Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Учебно-методическое объединение по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России

ГОУ ВПО Саратовский государственный медицинский университет Росздрава

ОСНОВЫ ЦИТОГЕНЕТИКИ

Учебное пособие

Рекомендовано Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного пособия для студентов медицинских вузов

Издательство Саратовского медицинского университета

2008

УДК 57(07)

Устройство светового микроскопа и техника микроскоп и ро ван ия

Настоящее пособие предназначено для самостоятельной вне­аудиторной и аудиторной работы студентов I курса лечебного, педиатрического, медико-профилактического, стоматологического факультетов при изучении раздела «Программы по биологии» (Москва, ГОУ ВУНМЦ, 2001) «Клеточный и молекулярно-генетический уровни организации жизни».

Составители: доктор биол. наук, проф. СИ. Белянина;

доктор биол. наук, проф. И.В. Сергеева; доктор биол. наук, доц. Н.В. Полуконова; канд. биол. наук, доц. Т.А. Андронова; канд. биол. наук, доц. Л.А. Боброва; канд. биол. наук, доц. НА. Дурнова; канд. биол. наук, доц. Л.Е. Сигарева; канд. биол. наук, ст. пред. Ю.В. Белоногова;

Рецензенты: доктор мед. наук, проф. СА. Степанов;

канд. биол. наук, доц. Т.А. Алаторцева.

Рекомендовано к печати ЦКМС СГМУ.

ISBN 5-7213-0259-3 © Составители: СИ. Белянина,

И.В. Сергеева, Н.В. Полуконова, Т.А. Андронова, Л.А. Боброва, НА. Дурнова, Л.Е. Сигарева, Ю.В. Белоногова.

О Саратовский государственный медицинский университет, 2008

Цель занятия: Знать

• Строение светового микроскопа.

• Правила работы с микроскопом при малом и большом уве­личении объективов.

Уметь изготавливать временные препараты различных биологических объектов. Ознакомиться с методами изучения клеток.

Аудиторная работа

Выполнение заданий по данной и последующим темам фиксируется в тетради. Сначала необходимо написать тему занятия, затем - название задания и оформить его выполнение: или зарисовать биологический объект, обозначив изучаемые компоненты, или заполнить таблицу, или ответить письменно на вопросы задания и т.д. Выполненная в аудитории работа подписывается преподавателем.

Задание 1. Методы изучения клеток

Для исследования клеток используют, в первую очередь, микроскопическую технику в виде световой, фазовокон-трастной, люминесцентной и электронной микроскопии. Элек­тронная микроскопия применяется в сочетании с техникой ультратонких срезов. Сканирующие (растровые) электронные микроскопы позволяют получать трехмерное изображение клеток.

Клетки изучают также с помощью цитохимических, био­химических, генетических и иммунологических методов в со­четании с культивированием клеток на искусственных пита-

-з­

тельных средах. Используются: авторадиография - введение в клетки радиоактивных изотопов и обнаружение их затем на фотоэмульсиях; цитоспектрофотометрия; рентгеноструктурный анализ; хроматография; электрофорез. Клеточные компоненты выделяются посредством дифференциального центрифугирования.

Задание 2. Строение светового микроскопа

При световой микроскопии биологических объектов в ка­честве источника освещения используется искусственный или естественный свет. Световая микроскопия позволяет изучать общий план строения основных компонентов и органелл клетки. Максимальное увеличение светового микроскопа -1500 раз.

Основными системами светового микроскопа являются оптическая, осветительная и механическая (рис. 1).

К механической системе, которая служит для управления осветительной и оптической системами, относятся основание, тубус, тубусодержатель, предметный столик, револьвер с от­верстиями для объективов, макро- и микрометрический винты.

Осветительная система предназначена для направления световых лучей на рассматриваемый объект. В нее входят зер­кало, конденсор с диафрагмой и откидной линзой. Зеркало служит для концентрирования и направления светового пучка в объектив. Конденсор с диафрагмой представляет собой сис­тему линз, позволяющую добиться различной степени кон­центрации световых лучей.

Оптическая система включает окуляры и объективы, сос­тоящие из линз. Назначение оптической системы - увеличение изображения рассматриваемого объекта. На оправе окуляра и объектива имеются цифры, показывающие степень увели­чения. Для выяснения разрешающей способности (увеличения)

микроскопа перемножают цифры, стоящие на окуляре и объек­тиве. Микроскоп дает плоское, перевернутое, увеличенное изо­бражение.

Найдите на микроскопе все части механической, осве­тительной и оптической систем и запомните их назначение. Проверьте свои знания по тестам.

Задание 3. Работа со световым микроскопом при малом увеличении объектива

Изучите правила работы с микроскопом при малом увели­чении:

• Установить микроскоп в рабочее положение, для этого подвести под тубус объектив малого увеличения (х7, x8 или х10). Вращая макровинт, поставить объектив над от­верстием предметного столика на расстоянии 0,5-1,0 см. Поднять конденсор, открыть диафрагму. Смотря в оку­ляр, хорошо осветить поле зрения, перемещая зеркальце.

• Положить на предметный столик непосредственно под объективом препарат (например, кожицы лука) покров­ным стеклом вверх.

• Вращая макровинт от себя, опустить объектив на рассто­яние 0,5 см от препарата.

• За перемещением объектива наблюдать слева и сбоку.

• Смотря в окуляр левым глазом (правый глаз при этом открыт), вращением макровинта к себе медленно под­нять тубус до появления четкого изображения объекта. Чтобы убедиться в том, что микроскоп дает обратное изображение, слегка сдвиньте препарат вправо, наблю­дая за объектом в окуляр (объект при этом будет сдви­гаться влево).

• Зарисовать объект.

Задание 4. Работа со световым микроскопом при большом увеличении объектива

Изучите правила работы с микроскопом при большом увеличении:

• Найти объект при малом увеличении объектива и уста­новить в центре поля зрения.

• Поднять тубус и, вращая револьвер, заменить объектив малого увеличения на объектив большого увеличения

(х 40).

• Глядя в окуляр, вращением макровинта на себя очень медленно поднять тубус до появления изображения.

• Медленным вращением микровинта (полоборота вперед или назад) получить четкое изображение объекта, зарисовать его.

• По окончании работы поднять тубус на 0,5 см от препа­рата и вращением револьвера поменять объектив боль­шого увеличения на малый.

Задание 5. Работа с микроскопом с применением иммерсионного объектива

Положить постоянный микропрепарат на предметный сто­лик и нанести на покровное стекло каплю иммерсионного мас­ла (кедрового или касторового). Глядя сбоку, опустить иммер­сионный объектив (х90) в каплю масла и затем очень мед­ленно, вращая макровинт на себя, получить изображение объ­екта. Для получения большей четкости изображения можно использовать микровинт. Зарисовать объект.

Задание 6. Работа со стереоскопическим микроскопом

Стереоскопический микроскоп (рис. 2) позволяет выпол­нять препаровальные работы на мелких биологических объек­тах и увеличивает изображение в 3,5-87,5 раз. Этот микроскоп дает объемное, прямое, увеличенное изображение.

Рассмотрите при разных увеличениях окуляра и объектива препарат. Для этого расположите микроскоп так, чтобы его зеркало было обращено к свету. Глядя в окуляры, двумя ру­ками установите тубусы (сдвигая или раздвигая их) в такое по­ложение, при котором два изображения будут сведены в одно. Вращая винт зеркала, добейтесь равномерного освещения поля зрения. Вращением макровинта получите четкое изображение объекта. Обратите внимание на стереоскопический (объемный) характер изображения.

Задание 7. Изготовление временных препаратов биологических объектов

Временные препараты служат для кратковременного наблюдения объекта. Навыки изготовления временных препа­ратов необходимы при исследовании микроскопического стро­ения различных биологических объектов, например, мазков крови, яиц гельминтов, среза ткани и др.

Приготовьте временный препарат листа элодеи: на пред­метное стекло в каплю воды поместите кусочек листа элодеи, покройте его покровным стеклом (для этого покровное стекло ставят на ребро около капли воды, а затем осторожно опус­кают на объект).

Полученный препарат рассмотрите под малым и большим увеличениями микроскопа. Зарисуйте 2-3 клетки, обозначив оболочку, цитоплазму, ядро и хлоропласты.

Задание 8. Проверка усвоения материала

Проверьте усвоение материала по тестам из методи­ческого пособия «Основы цитологии» (с. 3 - 8).