76.Аппаратура и практическое применение люминесцентного анализа.

Изучение явлений фотолюминесценции, а также проведение люминесцентного анализа происходит с помощью специальных приборов фосфороскопов, фотометров, флюорометров, люминоскопов. Фосфороскопы, люминоскопы - простейшие приборы, включающие источник возбуждающего излучения и набор светофильтров. Оценка интенсивности люминесценции производится визуально, как правило, методом стандартных серий. Фотометры, флюорометры имеют практически те же основные конструктивные узлы, что и все спектральные приборы: - источник света; - монохроматизатор света; - кюветы с исследуемым веществом; - узел определения интенсивности излучения.

Люминесценцию используют в иммунохимическом анализе для определения антител, гормонов, лекарственных препаратов, вирусных и бактериальных антител. При этом флуоресцирующее вещество присоединяют непосредственно к антителу и проводят измерение интенсивности люминесценции. Чувствительность метода - до 10^-14 моль/л. Флуоресцентный метод может быть использован для прямого и косвенного количественного анализа.

Схема и принцип действия фотометра люминесцентного. Принцип действия этого фотометра основан на сравнении интенсивности люминесценции растворов, возбуждаемой излучением лампы.

В оптической схеме можно выделить ветвь возбуждающего излучения и ветвь флуоресцентного излучения - измерительную ветвь. В ветвь возбуждающего излучения входят следующие элементы: ис­точник света, дающий излучение в диапазоне 300-600 нм; линза 2, с помощью которой расходящийся пучок от источника преобразуется в пучок параллельных лучей. Для подбора характеристик возбуждающего излучения в параллельном ходе лучей установлены сетчатые ослабители 3, 4 и переменная ирисовая диафрагма 11, регулирующие интенсивность, и избирательные поглотители 5-10 (цветные фильтры), с помощью которых подбирается спектральная характеристика возбуждающего излучения. Параллельный пучок лучей с помощью фокусирующей линзы 12 собирается в центре кювет 17 с исследуемым веществом, которые вводятся в измерительную ветвь поочередно. Каждая кювета имеет свою светоловушку 15. Кроме того, имеется поворотное зеркало 16. Светоловушки 15 и зеркало 16 предназначены для отвода потока возбуждения, прошедшего через кювету, и снижения фоновых помех. Ветвь флуоресцентного излучения, измерительная ветвь, расположена под углом 90° к направлению возбуждающего излучения. Для уменьшения рассеяния света перед кюветой на входе и выходе установлены ограничительные диафрагмы 1З и 14. Изображение светящегося объема люминесцирующего вещества из центра кюветы передается на входную щель 20 монохроматора. Перед входной щелью 20 установлено модулирующее устройство - обтюратор 19 -диск с отверстием, вращающийся с определенной скоростью. Благодаря обтюратору непрерывный световой поток люминесценции преобразуется в прерывистый, что необходимо для получения на выходе из прибора переменного электрического тока. Монохроматор в данном приборе работает по симметричной схеме с двумя сферическими объективами 24 (схема Черни-Тернера). Этот блок предназначен для выделения из потока флуоресцентного излучения лучей с определенной длиной волны, на которой проводится измерение. Поток флуоресцентного излучения, пройдя входную щель 20 и фильтры 21, 22, устраняющие наложение спектров разных порядков, попадает на поворотное зеркало 23, направляющее его на объектив -24. Этот объектив направляет полихроматический пучок на диспергирующий элемент монохроматора - дифракционную решетку 25, имеющую 600 штрих./мм. На дифракционной решетке полихроматическое излучение разлагается на составляющие его монохроматические компоненты. Выделение требуемой волны диапазона 400-800 нм производится поворотом дифракционной решетки, выделенное излучение фокусирующим объективом 24 направляется на поворотное зеркало 23 и через выходную щель 26 - на фотоприемник 30. Линза 27, зеркало 28 и объектив 29 предназначены для фокусировки выходящего светового пучка на катоде фотоприемника 30, в качестве которого в приборе ФЛ используется фотоумножитель ФЭУ-79. Измерительным прибором является микроамперметр со шкалой 0-100 мкА.