17. Правила патентования и регистрации музейных культур.

Под депонированием штамма микроорганизма понимается передача его в коллекцию, регистрация, хранение и выдача образца микроорганизма заинтересованным лицам в соответствии с установленными правилами. Депонированному штамму микроорганизма присваивается регистрационный номер, использующийся в дальнейшем для его идентификации в коллекции. В зависимости от целей осуществления депонирования, в БКМ различают следующие формы депонирования: хранение, гарантийное хранение, национальное патентное депонирование. На хранение принимаются штаммы, представляющие интерес для научных исследований и практического применения. Информация о штаммах, находящихся на хранении, помещается в каталог и электронную базу данных БКМ (открытые ресурсы), а сами штаммы выдаются по запросам заинтересованных лиц.

Проводится с целью обеспечения сохранности штаммов, представляющих интерес для депозитора. Депозитору выдается справка о приеме культуры на гарантийное хранение по установленной форме. Размер оплаты, взимаемой за гарантийное хранение штамма микроорганизма, определяется Приказом о размере оплаты, взимаемой за депонирование микроорганизмов и другие услуги, предоставляемые Белорусской коллекцией непатогенных микроорганизмов (далее Приказ). Коллекция сохраняет конфиденциальность информации о депонированном штамме в течение всего срока гарантийного хранения. Если в последующем на штамм или способ с его использованием подается заявка на патент, то по письменному заявлению депозитора, штамм может быть переведен на депонирование по форме «национальное патентное депонирование». При этом депозитору выдается свидетельство о депонировании по соответствующей форме с указанием даты первоначального депонирования. Гарантийное хранение осуществляется в течение срока, оговоренного при депонировании. По желанию депозитора и в случае осуществления соответствующей оплаты, срок гарантийного хранения может быть продлен. Если в течение 6 месяцев после окончания установленного срока гарантийного хранения от депозитора не поступит заявление об изъятии штамма или иное распоряжение (продление срока гарантийного хранения, перевод на национальное патентное депонирование и др.), штамм переводится на депонирование по форме «хранение».

До подачи заявки на патент информация о депонированном штамме является конфиденциальной. После подачи заявки на патент в Патентное Ведомство Республики Беларусь (далее Патентное Ведомство) образец депонированного микроорганизма может быть выдан Патентному Ведомству по его запросу. К этому запросу прилагается декларация, свидетельствующая о том, что в это ведомство подана заявка на патент, предметом которой является упомянутый микроорганизм или его использование, и что образец и любая информация, прилагаемая к нему или связанная с ним, будут использованы исключительно для целей патентной процедуры. После публикации сведений о выдаче патента, информация о штамме с указанием номера патента может быть внесена в каталог микроорганизмов и электронную базу данных БКМ (открытые ресурсы), а сам депонированный штамм может предоставляться третьим лицам: а) по письменному разрешению депозитора;

б) по письменному указанию Патентного Ведомства после представления запрашивающей стороной декларации с обязательством не передавать предоставленный депонированный штамм или любой штамм, полученный от него, третьим лицам, не вывозить за пределы юрисдикции патента, не использовать с целью получения прибыли в течение срока действия патента без соответствующего разрешения патентовладельца. В этом случае запрос на выдачу штамма должен содержать пояснение, в рамках выполнения какого госзаказа, гранта и т.д. и с какой целью будут проводиться исследования с запрашиваемым штаммом. Коллекция письменно уведомляет депозитора о произведенной выдаче. Депозитор сообщает в коллекцию информацию о подаче заявки на патент, о получении патента по заявке или об отказе в выдаче патента, а также о прекращении действия патента. Если в течение 3-х лет с момента депонирования в коллекцию не поступила информация о подаче заявки на патент (с указанием номера заявки и объекта патентования), а также если по заявке получен отказ в выдаче патента, возможности обжалования которого исчерпаны, то депонирование переводится в категорию «хранение» или, по просьбе депозитора, в категорию «гарантийное хранение». Срок хранения по форме «национальное патентное депонирование» может быть продлен по письменному заявлению депозитора, содержащему указание причин необходимости такого продления, но не более чем на 2 года. По окончании действия патента, микроорганизм переводится на депонирование по форме «хранение» и в каталог вносится соответствующее изменение.

Депонирование в БКМ может осуществляться как физическими, так и юридическими лицами. Датой депонирования штамма в БКМ считается дата поступления в коллекцию чистой и жизнеспособной культуры и всего комплекта правильно оформленных документов.

Депонированному штамму присваивается регистрационный номер, использующийся в дальнейшем для его идентификации.

При этом коллекция уведомляет депозитора об отказе в приеме на депонирование и о причинах такого отказа. Уведомление осуществляется письменно не позднее, чем через 14 дней с момента получения комплекта оформленных документов и образца штамма микроорганизма. Депонирование считается законченным с момента отправки депозитору справки о депонировании штамма микроорганизма по соответствующей форме. Ответственность за соответствие свойств депонируемого штамма данным, указанным в паспорте, несет депозитор.

Повторное депонирование осуществляется при патентной форме депонирования в случае утраты депонированным микроорганизмом жизнеспособности. При осуществлении повторного депонирования к микроорганизму, передаваемому депозитором, прилагается: - копия свидетельства о предшествующем депонировании; - письменное заявление депозитора, содержащее указание причины осуществления повторного депонирования, даты, на которую депозитор получил уведомление о потере микроорганизмом жизнеспособности, и утверждение, что повторно депонируемый микроорганизм является тем же, что и микроорганизм, депонированный первоначально. Повторное депонирование считается осуществленным на дату первоначального депонирования, если оно было осуществлено в пределах трех месяцев с даты получения депозитором уведомления о потере жизнеспособности. При осуществлении повторного депонирования, сдаваемый штамм проверяется на чистоту и жизнеспособность и депозитору выдается свидетельство установленного образца о повторном депонировании.

18. Бактерии группы кишечных палочек. В 1885 г. Эшерих открыл микроорганизм, который получил название Escherichia coli (кишечная палочка). Этот микроорганизм является постоянным обитателем толстого отдела кишечника человека и животных. Кроме Е. coli в группу кишечных бактерий входят эпифитные и фитопатогенные виды, а также виды, экология (происхождение) которых пока не установлена.

К бактериям группы кишечных палочек относят роды Escherichia (типичный представитель Е. coli), Citrobacter (типичный представитель Citr. coli citrovorum), Entero-bacter (типичный представитель Ent. aerogenes), которые объединены в одно семейство Enterobacteriaceae благодаря общности морфологических и культуральных свойств. Они характеризуются различными ферментативными свойствами и антигенной структурой.

Морфология. Бактерии группы кишечных палочек— это короткие (длина 1—3 мкм, ширина 0,5— 0,8 мкм) полиморфные подвижные и «еподвижные грамотрицателъные палочки, не образующие спор (рис. 1).

Культуральные свойства. Бактерии хорошо растут на простых питательных средах: мясопептонном бульоне (МПБ), мясопептонном агаре (МПА); На МПБ дают обильный рост при значительном помутнении среды; осадок небольшой, сероватого цвета, легко-разбивающийся;” Образуют пристеночное кольцо, пленка на поверхности бульона обычно отсутствует. На МПА колонии прозрачные с серовато-голубым отливом, легко сливающиеся между собой. На среде Эндо’ образуют плоские красные колонии средней величины. Красные колонии могут быть с темным металлическим блеском (Е. coli) или без блеска (Ent. aerogenes). Для лактозоотрицательных вариантов кишечной палочки (Bact. paracoli) характерны бесцветные колоний.

Ферментативные свойства. Большинство бактерий группы кишечных палочек не разжижают желатина, свертывают молоко, расщепляют пептоны с образованием аминов, аммиака, сероводорода, обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и других сахаров, а также спиртов.

Устойчивость. Бактерии группы кишечных палочек обезвреживаются обычными методами пастеризации (63—75°С). При 60°С кишечная палочка погибает через 15 мин. 1%-ный раствор фенола вызывает гибель микроба через 5—15 мин, сулема в разведении 1 : 1000 – через 2-мин.

Санитарно-показательное значение отдельных родов бактерий группы кишечных палочек. Бактерии рода Escherichia являются постоянными обитателями кишечника человека и животных, и обнаружение их в воде, почве, на пищевых продуктах свидетельствует о свежем фекальном загрязнении этих объектов. Это имеет большое санитарное и эпидемиологическое значение.

Бактерии родов Citrobacter и Enterobacter чаще обнаруживают в почве, на растениях, реже в кишечнике. Считают, что бактерии этих родов представляют собой результат изменения эшерихйй после пребывания их во внешней среде. Следовательно, Citrobacter и Enterobacter являются показателями более давнего фекального загрязнения и поэтому они имеют меньшее санитарно-показательное значение по сравнению с бактериями рода Escherichia.

19. Энтерококки: классификация, основные представители, общая характеристика, свойства, способность к токсинообразованию, содержание и нормирование в продовольственном сырье и пищевых продуктах, санитарно-эпидемическое значение. Бактерии семейства Lactobacillaceae, род Streptococcus. Энтерококки отличаются от стрептококков рядом морфологических, культуральных, ферментативных свойств и антигенной структурой, и выделяются в самостоятельную группу Enterococcus. Известно два вида энтерококков: S. faecalis и S. faecium. Грамположительные, попарно расположенные кокки, несколько вытянутые в длину, наружные концы их заострены, не образуют спор и капсул, им свойственен значительный полиморфизм (т.е. клетки различаются по размерам и форме); встречаются подвижные штаммы. Растут на простых средах, но лучше на средах, содержащих углеводы и факторы роста (дрожжевой экстракт, диализат). Ферментируют лактозу, маннит, глицерин, а сорбит, арабинозу, сахарозу – непостоянно и не все штаммы энтерококков. Санитарно-показательное значение -Энтерококки постоянные обитатели кишечника человека и животных. - В большом количестве выделяются во внешнюю среду. - Обнаружение в пищевых продуктах свидетельствует о фекальном загрязнении. - Более устойчивы, чем кишечные палочки к физическим и химическим воздействиям: - повышенным концентрациям солей, нагреванию, замораживанию, хлорированию. В связи с приведенными свойствами их рекомендуют использовать в качестве санитарно-показательных микроорганизмов при оценке качества пищевых продуктов: - с повышенной концентрацией соли, при исследовании минеральных источников, при оценке качества хлорирования питьевой воды, в качестве индикаторов того, что замороженные пищевые продукты до замораживания были обработаны в негигиеничных условиях. Присутствие энтерококков в пищевых продуктах прежде всего может быть следствием плохих гигиенических условий производства. Энтерококки (Enterococcus) - устойчивы к высушиванию, свету, низкой температуре. Чувствительны к ампициллину, цефалоспоринам, рифампицину, в меньшей степени -к левомицетину и эритромицину. Виды: S. faecalis - использует аргинин как источник энергии, сбраживает сорбит, но не сбраживает арабинозу, не нуждается в фолиевой к-те, устойчив к калия теллуриту, редуцирует ТТХ; S. faecium - не использует аргинин как источник энергии, но гидролизует его с выделением аммиака, сбраживает арабинозу и не сбраживает сорбит, для роста на простых средах нуждается в добавлении фолиевой к-ты, чувствителен к калия теллуриту, не редуцирует ТТХ. Энтерококк — важнейший представитель микрофлоры человека. Энтерококки не образуют спор и капсул. Энтерококки являются факультативными анаэробами, способными использовать энергию брожения и, поэтому, жить и при больших, и при ничтожных количествах кислорода.

20.Сульфитредуцирующие клостридии. Из всех многочисленных патогенных и сапрофитных видов рода Clostridium наиболее частым и постоянным обитателем кишечника человека и животных является C. perfringens.В отличие от других анаэробов споровые анаэробы кишечного происхождения, в том числе и C. perfringens, обладают редуцирующими свойствами при росте на железосульфитных средах, поэтому их называют сульфитредуцирующимиC. perfringens вырабатывает шесть типов токсинов: А. В, С, D, E, F.

Это грамположительная крупная неподвижная палочка, образует спору и капсулу; расположение спор центральное или субтерминальное. Микроб полиморфен; факультативный анаэроб, легко культивируется, быстро растет на питательных средах, особенно с добавлением глюкозы. Желатин разжижает медленно, молоко свертывает быстро, ферментирует глюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, галактозу и другие сахара.

Санитарно-показательное значение: C. perfringens постоянно обитает в кишечнике человека и животных.Поселяется в кишечнике новорожденных в первые дни жизни, Обнаруживается у взрослых людей в 72-98% случаев в титре до 10-3-10-10.Микроорганизм можно рассматривать, как показатель фекального загрязнения. Из кишечника людей и животных выделяется преимущественно в виде вегетативных форм.Во внешней среде сохраняется в виде спор.По соотношению обнаруженных в исследуемом объекте вегетативных форм и количества спор судят о давности фекального загрязнения.

21. Протей. В кишечнике человека и животных присутствие этих микробов менее постоянно. Протей содержится в испражнениях только у 5-10% здоровых людей. Род состоит из 4 видов: P.mirabilis, P.myofaciens, P.penneri, P.vulgaris. Чаще вызывают заболевания у человека - P.mirabilis, P.vulgaris. Род образуют прямые палочки с закругленными концами, грамотрицательные, бескапсульные,.Многие роятся, образуя ползучие колонии с отростками. Оксидазоотрицательные, каталазоположительные, реакция с метиловым красным положительная. . Внутри видов штаммы различаются по антигенным свойствам (серовары) и по отношению к фагам (фаговары), что имеет эпидемиологическое значение. Протеи выделяют бактериоцины (явление бактериоциногении). Клинические штаммы часто отличаются полирезистентностью. Протеи растут на простых питательных средах, температурный оптимум 35-37⁰С, оптимум рН 7,2-7,4. Рост бактерий сопровождается появлением гнилостного запаха. На твердых средах жгутиковые (Н-) формы характеризуются сплошным ростом. При посеве бляшкой бактерии дают феномен «роения». На среде Плоскирева формируют крупные полупразрачные изолированные колонии правильных очертаний, слегка выпуклые с желтовато-розовым оттенком (в зоне роста среда подщелачивается и желтеет). На висмут-сульфит агаре через 48 ч образуют серо-коричневые колонии (с черно-коричневой зоной под ними), на агаре Эндо формируют бесцветные колонии. Вызывают помутнение жидких питательных сред. Антигенная структура. У протеев обнаружены О-, Н-, К-, антигены. Диагностическое значение имеют: соматический О-антиген и жгутиковый Н-антиген. О-антиген расположен в бактериальной клеточной стенке и представляет собой полисахаридно-липидно-белковый комплекс. Серологическую специфичность О-антигена определяет его полисахарид. О-антиген обладает термостабильностью. Термолабильный Н-антиген является белковым соединением и содержится в жгутиках. Серовар бактерий рода Proteus устанавливается по сочетанию О- и Н-антигенов с учетом их факторного состава.