14. Методы кач и кол_ого учета микроорганизмов

Посев — один из стационарных методов культивирования микроорганизмов на питательных средах, применяемый для культуральной диагностики в медицинской микробиологии, а также для исследования биохимических и биологических свойств в различных биотехнологических целях. В зависимости от содержания исследуемых бактерий в образце, проводят посев на плотные питательные среды (для получения изолированных колоний и определения чистоты культуры). Если в исследуемом материале содержание микроорганизмов незначительное, то посев проводят на жидкие среды обогащения. Различают различные методы посева

методы посева: простые мясо-пептонный бульон (мпб) — жидкая среда

мясо-пептонный агар (мпа) — плотная среда

специальные

Специальные методы характеризуются добавлением специфического компонента или заменой основы.

• казеиново-угольный агар

• сывороточный агар

• кровяной бульон

• яичная среда Левенштейна-Йенсена

Элективные методы характеризуются получением роста только интересующего микроорганизма.

• желточно-солевой агар (ЖСА) — для стафилококка

• пептонная вода (1 %,pH=8) — для холерного вибриона

• среда Мюллера — для сальмонелл

• селенитовая среда — для сальмонелл

• среда Леффлера — эффективна для коринебактерий дифтерии

Дифференциально-диагностические

Позволяют произвести идентификацию отдельных типов, видов и групп бактерий.

среды Гисса («пёстрый ряд»)

среда Сабуро — с добавлением антибиотика

Техника посева.Для посевов применяют микробиологические петли, реже — иглы и шпатели. Чаще всего для культивирования используются пробирка и чашка Петри. Универсальным инструментом для засева культуры является бактериальная петля. Помимо неё, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлёй используются градуированная и пастеровская пипетки.Посев на плотные питательные среды (в пробирке)При посеве берут пробирку в левую руку, а правой, плотно обхватив пробку четвёртым и пятым пальцами, вынимают её. Удерживая другими пальцами той же руки петлю, ввертикальном положении её вносят в открытое пламя и прожигают до красного каления. Остывшей петлёй набирают посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой, предварительно пронося её над пламенем спиртовки. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская её до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют материал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают её пробкой. Петлю стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив рукояткой вниз. Пробирки с посевами подписывают заранее, указывая дату посева, номер исследования и название культуры.

Посев на твёрдые питательные среды (в чашке Петри)

Посевы «газоном» производят на плотную питательную среду в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлёй или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара по методу Дригальского. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий с разделением их на колонии. Идентификацию выделенных бактериальных культур проводят путём изучения морфологии бактерий, их культуральных, биохимических и других признаков, присущих каждому виду.

Колония — это видимое изолированное скопление представителей одного вида микроорганизмов, образующееся при размножении одной колониеобразующей единицы (КОЕ) на плотной питательной среде (на поверхности или в глубине её). Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по своей морфологии, цвету и другим культуральным признакам.