 60 тыс об\мин. – в-с на дне. 4- м-д седиментации в градиенте плотности( разделение ч-ц по скорости оседания в вязк среде, исп 60% сахарозу). 5- м-д адсорбции с послед-щей аллюцией.(в-сы м\адсорб-тся на пов-сти разл кл-ок, на гипсе, гидроокисе Al , эритр-тах. В-с гриппа адсор-тся на эритр-тахпри +4С – центриф-ние-+в-с + эритр-ты –на дно –центриф-ние повторно-в-с в надосадочн.жид-сти.II.Химические ( в-сы всегда в осадке)центриф-е проводят 20мин при 3-4 тыс об\мин 1) с исп метанола: к в-ссод-му мат-лу + по каплям метанол до его конц=25%, при+4С 2-4ч- центриф-ют . осдадок разводят фосфатным буфером. 2)Седиментация в изоэлектрич точке. У все в-сов изоэл-я точка нах в диапазоне 3,5-6,5 pH к в-ссод-му мат-лу по каплям + 1н. р-р HCl +4 ч при 4С центриф-ют в-с в осадке+ слабощелочн-ой фосфатный буфер. 4) осаждение солями и полиэтиленгликолем. Исп чаще (NH4)2SO4-доводят до конц=3,5%, а полиэтиленгликоля до 7,5%-2-4ч,4С-центриф-ют.. 5) м-д Ильенко: исп д\я в-в кот имеют тропизм к тк ГМ. В-ссод мат-л смешив-ют с эфиром или хлороформом, тщат-но перемеш выдержи-ют 2ч,4С и центрф-ют . там где был эфир – в-с в осадке,а где хлороформ – в-с в надосад-ой жид-сти. III Биологические: 1)АБ, 2) накаплив-ние в-са в кур эмбрио-х,кул кл-ток, в злок опухолях. Тельца включ-я образ-ют в-сы оспы, гепатита плотояд-х, бешенства. Пат мат-л : объекты для свет микроскопии 1-мазки,2-мазки –отпечатки,3-гистосрез.Фиксир-ют чаще хим м-дом(ж-ть Никифорова, ацетон) – затем окраска по м-дам Михина и Муромцева. 1) муромцева: фикс мазок+синька мансона на 10мин в р-р тонина-промыв и сушат- в р-р спирт+ксилол или спирт+ацетон -и микроскопия. Картинка: Тельца- вкл-я –фиолетовые,цитопл-зма- голуб-я, ядра-синие. 2)михина: на фикс мазок +краска РГ на 10-15 мин-промыв-ют подкисл-м спиртом- промыв дист водой – сушат – микроскопия. Картинка: цитоп-зма- красная, ядра-чёрн., тельца- темно-синие.

50. Лабораторная диагностика ящура. Взятие пат мат-ла и порядок проведения лабораторной диагностики ,м-ды идентификации и типизации в-са ящура. Лаб диаг-ка.Подозрение на ящур вызыв любая болезнь сопровожд появлением везикулярн сыпи в ротовой полости . из эпизоотологич особей парнокопытные. Клинич признаки. -хромота,-обильная соливация КРС,-появл афт(у СВ на пяточке), -выс t-ра,у молод-х м/бдо 50% гибель от паралича сердца.Пат картина привскрытии нах афты и эрозии в ротов полости иногда на слиз обол пищев и преджелуд жвачных. Умолод – геморрагич-ое воспаление киш и дегенератив изменения в мыш-цах(тигровое сердце) Взятие и подготовка мат-ла.Для исслед берут свежие , плот консист стенки афт в кол-ве 10 г от 2-3 больн-х живОБнаруж вир-са и идентификация. РСК можно испол ИФА1 кот по чувствит превосходит РСК. ПЦР диагн. Биопроба. На мыш сосунах более чувств чем морск свинки .Дифиринц диагностика исключ болезни с везикуляр синдромом. Это везик стоматит, везик болезнь свиней, везик экзантема свиней, катаральн лихородка овецСпециф профилактика – толко инактивир вакц-ны,живые не использ. Готовят из высоко патоген в-са.1) гидроокись алюминив вакц пригот из в-са репродуциров в орг-зме новор крольчат. 2) гидроокисьалюмин вакц- из в-са культивир в пережив ткани слиз обол языка не иммун к ящуру КРС( м-д Френкеля) 3)вакц из в-са получ в суспензионной кул клеток ВНК 21/13. Суспензия жидк во взвешенной сост , постоянно кл перемешивают, м/ получ-ть много кл-к. м-д введения жив вакц п/к – внутрибрюшно,аэрозольно,орально,а иноктивир только п/к и в/м