шпоры по вирусам

62. биологич препараты для леч и проф-и чумы свиней.КЧС: больных и подозрительных не лечат. Подвергают убою. В соседних хозяйствах-короткая вакцинация. КЧС необходим диференц от АЧФ, капереллеза, сальмонеллеза,рожи, ауески, паразитических и граппа.

63. вирус африканской чумы свиней. Диф-я диагностика классич и африк ЧС. Лаб диагностика.Монгломерозная болезнь с 1921 года. Имеет природную очаговость. Высококонтагиозная болезнь домашних и диких свиней. Сопров лихор-й, острыми токсикозами, некрот пораж лимф ткани, эндотелия сосудов, появл тромбоза, кровоизлияние , почти всегда гибель. Сверхострое, острое, подострое, хронич, латентное. Чаще сверхострое и острое. При сверхостром гибель через 24-72 часа. Острое-сопров повыш темпер, до 40,5-42, порезом задних конечностей,пятна на коже ушей, рыла брюха.промежности и нижней части шеи. По клин признакам и пат изм сходна с КЧС. Природно очаговая ифекц к лещей . сохр до 3х лет и перед потомству. . способен размнож в беспозвон и позвоночных хозяевах.Вирусологическая диагностика. Реакц гемадсорбции( в основном для обнаружения). Прямой МФА со свиными тканями. ИФА с цельной кровью. Мониторинг в дикой природе с ПЦР. Биопроба на свиньях, только с разрешения главного управления ветеринарии. На клеточных культурах лейкоцитов и макрофагах КМ. Идентификация типизация-реакция задержки гемадсорбции. Диагностика. КЧС: вирус ДНК, размер 25-35 , плюральность нет, иммунитет есть, к тканей без ЦПД, РНГа минус, вакцины плюс, РП плюс. АЧС: вирус ДНК, размер 200, плюральность плюс 7 серотипов, иммунитет нет,, к тканям плюс ЦПД, РНГа плюс, вакцины минус, РП минус.

64. хар-а вируса чумы КРС, методы лаб диагностики. Средства спец проф-и.Чума КРС –пестис бовина. Остропротекающ вирусн болнзнь. С признаками септицемии, лихорадки, катарально-геморрагическими и крупозно-дифтерич-и воспалениями слиз об-к. пораж всех оргпнов И систем.в первую очередь кишечника и массовая гибель. В СССР ликвидирована в 1927-1928. РНК содержащий, однонитчатый. РНК линейная, неинфекц-я. Тип симметрии нуклеокапсида-спиральный. Св-ва. Слабоустройчив к нагреванию, действию уфл, солнца. Консервир при замороживании. Боится кислой среды. К гниению малоустойчив. Оч хор сохр в костях, соленом мясе. Близкое антигенное родство к кори человека и вир чусы плотоядных. Диагностика чумы КРС. Биопроба для телят. Для быстрой диагностики ЧКРС 10мл 10-20% суспенции лимфоузлов или селезенки, получ от больного ж-го в первые 5 суток после заболевания, вводят подопытным 1=2месячным телятам п/к. на 5-е сутки повыш температура и смерть. Качественная и количеств-я РН при ретроспективном вирусологическом исследовании. РСК для прижизненной и посмертной диаг-ки. РДП,РИЭОФ, РНГА, ИФА. РТГА с а/г вир кори человека.СПЕц проф-а: 1. Для создания иммунной пограничной зоны. Проводят вакцинацию живой сухой культуральной вакциной из аттенуированного штамма ЛТ, однократно. Иммунитет через 72 часа, продолжительность иммунитета 7-8 лет. 2. Живая вакцина из штамма 37/70.3.Французская гетерологичная вакцина из вируса кори человека штамма МБ-113-Б.

65. хар-а вир злокач катаральной горячки КРС . лаб диагностика,спец проф-а.Злокачественная катаральная лихорадка(coruza gangrenosa) – острая инфекционная болезнь крупного рогатого скота и буйволов, характеризующаяся крупозным воспалением слизистых оболочек головы,  поражением глаз и нервной системы. ДНК содерж. Двунитчатый. Полиморфный,20нм. Возбудителем злокачественной катаральной лихорадки  относится к семейству Gerpesviridae. Перезаражение происходит аэрогенным путем, с кормом, питьевой водой и бывает только  при  наличии внеклеточного возбудителя во внешней среде или биологических секретах. У крупного рогатого скота  вирус находится внутри эпителиальных клеток и поэтому не происходит заражения между животными этого вида.Средств специфической   профилактики нет. Для ликвидации заболевания используют  общие противоэпизоотические мероприятия – ограничение движения скота, дезинфекция, карантинирование больных  Вирус выделяют на культуре клеток  щитовидной железы крупного рогатого скота. В крови определяют антитела с помощью РСК, ИФА.  Идентификацию культурального вируса и возбудителя в биологическом материале (клеточном лизате, пораженных тканях, лейкоцитах периферической крови)  проводят с использованием ПЦР.животных.

66.инфекционный ринотрахеит КРС. Характеристика возбудителя. Методы лаб диагностики, спец проф-а.(Rhinotracheitis infectiosa bovum) Остро протекающая, контагиозная болезнь, которая характеризуется преимущественно катарально-некротическими процессами верхних дыхательных путей, лихорадкой, общим угнетением и конъюнктивитом.Возбудитель: ДНК-содержащий вирус, относится к семейству гер-песвирусов. Размер вириона в диаметре 120—140 нм. Вирус при 60—70°С и рН 6—9 сохраняется до 9 мес, при 20°С — инактивируется через 50 сут. Вирус чувствителен к эфиру и хлороформу. Растворы едкого натра, формалина и фенола (1—2%-ные) инактивируют в течение 10 мин.Источник инфекции: больные и переболевшие животные.Пути передачи: аэрогенный.Инкубационный период: 4—6 суток.Носительство возбудителя: 2—4 недели.Симптомы: ринит, трахеит, ларингит, вульвовагинит. Для острого течения характерны высокая температура, истечения из носа, кашель, одышка, истощение; для атипичной формы — менингоэнцефалит и аборты.Патологоанатомические изменения. Катарально-фибринозное воспаление слизистых оболочек носовой полости, гортани, трахеи, бронхов, эмфизема легких. При генитальной форме — гиперемия слизистой преддверия и вагины у коров, препуция и пениса у быков, появление на них пустул, эрозий и язв. Диагностика. В лабораторию направляют истечения, соскобы и смывы из носовой полости, влагалища, препуция. Берут кусочки слизистой оболочки носа, гортани, трахеи, легких, головного мозга, пораженные участки желудочно-кишечного тракта, органы абортированного плода. Проводят выделение вируса и идентификацию его в культуре клеток, РН, РДП, РИГА, иммунофлюоресценцию, биопробу.Дифференциальная диагностика. Инфекционный ринотрахеит у крупного рогатого скота следует дифференцировать от вирусной диареи, инфекции, обусловленной хламидиями. При менингоэнцефалитической форме болезни (редко!) следует исключить злокачественную катаральную горячку, туберкулезный менингит; в случае респираторной формы болезни — бронхопневмонию. Профилактика и лечение. Лечение: больных животных лечат гипериммунной сывороткой или сывороткой реконвалесцентов.Из средств специфической профилактики применяют вирус-вакцину ВНЭВ против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, а также сухую культуральную ассоциированную вакцину против па-рагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, инактивированную вакцину против инфекционного ринотрахеита.

67. характеристика вир гриппа ж-х и птиц. Лаб диагностика спец проф-а.Вирус гриппа А инфицирует людей, свиней, лошадей, тюленей, китов, диких птиц. Серологическая принадлежность конкретного штамма не адекватна его патогенности. Для вир типа В хар-но гемаглютиния и…Вир гриппа С у людей и свиней. Морфология вируса. Выраженный полиморфизм. 4 мкм. Фрагментированный нуклеокапсид со спиральным типом симметрии. Однонитчатая РНК 1%, белки70%,липиды18-37%.углеводы5%. возможны перегруппировка генов в процессе сборки новых вирионов. Локализуется в верхних дых-х путях. Источник инфекции больные или переболевшие животные. Пути передачи воздушно-капельным путем. Вирус способен аглютинировать эритроцыты 22 видов жив-х и птиц. На вирус губительно действует эфир,хлороформ. Лаб.диагностика: прижизненно серолог реакции. Посмертно кусочки легких,бронхи. РЗГА, ИФА,РДП. Биопробу проводят на вакцинированных жив-х. имеются тест-системы. В течении 5-10минут позволяет определить наличие а/г вир гриппа.Грипп лошадей. Заразный катар верхних дыхательных путей. Остро протекающая высококонтагиозная болезнь, кроветворной лихорадкой хар-ся, угнетением, слезотечением, сухим отрывным кашлем. Сопровождается ларинотрахеитом. Вир рода А. разновидность А1 и А2. Инкубац период сутри, трое. Смертность 4-5%. Для спец проф-ки инавакцинированные поливалентные вакцины. Вакцинируют в 3х месс возрасте. Иммунитет на 14 день. Грипп свиней. Высококонтагиозг остропротек инфекция. Возник в холодное время года. Вир группы А. внезапное начало, резко выраженной лихорадкой, общей слабостью, поражением органов дыхания. Инкуб период 1-7 суток. Течение острое, подострое, типичное/атипичное. Болезни 7-10 суток. Смертность 1-4%. Иногда поражаются мышцы и суставы. Диагностика. Серологическая.РЗГА,РН,ИФА,РДП. Вирусологич культивирование на белых мышах и эмбрионах кур. РЗГА,РН,ИФА,РДП,ПЦР, электромикроскопия. Грипп птиц. Экссудативный. Классическая или европейская чума птиц. Восприимчивы куры, индейки, домаш или дикая птица, фазаны, цесарки,глухари, чайки, буревесники, и др. дикие утки-носители. Источник болеющие или переболеашие птицы. Передаются аэрогенно с пометом, со слюной, от переболевшего человека. Заболеваемость 80-100%. Смертность 10-100%. Течение эпизоотическое. Течения сверхострое, острое, подострое, хроническое, субклиническое.инкубац период 11 дней. Депрессии, отеки, выделение экссудата. Порезы, смертность 90-100%. Диагностика: идентификация вируса и культивирование.. спец проф-ка. Инавакцинир вакцинами.

68.хар-ка вир парагрипа КРС. Лаб диагностика и спец проф.Paramyxoviridae . заражение воздушно капельным путем и алиментарным путем. Поражаются до 90-100% телят. Выделение с фекалями и молоком. Быстро разруш под действ уфл. Однонитчат РНК.. симптомы повым температ, одышка, истечения, отказ от корма. Выздоравлив через 2-3 недели. В естественных условиях к вирусу парагриппа-3 восприимчивы различные возрастные группы к.р.с. Однако наиболее часто встречаются сообщения о заболевании молодняка крупного рогатого скота в возрасте до  года. Инкубационный период при парагриппе-3 продолжается от 24-30 часов до 3-5 дней. Различают острое, подострое и хроническое течение.Для  специфической   профилактики используют живые и инактивированные моно- и ассоциированные вакцины, гипериммунные сыворотки.  Для ликвидации заболевания используют  общие противоэпизоотические мероприятия – ограничение движения скота, дезинфекция, карантинирование больных животных.Лабораторная диагностика  на парагрипп-3 включает в себя проведение следующих исследований: выявление специфического антигена из биологического материала с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) или иммунофлуоресценции (МФА), выделение вируса на культуре клеток и его идентификация в реакциях нейтрализации (РН) и  торможения непрямой гемагглютинации (РТНГА). Сюда же входит реакция связывания комплемента (РСК), иммуноферментный анализ (ИФА),  а  также ретроспективная диагностика с помощью реакции  непрямой гемагглютинации (РНГА), иммуноферментного анализа (ИФА),  нейтрализации (РН), связывания комплемента (РСК).

69. характеристика вир чумы плотоядных. Методы лаб диагностики спец профилактика.Возбудитель болезни — РНК-содержащий вирус рода Morbillivirus семейства Paramyxoviridae. Форма вирионов полиморфная, преобладает сферическая. Внутренняя часть вириона представляет собой закрученную спиралью нить рибонуклеопротеида, который окружён оболочкой с радиально расположенными отростками. Вирус хорошо размножается при культивировании на хорионаллантоисных оболочках развивающихся эмбрионов кур, в культурах клеток тканей собак, хорьков, рогатого скота, обезьян, а также фибробластов эмбрионов кур. При размножении вируса у зараженных эмбрионов появляются изменения главным образом на хорион-аллантоисной оболочке в виде отечности и образования светло-серых узелков величиной с просяное зерно или тяжей светло-серого цвета. Вирус чумы плотоядных в иммунобиологическом отношении однороден. В иммунологическом и морфологическом отношениях он родствен вирусу кори человека ичумы рогатого скота. В экскретах и секретах больных животных вирус во внешней среде может сохранять свою активность до 2 месяцев. Солнечный свет быстро инактивирует его. В органах от больных животных возбудитель сохраняет активность при t 4°C около 2—3 месяцев. При нагревании он быстро инактивируется: при температуре 100°C — через 1 минуту. Годами сохраняет активность в лиофилизированных препаратах. Оптимальная зона pH — 7,0. 1% ные растворы щёлочи, лизола и фенола убивают вирус в течение 1—3 часов. Инкубационный период при экспериментальном заражении составляет 2-7 дней, при естественном он более длительный — до 40 дней. В зависимости от степени выраженности клинических признаков различают легочную, кишечную, нервную, кожную (экзантематозную) исмешанную формы болезни. Развитие той или иной формы чумы в значительной мере определяется реактивностью организма животного и вирулентностью возбудителя. У собак различают острое, подострое и хроническое течение чумы. истощен. Вокруг глаз и носа корочки засохшего экссудата. Глаза впавшие, зрачок расширен, на роговице возможны эрозии. На губах и вокруг ноздрей мелкие эрозии и язвочки. Слизистая оболочка верхних дыхательных путей гиперемирована. Легкие переполнены кровью, с очагами красной и серой гепатизации. Возможны отек легких и пневмония. На плевре отмечают точечные и полосчатые кровоизлияния, в плевральной полости — серозно-фибринозный экссудат. Лабораторная диагностика чумы плотоядных заключается главным образом в обнаружении возбудителя болезни путем выявления в патматери-але вирусных антигенов и генома, реже активного вируса, проведении биопробы, а также установлении нарастания титра специфических антител в парных сыворотках. В лабораторной практике диагностики чумы плотоядных нашли применение следующие методы: биопроба на восприимчивых животных, РСК, обнаружение телец-включений, РДП, реакция иммуноосмофореза, РПГА, РЗГА, РИФ, ИФА, выделение вируса чумы в культуре клеток. Серологическая диагностика применяется лишь в экспериментальных целях. При дифференциальной диагностике следует учитывать, что на отдельных стадиях развития болезни чума сходна с лептоспирозом, инфекционным гепатитом, бешенством,болезнью Ауески, парвовирусной инфекцией собак, сальмонеллезом, пироплазмозом и некоторыми гельминтозами. гипериммунные сыворотки и глобулины. Для защиты клеток организма от инфицирования вирусом можно применять различные интерфероны — канивирекс, реоферон, миксоферон, кинорон и иммуностимуляторы (Т- и В-активин, достим, левамизол, гликопин и др.). Для регуляции восстановительных процессов в желудочно-кишечном тракте рекомендуется применять пробиотики — лактобактерин, бифидум-бактерин. При легочной форме — антибиотики (циклофлоксацин, цефалоспорины), отхаркивающие средства. Расстройства ЦНС корригируют кортикостероидами (дексаметазон, гидрокортизон), барбитуратами (пенстатин, контрикан и др.). Эпилептиформные припадки и судороги подавляют седативными и противосудорожными препаратами — фенлепсином, сибазоном, радедормом и новокаиновыми блокадами. При параличах и парезах назначают стрихнин, прозерин, высокочастотную и магнитную терапию.м

70.вирус гепатита плотоядных. Методы лаб диагностики и средства спец проф-ки и лечения. Инфекционный гепатит плотоядных (лат.- Hepatitis infectiosa carnnovorum, англ. - Infectious canine hepatitis, гепатит плотоядных, болезнь Рубарта) - острая контагиозная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, катаральным воспалением слизистой оболочки дыхательного и пищеварительного тракта, поражением глаз, печени и центральной нервной системы.  Возбудитель   гепатита   плотоядных -   ДНК-содержащий   вирус   из   рода Mastadenovirus семейства Adenoviridae. По вирулентности штаммы несколько различаются, но все они однородны в антигеном отношении. В зависимости от выраженности тропизма к ткани печени или мозга штаммы вируса подразделяют на нейро- и гепатотронные. Вирус культивируется в культурах клеток эпителия вызывая в них выраженное ЦПД с образованием внутриядерных телец-включений.  Вирионы возбудителя гепатита плотоядных располагаются в ядрах клеток. Структура их включает преципитирующий, гемагглютинирующий и комплементфиксирующий антигены. У всех штаммов имеются одинаковый групповой и специфические комплементсвязывающие антигены. Вирус устойчив к различным физическим факторам. При замораживании, высушивании и в 50%-ном растворе глицерина при комнатной температуре вирус остаётся вирулентным в течение нескольких лет, в природе он может сохраняться более двух лет. При температуре 4°С вирус сохраняется активность более 9 мес., при 37°С - до 39 дней, 50°С - 150 мин., 60°С - 3-5 мин., 100°С - 1 мин. Возбудитель устойчив к эфиру, хлороформу и метанолу и не неустойчив к формалину, лизолу, фенолу, свежегашеной извести, которые инактивируют его втечение 30 мин.  Лечение. Высокой лечебной эффективностью в начале болезни обладает поливалентная сыворотка против чумы плотоядных, инфекционного гепатита и парвовирусного    энтерита    собак.    Из    симптоматических    средств   терапии наибольшее применение получили витамины группы В, аскорбиновая кислота, поливитамины, гепатопротекторы - сирепар, эссенциале, карсил и др. При секундарных инфекциях больным назначают антибактериальные препараты. В настоящее время для лабораторной диагностики гепатита с положительным результатом апробированы также различные серологические и биологические методы. Среди них широкое применение нашла РДП. Данную реакцию применяют для ретроспективной диагностики вирусного гепатита, для обнаружения вируса с заведомо известными антисыворотками, а также для дифференциальной диагностики. Кроме РДП при лабораторной диагностике инфекционного гепатита собак используют РСК, РГА, РЗГА, РИФ, РН и биопробу путем заражение щенков в переднюю камеру глаза и выделение вируса в культуре клеток.  Инфекционный гепатит собак необходимо дифференцировать от чумы, лептоспироза,   сальмонеллёза,    парвовирусного   энтерита   собак.    Решающее значение при этом придается лабораторным методам исследования.

27. Люминисцентная микроскопия. Сущность, методы обработки препаратов.Люминесцентная микроскопия (микроскопическое изучение люминесцирующих объектов в ультрафиолетовом свете с помощью специального люминесцентного микроскопа, снабженного источником ультрафиолетовой радиации и соответствующими светофильтрами) – метод микроскопии, позволяющий наблюдать первичную или вторичную люминесценцию микроорганизмов, клеток, тканей или отдельных структур, входящих в их состав.При взаимодействии света с веществом может происходить преломление световых лучей и их рассеяние, либо поглощение фотонов молекулами, или то и другое вместе. Если произошло поглощение кванта света, то через 10-9с может происходить испускание части поглощённой энергии в виде кванта света с большей длиной волны: такое излучение называется люминесценцией. Различают собственную (первичную) люминесценцию, наблюдаемую без окрашивания, и вторичную (наведённую), которая возникает после обработки химическим агентом или красителем.Цвет люминесценции, т.е. длина волны излучаемого света зависит от химической структуры и от физико–химического состояния микроскопируемого объекта, что и обуславливает возможность использование люминесцентной микроскопии в целях микробиологической и цитологической диагностики, для дифференцирования отдельных компонентов клеток.У подавляющего большинства биологических объектов их собственная неяркая люминесценция не позволяет проводить люминесцентно-микроскопические исследования и для избирательного выявления определённых структур применяют люминесцентные красители - флуорохромы. Известно несколько десятков органических соединений, с успехом используемых в качестве флуорохромов. К ним относятся красители: тиазоловые, хинолиновые, азокрасители и особенно акриловые производные. Хорошими флуорохромами являются некоторые естественные пигменты (хлорофилл, липохромы), алкалоиды (берберин, хинин), углеводороды (бензпирен, дибензаантрацен). Флуорохромы применяются в сильно разведённых водных или спиртовых растворах (от 1:1000 до 1:100000). Флуорохромирование проводят либо прижизненно, либо на фиксированных препаратах. Методы: флюорохромирования и флюорисцирующих АТ (прямой, непрямой)

28. Метод Флюорохромирования.МФ основан на окрашивании мазков спец флюорохромными красителями (ФИТЦ). После окрашивания мазок помещают под люм микроскоп, где благодаря ртутно-кварцевым лампам на мазок направляется пучок УФ-лучей, и исследователь в объектив видит светящиеся тельца включения в ядре либо в цитоплазме клетки.

29. Метод флюоресцирующих АТ.МФА основан на специфич свечении образовавшегося комплекса (АГ+АТ) и по существу является аналогом серологической реакции (есть прямой и непрямой, см. 30 и 31)

30. Прямой метод флюоресцирующих АТ.Для работы используют мазки, мазки-отпечатки, гистосрезы. Предполагают, что имеется возбудитель, который является АГ, поэтому на мазок наносят предположит специфич сыворотку (данному возбудителя), меченую флюорохромным красителем (ФИТЦ), препарат помещают в чашку Петри, туда кладут кусок ваты, смоч водой (влажная камера), чашку пом в термостат при темп 37 на 30 мин, препарат вынимают, промывают водой, высушивают и смотрят под иммерс увелич люмин микроскопа. В + случае (АГ и АТ специфичны) обр светящийся комплекс, в – случае – тёмное поле, тк флю АТ смываются при проиывании. Недостаток: необходимо иметь в наличии специфич флюорохр сыворотки на кажд возбудителя болезни (дорогие, малый срок хранения).

31. Непрямой метод флюоресцирующих АТ.1. С использованием антивидовых сывороток.На мазок, мазок-отпечаток, гистосрез нанос предположит специфич сыворотку, пом во влажную камеру при т 37 на 30 мин, препарат промывают, наносят ав сыворотку, меченую ФИТЦ, контакт во влажн камере 30 мин при т 37, препарат промывают, смотрят под иммерс увелич люм микроскопа (+ - свечение, - - тёмный фон).(ав сыворотку получают на биокомбинатах путём гипериммунизации кроликов сывороткой крови того вида животного, на котором была наработанапредположит специфич сыворотка, теАТ в спец сыв-ке становятся АГ для ав сыв_ки, обр комплекс АГ+АТ+АВС+ФИТЦ).2.С использованием антикомплиментарных сывороток.Аналог реакции связ копмлемента (2 сист, 5 компонентов). На мазок, отпечаток, гистосрез наносят предположит специфич сыв-ку, комплемент морской свинки, контакт во влажной камере 30 мин т 37, препарат промывают, наносят ак сыв-ку, меч флюорохромн красит, контакт во влажн кам 30 мин т 37, промывают, микроскопируют под имм увелич люм микроскопа. (+ - свечение, - - тёмный фон). (ак сыв-ку получ набиокомб путём гипериммунизацией кроликов сыв крови или компл морск свинки. Для кролика она явл АГ, на кот выр АТ, это и есть ак сыв-ка, её метят фитцем, в реакции комплемента для неё будет являться АГ, вследствие обр комплекс, кот будет светиться благодаря фитцу)

32. Куриные эмбрионы, отбор, подготовка к заражению, применение.Преимущества: экономич выгода, не имеют своей иммунной системы, на вир не вырабат АТ, скорлупа предотвр проникновение в него бактерий и вирусов извне, не треб спец ухода.Условия: яйца для инкубации берут из благополучныз по заболеванию районов (хозяйств), яйца дб оплодотворены (пом в инкубатор, 3-4 суток инкубирования, в овоскоп, удал брак яйца), инкубируют не позднее 20 дней после оплодотв, яйца с белой скорлупой, дб чистыми (мыть нельзя).Применение: выделение вирусов из патмат, поддержание вирионов в усл лаб, биомодель для постановки РН, наработка вакцин.

33. Строение куриного эмбриона (рисунок), методы, техника заражения.Методы: на ХОА аболочку, в желточный мешок, в амнион, в тело эмбриона, в кровеносн сосуды (2 последних редко исп в связи с травматичностью)Техника заражения: В ХОА оболочку:1.Удаляют скорлупу в районе пуги, пинцетом приподнимают подскорл оболочку, шприцом вводят вируссод мат в объёме 0,2 мл, сверху одевают стекл колпачок, края парафинируют, чтоб воздух не проходил.2.Под контролем овоскопа опред границу пуги, выпил треугол отверст на границе пуги и ХОА об, пинцетом приподн подскорл об, внос вируссод мат.3.Под овоскопом опред место предлеж эмбриона, яйцо кладут горизонтально и со стор предлеж эмбр выпил квадратн отверстие, выруссод мат наносят на ХОА об, для этого параллельно верхней части пуги пробойником делают отверстие, при помощи груши отсас воздух из пуги, в рез-те обр искусственная пуга в районе выпил окошк, приподн подскорл об-ку, нанос вируссод мат. Большое отв заклеивают пластырем, маленькое – парафинируют.Заражение в ХАО полость:1.Под овоскопом отмечают границу пуги, пробойником дел отверстие в верхн части пуги и шприцом вводят вс мат на глубину 0,2 см ниже очерченной границы пуги, отверстие парафинируют.2.Под овоскопом опр место предлеж эмбр, яйцо кладут горизонтально в верхнем предлеж эмб, шприцом вводят вс мат в бессосудист участок на глубину 0,2 см.Заражение в желточный мешок:1.Под контролем овоскопа наход место предлеж эмбр, пробойником дел отверст в районе пуги, вносят шприцом вс мат под углом 45 градусов к месту предлеж эмбр на глубину 0,5 см, отверстие парафинируют.2. Горизонтально нижнему предлеж эмбр пробойником дел отверст в бессосуд полости и внос вс мат на глубину 0,5 см.Заражение в амнион:Удал скорлупу в районе пуги, приподн подскорлуп оболочку пинцетом, другим пинцетом захват амнион с эмбрионом, подтягивают его к краю яйца, вводят в амнион шприцом вс мат.Заражённые эмбр помещ в термостат, наблюд ведут в теч 3-4 суток. После гибели эмбр – в холодильник, затем вскрывают.

34.Понятие о культурах тканей.кт – участки клеточного роста в спец пит среде ин витро. Можно получить из любого органа и ткани животного и человека, поэтому можно не исп дорогостоящ лаб и естественно восприимч животных. Исп органы молодых жив-х и эмбрионы, тк вирусы лучше размножаются в молодых и интенсивно раст орг.Цели: выделение вирусв из патмат, поддерж вир в усл лаб, наработка вакцин, биомодель для пост РН и РГАд, титрование вирусов, изуч взаимод вируса с клеткой.Требования: макс стерильность, пасуда нейтральная, поддерж и ростовые среды (в составе – ср Игла, 199, р Хенкса, гидролизат лактатальбумина; в ростовой – сыв крови; индикатор фенолрот: красный цве – пш среды нейтральна, жёлтая мутная – бакпророст, жёлтая прозрачная – гибель клеток, малинов – зещелач посуда)Классификация: Переживающие, Растущие (плазменные, монослойные: первично-трипсинизир, субкультуры, диплоидные, перевиваемые)юТехника приготовления: Переживающие: готовят из орг и тк, кот измельч, отм от ФЭК ФБР, залив в спец пит среду, клетки во взвеш сост (Живые, но тер спос к пролиферации). Исп редко, против ящура)Растущие:1 Плазменные: орг и тк измельч, отм от ФЭК ФБР, во флакон внос плазму крови кур, пинцетом расп клетки в виде островков, для прикрепл – экстракт из кур эмбр (плазма сворачивается) или подогр дно до 45 град, залив рост среду, пом в термостат при т 37, через 2 суток – рост в виде пучков.2 Монослойные : расп в 1 слой. В частности:1.Первично трипсинизирванные: из люб орг и тк, 9-10 сут эмбриона, измельчают, отмыв от ФЭК ФБР, центрифугир (Ц), к осадку – 0, 25% трипсин, на магнитн мешалку на 30 мин при т 37. Трипсин расщипл кусочки тканей на отд клетки. Фильтруют через марлю, Ц в ФБР, р удаляют, осадок развод рост средой, доводя конц клеток до 40-80 тыс в 1 мл при пом кам Горяева. Клетки разлив по флаконам2.Субкультуры получ из перв трипс. Удал рост среду, сним монослой при пом р-ра версена, отмыв от р-ра путём Ц, к осадку доб трипсин, далее см. перв трипсин.3 Диплоидные: из перв трипс путём многократн пересевов на пит сред, клетки сохр жизнеспособн в теч 10 мес, потом – дегенерат измен и гибель4.Перевиваемые: из опухол или дипл после обр УФЛ и ультразвуком, дипл приобр св-ва злокач опухолей.