1

МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОСОБИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВ ПО ЦИТОЛОГИИ, ЭМБРИОЛОГИИ И ОБЩЕЙ ГИСТОЛОГИИ

Разработаны коллективом кафедры гистологии КГМА

Цель изучения студентами настоящего предмета – знать и понимать основы цитологии, гистологии и эмбриологии.

1.Знать и понимать современные сведения о микроскопической и субмикроскопической организации животной клетки и всех ее компонентов.

2.Знать и понимать основные закономерности структурной организации и функций тканей, их клеточный состав и неклеточные структуры.

3.Знать и понимать современные данные о микроскопическом и субмикроскопическом строении всех органов человека и их гистофизиологии.

4.Знать и понимать закономерности эмбрионального развития человека и позвоночных животных.

5.Уметь определять в гистологических препаратах все типы тканей.

6.Уметь идентифицировать в гистологических срезах органы всех систем организма и определять в них наиболее важные структуры.

7.Подсчитывать лейкоцитарную формулу в мазке крови человека.

8.Уметь грамотно зарисовывать в альбом гистологические и цитологические эмбриологические препараты.

9.Читать электроннограммы клеток и тканей.

10.Уметь работать с литературой и писать рефераты.

Правила микроскопирования

На кафедре биологии Вы уже работали с микроскопом. В курсе физики изучали его устройство и принципы построения изображения этим оптическим устройством. На занятиях по гистологии Вы должны использовать эту информацию и четко применять на практике следующие правила микроскопирования:

0. Перед работой с микроскопом проверить и убедиться в том, что конденсор поднят вверх до упора и его диафрагма открыта. В противном случае Вы получите слабое освещение изучаемого объекта и его некачественное изображение. В дополнение будет нежелательная дополнительная нагрузка на зрение. Убедитесь в том, что зеркало к источнику света обращено его вогнутой стороной. Поверните зеркало так, чтобы в оптическое устройство поступал максимум потока света. При правильной настройке освещения верхняя линза конденсора должна ярко высвечивать.

2

1.Перед микроскопированием определить рабочую поверхность (верх препарата). На этой стороне наклеена этикетка. Если ее нет, пальцами нащупать покровное стекло – это и будет рабочая поверхность.

2.Установить револьвер микроскопа на малое увеличение (объектив с маркировкой 8Х). Установить препарат на столик рабочей плоскостью вверх. Сфокусировать макровинтом изображение (резкое изображение объекта). Помните – между фронтальной линзой объектива 8Х и покровным стеклом должно быть расстояние в толщину мизинца. Несоблюдение этого правила приведет к фатальной ошибке. При переходе на работу с объективом большого увеличения Вы не только разобьете препарат, но и повредите фронтальную линзу объектива!

3.При переходе к работе с большим увеличением (объектив с маркировкой 40Х) Вы должны знать, что при этом увеличении макровинтом настраивать изображение нельзя. Для этого существует микровинт.

4.Препарат (особенно если его срез толстый) физически имеет несколько параллельных плоскостей. С помощью микровинта можно плавно перемещаться по ним (как бы рассматривать препарат «в глубину»). Особо это важно при работе с большим увеличением.

5.При работе с мононуклеарным микроскопом (это все микроскопы, находящиеся в учебной комнате) просмотр препарата производится «одним глазом». Второй глаз н е надо закрывать («прищуривать»). При такой неправильной работе Вы переутомляете глазодвигательные мышцы. Второй глаз должен быть открытым и настроенным на «виртуальную бесконечность».

6.Если у Вас проблемы со зрением, то приучайтесь работать с микроскопом в Ваших очках. Прибор рассчитан на такой метод работы.

7.По окончании работы с микроскопом револьвер установить на 8 кратное увеличение и убрать со столика препарат.

8.Транспортировать микроскоп с «места на место», и в другие помещения можно только придерживая его снизу второй рукой за подошву (башмак). В противном случае Вы можете повредить механизм микровинта микроскопа и тем самым выведете его из строя.

9.Не надо «просто так» крутить у микроскопа макровинт и микровинт

ирасслаблять механические крепления микроскопа. Нельзя из микроскопа извлекать зеркало.

Соблюдение вышеперечисленных правил позволит предохранить микроскоп и гистологические препараты от повреждения и не переутомить Ваше собственное зрение.

Занятие № 1 Тема: ОСНОВЫ ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ ТЕХНИКИ. ТКАНЕВЫЕ

ЭЛЕМЕНТЫ

Перечень вопросов, которые студенты должны знать и понимать по теме данного занятия.

1. Определение науки «гистология», ее разделы.

3

2.Основные этапы гистологической техники

3.Определение термина «тканевые элементы».

4.Определение понятия «клетка».

5.Определение понятия «промежуточное вещество».

6.Определение термина «симпласт».

Препарат 1. Животная клетка печени аксолотля. Окраска гематок-

силин – эозином. Увеличение 40х7. При увеличении 8х7 просмотреть весь препарат и поставить в центр поля зрения более светлый участок. Перевести на сильное увеличение, изучить и зарисовать несколько печеночных клеток с бледно-розовой цитоплазмой и сине-фиолетовыми ядрами.

Обозначения: 1. цитоплазма печеночной клетки; 2. ядро; 3. границы клеток.

Препарат 2. Клетки и промежуточное вещество эластического хряща. Окраска орсеином и гематоксилином. Увеличение 40х7. Под малым увеличением просмотреть весь препарат и поставить в центр поля зрения срединный участок. Перевести на увеличение 40х7 и зарисовать 2-3 группы клеток с ядрами сине-фиолетового цвета и многочисленными волокнами красно-коричневого цвета на бледно окрашенном фоне.

Обозначения: 1. цитоплазма хрящевой клетки; 2. ядро; 3. эластические волокна; 4. промежуточное вещество.

Препарат 3. Симпласт – поперечнополосатые мышечные волокна языка. Окраска железным гематоксилином. Увеличение 40х7. При малом увеличении найти продольные срезы мышечных волокон черного или темносинего цвета и поставить их в центр поля зрения. Перевести на увеличение 40х7 и зарисовать два продольных среза мышечного волокна.

Обозначения: 1. сарколемма; 2. саркоплазма; 3. ядра; 4. симпласт /отметить скобкой/.

Занятие № 2 Тема: УЛЬТРАСТРУКТУРА ЦИТОПЛАЗМЫ КЛЕТКИ

Перечень вопросов, которые студенты должны знать и понимать по теме занятия.

1.Субмикроскопическое строение цитоплазмы клетки.

2.Химический состав и функции цитолеммы.

3.Агранулярная эндоплазматическая сеть, ее функции.

4.Гранулярная эндоплазматическая сеть, рибосомы, их функции.

5.Комплекс Гольджи, ультраструктура и функции.

6.Лизосомы, химический состав и функции.

7.Электронномикроскопическое строение и функции пероксисом.

8.Ультраструктура и функции митохондрий.

9.Цитоплазматические микротрубочки, клеточный центр, строение и

4

функции.

Препарат 1. Комплекс Гольджи в нервных клетках спинального ганглия. Окраска осмиевой кислотой. Увеличение 40х7. На малом увеличении на периферии среза найти более крупные клетки и перевести на увеличение 40х7. Комплекс Гольджи в цитоплазме нервных клеток представлен совокупностью коротких или изогнутых нитей, зерен черного цвета. Ядра клеток имеют, светлую окраску.

Обозначения: 1. комплекс Гольджи; 2. ядро.

Препарат 2. Тигроидное вещество (эргастоплазма) в нервных клетках спинного мозга. Окраска толуидиновым синим. Увеличение 40х7. На малом увеличении найти самые крупные нервные клетки с отростками и перевести на увеличение 40х7. Ядро каждой нервной клетки светлое и содержит ядрышко синего цвета. В цитоплазме имеются многочисленные глыбки тигроидного вещества синего цвета, часто заходящие в отростки. Зарисовать одну клетку с отростками.

Обозначения: 1. глыбки тигроидного вещества (эргастоплазма); 2. ядро; 3. ядрышко; 4. отростки клетки.

Препарат 3. Клеточный центр в дробящейся зиготе. Окраска желез-

ным гематоксилином. Увеличение 90х7. Преподаватель с помощью иммерсионного масла настраивает микроскоп при увеличении 90х7. В центр поля зрения ставит круглую клетку (зиготу) в стадии митоза. По краям (вблизи полюсов) видны две центриоли в виде маленьких черных точек с отходящими от них очень тонкими нитями веретена деления, а в центре – хромосомы. Зарисовать одну делящуюся клетку.

Обозначения: 1. центриоли; 2. хромосомы; 3. нити веретена деления.

Занятие № 3 Тема: ОСНОВЫ ЦИТОГЕНЕТИКИ. ЦИТОФИЗИОЛОГИЯ

Перечень вопросов, которые студенты должны знать и понимать по теме занятия.

1.Микроскопические и ультраструктурные компоненты интерфазного ядра. Строение и функции ядерной оболочки.

2.Ядерные поровые комплексы. Ядерная пластинка, химический состав и значение.

3.Ультраструктурные компоненты ядрышка, химический состав и функции.

4.Хроматин: химический состав и сродство к красителям. Гетерохроматин и эухроматин, их связь с различными участками хромосом.

5.Элементарные хроматиновые фибриллы. Строение и химический состав нуклеосом.

6.Строение и типы хромосом. Изменение хромосом в различные ста-

5

дии митоза.

7.Определение понятия «жизненный цикл клетки». Жизненный цикл камбиальной клетки.

8.Периоды жизненного цикла дифференцированной клетки и их характеристика.

9.Определение понятия «дифференцировка клетки».

10 Секреция: определение понятия и стадии.

11.Определение понятия «фагоцитоз», характеристика его стадий.

12.Характеристика пиноцитоза и пиноцитоза, опосредованного рецепторами.

Препарат 1. Включения гликогена в клетках печени. Окраска: кар-

мином по Бесту и гематоксилином. Увеличение 40х7. После просмотра препарата при малом увеличении поставить в центр поля зрения любой участок среза и перевести на увеличение 40х7. Ядра клеток печени окрашены в синий цвет, а гликоген в цитоплазме – в ярко-красный цвет. Зарисовать 4-5 клеток. Сделать обозначения: 1. ядро; 2. включения гликогена.

Препарат 2. Секреторные включения в клетках Лейдига. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 40х7. При малом увеличении найти клетки Лейдига, которые находятся по краю среза лишь только с одной стороны препарата и отличаются красной окраской цитоплазмы. Поставить в центр поля зрения 1-2 клетки Лейдига и перевести на увеличение 40х7. Вся цитоплазма клетки заполнена крупными круглыми секреторными гранулами, окрашивающиеся эозином в красный цвет. Ядро клетки окрашивается гематоксилином в сине-фиолетовый цвет. Зарисовать одну клетку Лейдига.

Обозначить: 1. ядро клетки; 2. секреторные гранулы.

Препарат 3. Жировые включения в клетках печени. Окраска: ос-

миевой кислотой и сафранином. Просмотреть весь препарат при малом ув е- личении, найти участок с более крупными включениями черного цвета, поставить в центр поля и перевести на увеличение 40х7. Жировые включения окрашены осмиевой кислотой в черный цвет и имеют круглую форму различных размеров. Ядра клеток печени окрашены сафранином в красный цвет. Границы между клетками имеют розовый цвет. Зарисовать одну печеночную клетку.

Обозначить: 1. ядро; 2. жировые включения.

Препарат 4. Пигментные включения в хроматофорах. Неокрашен-

ный препарат. Увеличение 40х7. При малом увеличении видны многочисленные отростчатые клетки, часто расположенные вплотную или несколько слоев. Следует выбрать изолированную клетку, поставить в центр поля зрения и перевести на увеличение 40х7. В цитоплазме отростков клетки содержится очень много пигментных включений коричневого цвета, имеющих мелкие размеры и вплотную прилежащих друг к другу. В центре клетки пиг-

6

ментные включения отсутствуют, где имеется круглое пятно (светлое ядро). Зарисовать одну клетку.

Обозначить: 1. отростки; 2. пигментные включения.

Препарат 5. Ядро клетки, ядрышко и хроматин. Окраска гематокси-

лин-эозином. Увеличение 40х7. При малом увеличении найти крупные клетки с розовой цитоплазмой и очень нежным ядром. Перевести ее изображение на большое увеличение микроскопа. Зарисовать ее с требуемыми структурами.

Обозначения: 1. цитоплазма; 2. ядро; 3. кариолемма; 4. ядрышко; 5. эухроматин.

Занятие № 4 Тема: ЭМБРИОНАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ МЛЕКОПИТАЮЩИХ

Перечень вопросов, которые студенты должны знать и понимать по теме занятия.

1.Периоды эмбрионального развития млекопитающих и их характеристика.

2.Почему яйцеклетка млекопитающих является вторично изолецитальной?

3.Дробление зиготы млекопитающих. Образование и строение бластоциста.

4.Имплантация.

5.1 фаза гаструляции.

6.2-я фаза гаструляции.

7.Провизорные органы млекопитающих.

8.Источники образования плаценты. Типы плацент.

Препарат 1. Яйцеклетка (овоцит 1-го порядка) кошки. Окраска ге-

матоксилин-эозином. Увеличение 40х7. Под малым увеличением в срезе яичника найти растущий фолликул, имеющий крупные размеры, круглую форму. Поставить в центр поля зрения растущий фолликул и перевести на увеличение 40х7. Большую часть растущего фолликула занимает крупный овоцит 1-го порядка. Его цитоплазма окрашивается эозином в розовый цвет. В центре овоцита располагается ядро, окрашенное гематоксилином в синефиолетовый цвет. Снаружи располагается многослойный фолликулярный эпителий (чаще в 2-3 слоя), окружающий со всех сторон овоцит 1-го порядка. Зарисовать растущий фолликул.

Обозначить: 1. цитоплазма овоцита 1-го порядка; 2. ядро; 3. многослойный фолликулярный эпителий.

Препарат 2. Сперматозоиды морской свинки. Окраска железным ге-

матоксилином. Увеличение 40х7. При малом увеличении найти половые клетки и перевести на увеличение 40х7. Зарисовать 2-3 сперматозоида.

7

Обозначить: 1. головка; 2. ядро; 3. акросома; 4. хвостик.

Занятие № 5 Тема: 1-й КОЛЛОКВИУМ (по цитологии и эмбриологии)

Перечень вопросов к 1-му коллоквиуму, которые студенты должны знать и понимать.

1.Предмет и разделы гистологии. Объекты исследования. Гистологические методы исследования. Задачи и проблемы гистологии. Связь гистологии с другими науками.

2.Основные этапы гистологической техники. Определение понятий: оксифилия, базофилия, полихроматия, метахромазия.

3.Виды тканевых элементов, их определение.

4.Определение понятия «клетка». Общий план субмикроскопического строения клетки.

5.Цитолемма: химический состав, молекулярная организация и функции. Виды межклеточных контактов.

6.Эндоплазматическая сеть, виды, функции. Ультраструктура. Химический состав и функции рибосом.

7.Комплекс Гольджи: микроскопическое, субмикроскопическое строение, функции.

8.Лизосомы: ультраструктура, химический состав, виды, функции.

9.Митохондрии: микроскопическое, электронно-микроскопическое строение, химический состав и функции.

10.Пероксисомы, электронно-микроскопическое строение, химический состав и функции.

11.Цитоплазматические микротрубочки: строение, химический состав и функции. Клеточный центр.

12.Гиалоплазма: внутриклеточная локализация, химический состав и функции.

13.Структурные компоненты интерфазного ядра. Ядерная оболочка, ядерные поровые комплексы. Ядерная пластинка: химический состав и функции.

14.Гетерохроматин и эухроматин: химический состав и функции. Элементарные хроматиновые фибриллы. Строение и химический состав нуклеосом.

15.Ядрышко: ультраструктурные компоненты, химический состав и функции. Формирование субъединиц рибосом в ядрышке.

16.Хромосомы: типы, строение, изменения в течение митотического цикла.

17.Определение понятия «Жизненный цикл клетки». Камбиальные клетки: определение понятия и их жизненный цикл. Характеристика стадий митоза.

18.Жизненный цикл дифференцированной клетки: периоды и их характеристика. Определение понятия «Дифференцировка клетки».

8

19.Пиноцитоз. Образование и функции окаймленных пузырьков.

20.Амитоз: виды и характеристика. Эндомитоз.

21.Определение понятия «фагоцитоз». Стадии фагоцитоза и их характеристика.

22.Определение понятия «Секреция». Стадия секреции и их характеристика.

23.Апоптоз. Определения понятия. Морфологические изменения при апоптозе.

24.Определение понятия «онтогенез», «эмбриогенез» и «прогенез». Периоды эмбрионального развития позвоночных животных и их характеристика.

25.Строение зрелых половых клеток млекопитающих. Почему яйцеклетку млекопитающих называют вторично изолецитальной? Оплодотворение у млекопитающих. Характеристика периода «зиготы».

26.Дробление у млекопитающих. Отличие дробления от митоза. Строение морулы млекопитающих. Образование бластоцисты. Зависимость типа дробления от содержания желтка в яйцеклетке у разных позвоночных животных.

27.Имплантация у млекопитающих: стадии и их характеристика.

28.1 фаза гаструляции у млекопитающих. Определение понятия «презумптивный материал». Расположение презумптивного материала в эпибласте и первичной энтодерме.

29.2 фаза гаструляции у млекопитающих. Образование нервной пластинки.

30.Определение понятия «провизорные органы». Образование желточного мешка и аллантоиса, их функции.

31.Источники образования амниона у млекопитающих, его функции.

32.Источники образования хориона у млекопитающих, его функции.

33.Источники образования плаценты. Типы плацент в зависимости от связи хориона со слизистой оболочкой матки.

34. Дифференцировка зародышевых листков. Производные эктодермы, энтодермы и мезодермы у позвоночных животных и человека.

Занятие № 6 Тема: ЭПИТЕЛИАЛЬНЫЕ ТКАНИ

Перечень контрольных вопросов по теме занятия, которые студенты должны знать и понимать.

1.Общая характеристика эпителиев.

2.Классификация эпителиев (морфологическая, генетическая, функциональная).

3.Особенности строения и места локализации однослойных однорядных эпителиев.

4.Особенности строения и места локализации однослойного многорядного эпителия.

9

5.Строение многослойного плоского ороговевающего эпителия.

6.Строение и локализация многослойного плоского неороговевающего эпителия.

7.Строение многослойного плоского ороговевающего эпителия.

8.Особенности строения и локализация переходного эпителия.

9.Железистый эпителий. Секреция. Фазы секреции.

10.Характеристика эндокринных желез.

11.Экзокринные железы их классификация.

Препарат 1. Однослойный цилиндрический эпителий. Окраска ге-

матоксилин-эозином. Увеличение 40х7. При сильном увеличении, на препарате будут видны канальца почек (с наличием просвета) срезанные поперек. У эпителиоцитов выстилки просвета высота больше ширины. Это однослойный однорядный цилиндрический эпителий. Под пластом эпителия располагается подлежащая соединительная ткань. Ядра клеток окрашиваются гематоксилином в синий цвет, а цитоплазма эозином в розовый оттенок. Зарисовать один каналец с окружающей соединительной тканью.

Сделать обозначения: 1. просвет канальца; 2. клетки цилиндрического эпителия; 3. ядро; 4. цитоплазма; 5. апикальный полюс клетки (ближе к просвету канальца); 6. базальный полюс клетки (ближе к соединительной ткани); 7. подлежащая соединительная ткань.

Препарат 2. Однослойный многорядный мерцательный эпителий.

Окраска железным гематоксилином. Увеличение 40х7. На препарате при данном малом увеличении необходимо найти темную полоску эпителия граничащего с полостью. Под эпителием лежит соединительная ткань, красящаяся в более светлые серые тона. Ядра клеток эпителиального пласта лежат на разных уровнях. Нижний их ряд (относительно базальной мембраны) принадлежит коротким вставочным клеткам, следующий ряд представлен ядрами длинных вставочных клеток. Бокаловидные клетки, в виде овальных пустых дырочек. Мерцательные клетки пласта имеют на апикальной поверхности реснички, а их ядра занимают самый верхний ряд. Зарисовать фрагмент эпителиального пласта с подлежащей соединительной тканью.

Обозначить: 1. пласт эпителия; 2. ядра коротких вставочных клеток; 3. ядра длинных вставочных клеток; 5. ядра мерцательных клеток; 6. реснички мерцательных клеток; 7. подлежащая соединительная ткань.

Препарат 3. Многослойный плоский ороговевающий эпителий.

Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 40х7. Препарат представляет собой срез кожи пальца человека. Под малым увеличением необходимо найти эпителиальный пласт, граничащий с внешней средой. При этом увеличении видно, что граница эпителия с соединительной тканью (в месте локализации базальной мембраны) имеет характерный извилистый характер. Это обусловлено взаимным врастанием двух видов тканей. Соединительная ткань

10

окрашивается оксифильно за счет ее волокон. При большом увеличении просматриваются все слои эпителиального пласта.

Нижний слой эпителия - это клетки цилиндрической формы с овальными ядрами. Они лежат на базальной мембране, которая не видна под микроскопом при окраске гематоксилин-эозином. Выше расположено несколько слоев крупных клеток полигональной формы с круглыми ядрами – шиповатый слой. Ядра клеток базального и шиповатого слоев окрашиваются базофильно, а цитоплазма - оксифильная.

Далее следуют несколько слоев клеток уплощенной формы с базофильной грануляцией - это зернистый слой. В клетках его ядер не видно, так как они замаскированы множеством кератогиалиновых гранул окрашенных базофильно. Следующий слой – блестящий, границы клеток в нем не различимы. Слой выглядит в виде яркой оксифильной полосы из-за наличия в нем белка элеидина. Последним будет слой роговых чешуек (роговой слой), окрашивающийся ярко эозином. Зарисовать небольшой участок эпителиального пласта с подлежащей соединительной тканью.

Обозначения: 1. пласт эпителия /скобкой/; 2. подлежащая соединительная ткань /скобкой/; 3. базальный слой; 4. шиповатый слой; 5. зернистый слой; 6. блестящий слой; 7. роговой слой.

Препарат 4. Многослойный плоский неороговевающий эпителий.

Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 40х7. Вы будете изучать поперечный срез пищевода. Просвет его выстлан многослойным плоским эпителием. Эпителий надо искать при малом увеличении и со стороны просвета органа. После этого перейти на большое увеличение.

Самый глубокий слой эпителия, лежащий на границе с соединительной тканью – это базальный слой клеток. Ядра этих клеток имеют овальную форму. Далее следуют несколько слоев клеток шиповатого слоя, имеющих более крупные размеры и ядра округлой формы. На поверхности эпителиального пласта имеются 1-2 слоя плоских клеток с очень темными уплощенными ядрами. Ядра всех слоев клеток окрашиваются базофильно (гематоксилином в синий цвет), а цитоплазма оксифильно (эозином в розовый цвет). Зарисовать небольшой участок эпителиального пласта с подлежащей соединительной тканью.

Сделать обозначения: 1. пласт эпителия /скобкой/; 2. подлежащая соединительная ткань /скобкой/; 3. базальный слой клеток; 4. шиповатый слой клеток; 5. слой плоских клеток.

Препарат 5. Переходный эпителий. Окраска гематоксилин-эозином.

Увеличение 40х7. Препарат представляет собой срез стенки мочевого пузыря. Переходный эпителий располагается с краю препарата, имеет выраженную складчатость, хорошо видимую при слабом увеличении микроскопа. Только при большом увеличении можно увидеть содержимое эпителиального пласта. Нижний слой клеток – базальный, лежит на границе с соединительной тканью. Их ядра небольших размеров круглой формы лежат на ба-