Mikrobiologia (2)

Антигенная структура. У стафилококков лучше всего изучены антигены клеточной стенки: пептидогликан, тейхоевые кислоты и белок А. Пептидогликан — общий видовой для стафилококков антиген. Тейхоевые кислоты —видоспецифические полисахаридные антигены. S.aureus содержит рибитолтейхоевую кислоту (полисахарид A), S. epidermidis — глицеринтейхоевую кислоту, называемую полисахаридом В. Протеин А обнаружен у золоти­стого стафилококка. Это низкомолекулярный белок, имеющий свойство соединяться с Fc-фрагмснтами IgG млекопитающих. Штаммы, продуцирующие большое количество белка А, обладают более высокой резистентностью к фагоцитозу. У мукоидных штаммов золотистого стафилококка выявлен также капсульный полипептидный антиген.

Устойчивость. Стафилококки относительно резистентные мик­роорганизмы. Прямые солнечные лучи убивают их только через несколько часов. В пыли сохраняются 50—100 дней, в высушенном гное — более 200 дней, в бульонной культуре — 3—4 мес, на полужидком агаре — 6 мес. В жидкой среде при 70 °С погибают через 1 ч, при 85 °С — через 30 мин, при 100 °С — за несколько секунд. Из дезинфектантов 1 %-ный раствор формалина и 2 %-ный раствор гидроокиси натрия убивают их в течение 1 ч, 1 %-ный раствор хлорамина — через 2—5 мин. Стафилококки обладают высокой чувствительностью к бриллиантовому зеленому и пиоктанину.

Многие штаммы чувствительны к бензилпенициллину, полусин­тетическим пенициллином, стрептомицину, левомицетину, тетрациклину, фузидину и другим антибиотикам, а также нитрофурановым препаратам. Однако немало и резистентных к антибиотикам штаммов. Они, как правило, характеризуются множественной лекарственной устойчивостью, которая контролируется R-плазмидой и может распространяться путем трансдукции. Стафилококки, синтезирующие пенициллиназу (бетта-лактамазу), способны раз­рушать некоторые пенициллины. К сульфаниламидам стафилококки весьма устойчивы.

Лабораторная диагностика. Исследуют раневой экссудат, гной абсцессов, ран, молоко при маститах, выделения из половых органов при эндометрите, кровь из яремной вены при септицемии.

Из патологического материала готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. Прямая микроскопия позволяет дать только предварительный ответ. Одновременно сеют материал в чашки с кровяным, молочно-солевым и желточно-солевым агаром.

Патогенные штаммы на кровяном агаре образуют вокруг коло­ний зону гемолиза. На чашках с молочно-солевым агаром учиты­вают образование пигмента. На желточно-солевом агаре большинство патогенных стафилококков вызывает лецитовителлазную ре­акцию, проявляющуюся в образовании вокруг колонии зоны помутнения с радужным венчиком по периферии. Для получения чистой культуры и дальнейшего изучения материал из характерной колонии отсевают на МПА. Чистую культуру микроскопируют; после чего ставят реакцию плазмокоагуляции с цитратной плазмой крови кролика. При наличии фермента коагулазы плазма сверты­вается. Дополнительно определяют ДНК-азу и расщепление маннита в анаэробных условиях.

Выявляют летальные свойства культуры на кроликах и проводят дерматонекротическую пробу. С этой целью в выбритый участок кожи кролика вводят внутрикожно 0,2 мл 2-миллиардной взвеси культуры. В положительном случае в месте введения образуется инфильтрат и наступает некроз.

S. aureus в отличие от других видов ферментирует маннит в анаэробных условиях. Патогенные стафилококки кроме гемолитической и лецитиназной активности обладают способностью коагулировать плазму, вызывать некроз кожи и разрушать ДНК.

Гибель же кролика свидетельствует о наличии летального действия токсина.

При необходимости установления источника возникновение стафилококковой инфекции и путей ее распространения выделен­ные культуры подвергаются фаготипированию. Международный набор стафилококковых фагов состоит из 22 типов, разделенных на 4 группы. Энтеротоксины в пищевых продуктах и культурах определяют в РДП со стафилококковыми антисыворотками к энтеротоксинам А, В, С, D, Е, F.

В связи с широким распространением штаммов стафилококков, резистентных к лекарственным препаратам, проводят определение чувствительности выделенных культур к антибиотикам на плотной среде методом бумажных дисков или реплик. Это очень важно для выбора рациональной химиотерапии.

Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)

Выделено и описано восемь видов кампилобактеров (греч, I kampvlos — изогнутый, bakierion — палочка), но патогенными для животных и человека являются лишь только три. Кампилобактериоз — инфекционная болезнь крупного рогатого скота, овец, свиней, могут поражаться и куры. У млекопитающих отмечают аборты, временное бесплодие, задержание последа, ва­гиниты, метриты, рождение нежизнеспособного молодняка; у кур — снижение прироста массы бройлеров, яйценоскости кур-несушек и падеж цыплят. Эта болезнь регистрируется во всех странах мира. Возбудителя выделили и идентифицировали Мак-Федиен и Штокман (1913) и Смис (1918). У нас в стране кампилобактериоз (вибриоз) впервые установил В. Л. Якимов (1926), а позднее Е. В. Козловский (1938).

Кампилобактеры отнесены к семейству Spirillaceae и выделены

в род Campylobacier.

Морфология. Кампилобактеры — полиморфные, тонкие, изо­гнутые палочки в виде запятой, летящей чайки, буквы V, спирали с одним или несколькими завитками, длиной 0,5—8 и толщиной 0,2—0,8 мкм. В старых культурах бактерии сферической или кокковидной формы. Подвижны, имеют один полярный жгутик (до 15 мкм), реже — по одному на каждом из концов клетки; движение винтообразное. Капсул и спор не образуют.

Грамотрицательные, спирто-водные растворы анилиновых кра­сителей воспринимают с трудом, в связи с чем кампилобактеры окрашивают разведенным 1:5 карболовым фуксином Циля.

Куьтивирование. Хемоорганотрофы, микроаэрофилы или ана­эробы. Оптимум роста С. fetus отмечается при концентрации атмосферного кислорода 5—6 % и температуре 37,5 °С; элективное значение рН 7,0—7,2.

Для получения культур возбудителя кампилобактериоза исполь­зуют полужидкий 0,15—0,2 %-иый мясо-печеночный пептонный агар (ПЖА), 2—3 %-ный мясо-печеночный пептонный агар (МППА), приготовленные на основе экстракта мышцы сердца крупного рогатого скота, сафраннно-железоновобиоциновую среду (СЖН). Культуры также получают на агаре Мартена и среде Китта — Тароцци без масла.

На ПЖА через 2—7 сут появляется рост в пробирке около самой поверхности среды в виде серовато-голубоватого диска толщиной от 1 до 4 мм; на плотной среде кампилобактеры образуют нежный мелкоросинчатый налет или отдельные голубоватые мель­чайшие колонии; на СЖН при росте чистой культуры розовый цвет среды не изменяется, при смешанном росте или размножении только других видов микробов среда становится ярко-желтой.

Лабораторная диагностика. В лабораторию направляют абортированный плод с оболочками или голову, желудок, печень; легкие плода, часть плаценты; от коров — слизь из шейки матки или цервикально-вагинальной области; от быков — препуциальную слизь, сперму, секрет придаточных половых желез; от убитых с диагностической целью животных — матку, яичники, влагалище, лимфоузлы тазовой полости.

Лабораторные методы диагностики кампилобактериоза включают микроскопию, получение культур, идентификацию выделенных сероваров и серологические исследования.

Микроскопия. Мазки окрашивают разведенным 1:5 фуксином Циля 1—2 мин. При положительном результате в препаратах обнару­живают типичные по морфологии кампилобактеры.

Выделение культур. Исследуемый материал высевают в 5 пробирок с ПЖА и СЖН (лучше сеять одновременно на две среды). Посевы помещают в микроанаэростат с 10—15 % углекислого газа, инкубируют при температуре 37 С до 10 дней, просматривая каждые 3 дня. Первичные культуры часто бывают загрязнены посторонней микрофлорой. Поэтому с целью их очистки применяют: рассев загрязненной культуры на чашки Петри с плотной средой (МППА) с после­дующим отсевом отдельных колоний на ПЖА; посев культур на ПЖА или СЖН с «подсосом» и другие методы.

Дифференциацию сероваров С. fetus к С. sputorum, выделенных от животных, проводят по культуральным, биохимическим и серологическим свойствам возбудителя.

Серологическая идентификация культур выполняется со стан­дартными моноспецифическими сыворотками ориентировочно по капельной РА и окончательно по пробирочной РА.

Для обнаружения и идентификации возбудителей кампилобактериоза в культурах и патологическом материале применяется также прямой метод реакции иммунофлюоресценции с бивалентной (к сероварам венерсалис и фетус) и моновалентной (к серовару бубулюс) люминесцирующими сыворотками.

Серологическое исследование. Серологическая диагностика кампилобактериоза у коров проводится при помощи реакции агглютинации с вагинальной слизью (РАВС), а у овец — РА с сывороткой крови.

Вагинальную слизь берут марлевым тампоном, который поме­щают в пробирку с формалинизированным 3 %-ным раствором хлористого натрия. Тампон отжимают пинцетом, и жидкость центрифугируют. Супернатант разводят 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400. Реакцию ставят с кампилобактериозным антигеном. Оценку ведут по 4-бальной системе: положительная – хорошо выраженная агглютинация (4 или 3 плюча) во всех четырех пробирках или только в первой и второй; сомнительная — агглютинация (2 или один плюс) в первой и во второй пробирках; отрицательная — отсутствие агглютинации всех пробирках минус)

РА с сывороткой крови ставят в разведениях 1:100, 1:200

и 1:400. Результат считают положительным, если испытуемые сыворотки в разведении 1:200 и выше дают агглютинацию в 4 или 3 плюса, сомнительными – 4 или 3 плюса в разведении 1:100 или 2 или один плюс в разведении 1:200, отрицательным — агглюти­нация отсутствует или не выше 2 и одного плюса в разведении 1:100.

Овец, привитых вакциной против кампилобактериоза, сероло­гически не исследуют.

Возбудитель клавицептоксикоза

Клавицептоксикоз (Clavicepstoxicosis) – элементарный токсикоз сельскохозяйственных животных, возникающий при поедании кормов растительного происхождения (трава, мука, мякина, сено, зерно и др.), пораженных спорыньевыми грибами Claviceps paspali, которые паразитируют на диких злаках рода Paspalum. Болезнь характеризуется расстройством деятельности ЦНС (тремор, повышенная возбудимость, атаксия и клиникотонические судороги). В зарубежной литературе клавицептоксикоз называют: бандобола (шаткая походка), титремия (дрожание).

Морфология. Склероциальная стадия гриба C.paspali имеет шаровидную, полушаровидную и овальную формы. Цвет желто-бурый. Диаметр склероций1,4-3,2 мкм. Проросшие склероции образуют по несколько стром, покоящихся на цилиндрических желтоватых ножках длиной от 5 до 15 мм. Головки шаровидные, 1-2 мм в диаметре, желтоватые. Перитеции овальные или цилиндрические, напоминающие сумки, в которых развиваются аскоспоры, по 7 в каждой сумке. Размеры их зависят от условий развития гриба. Конидии бесцветные, овальные, эллипсовидные (8,5-11,65*4-4,5 мкм). Склероции прорастают при температуре 10-25 С. Образование и прорастание стром происходит в течение 18-20 дней.

Культивирование. Гриб растет на отваре из семян растений рода paspalum (просовые), тимофеевки, гречихи, пырея, овсяницы, костра, моркови, хлебных злаков, на средах Caбурo, Чапека и др. при температуре 23—25 °С; рН 6,4—7.

Устойчивость. Склероции, являющиеся токсичным началом гриба С. paspali, остаются жизнеспособными после зимовки и весной вновь прорастают при температуре 10—27 °С и относительной влажности 75 % и выше. Высокая температура воздуха и небольшое количество осадков тормозят нормальное развитие спорыньи.

Конидии гриба в колосках растений при температуре 7—8 С, при нормальной влажности воздуха переживают до 235 дней, а при температуре 22—23 °С — до 165 дней. В старых культурах конидии сохраняют свою жизнеспособность до 11 мес.

Токсинообразование. Токсические вещества содержатся только в склероциях гриба, из которых выделены алкалоиды: лизергиновая кислота, альфа-гидроксилэтиламид. Определенную этиологическую роль играют терморгеновые микотоксины, находящиеся наряду с алкалоидами в склероциях — паспалинин и его производные. В склероциях содержится I % паспалинина.

Химический состав микотоксинов, образуемых С. paspali, до конца не изучен.

Патогенность. Болезнь известна с 1909 г. Описана у овец, ослов, лошадей, крупного рогатого скота, свиней, гусей. Регистрируется со второй половины июля по август, в период образования на растениях склероциев. Возникает внезапно у большого количества животных.

Клавицепстоксикоз поражает животных всех возрастов, но более чувствительны старые и молодые. Молодняк, находящийся на подсосе, не болеет.

Из лабораторных животных восприимчивы кролики, морские свинки, мыши, а также кошки и собаки.

При скармливании зараженного корма у кроликов уже через сутки выявляют мышечную дрожь, атаксию, покачивание головой, судороги, параличи, повышенную температуру, гиперемию слизи­стых оболочек и конъюнктивы. У мышей смерть наступает через 18—24 ч при тех же признаках, что и у кроликов. У морских свинок экспериментальный микотоксикоз воспроизводят при введе­нии склероциев или экстрактов из них.

Диагностика. Осуществляется на основании клинических при­знаков, результатов обследования пастбищ, анализа кормов с целью выявления склероциев и микотоксинов. В необходимых случаях заражают лабораторных животных.

Возбудитель эрготизма

Эрготизм (Ergotismus) — элементарный микотоксикоз, возни­кающий при поедании хлебных или дикорастущих злаков, продук­тов их переработки с примесью рожков (склероциев) спорыньи. Возбудителями чаще всего являются грибы Claviceps purpurea и Claviceps raicrocephala, поражающие рожь, ячмень, овес, пшеницу во время их вегетации.

Эрготизм (от франц. ergot — рожки) чаще возникает на пастбище при поедании животными растений, пораженных спо­рыньей, или при стойловом содержании в случае скармливания муки, отрубей, зерновых отходов с примесью склероциев (рожков) спорыньи.

При развитии гриб проходит три стадии: сумчатую — стадия плодоношения (половое размножение), конидиальную — стадия спороношения (бесполое размножение) и покоящуюся (зимую­щую) — склероциальную стадию. Эти грибы относятся к семейству Clavicepitatae, род Claviceps.

Морфлогия. Склероции грибов — рожки, по форме напоминают семена хлебных и дикорастущих злаков, но они всегда крупнее и темнее зрелых зерен растений и легко отличаются от них. Склероции бывают удлиненными, искривленными в виде рожка, прямыми, закругленными, трехгранными, величиной от нескольких миллиметров до 5—7 см. При прорастании склероции дают головчатые стромы на ножке длиной от 1 до 5 см. Головки шаровидные, 1,5—2 мм в диаметре. Сумки цилиндрические. Аскоспоры нитевидные, от 50 до 80 мкм длиной и до 1 мкм шириной. Конидии бесцветные, эллипсовидные, овальные, размеры 8 * 15 мкм.

Токсинообразование. Токсичность грибов, вызывающих эрго­тизм, обусловлена содержанием в их склероциях алкалоидов, обладающих высокой степенью биологической активности. Алкало­иды спорыньи разделены на две основные группы — все произ­водные лизергиновой кислоты и клавиновые алкалоиды, в которых карбоксильная группа лизергиновой кислоты сведена к гидрокси- метиловой или метиловой группе. Склероции содержат эргоновии, эрготамин, эргозин, эргокристин, эргокриптин, эргокорнин и эр- гоклавин.

Из склероциев С. purpurea кроме эрготамина выделено два амина — гистамин и тирозин, которые в определенных дозах нашли применение в гинекологической практике как стимуляторы сокра­щения гладких мышц матки и тонких кишок. В общей сложности из склероциев спорыньи выделено более 40 алкалоидов. Различные образцы спорыньи содержат от 0 до 0,857 % алкалоидов (Н. А. Спесивцева, 1964; A. S. Skarland, 1972).

Патогенность. Эрготизм в естественных условиях зарегистриро­ван у животных разных видов, но чаще поражаются крупный рогатый скот, овцы, свиньи, лошади, куры гуси, утки, собаки, кошки. Из лабораторных животных поражаются кролики, морские свинки, белые мыши, крысы. Токсины спорыньи переходят в молоко животных. Действие их зависит: 1) от степени зрелости спорыньи (наиболее токсичны склероции спорыньи ранней уборки); 2) от условий и продолжительности ее хранения (через 5—6 мес ток­сичность склероциев снижается, а через 1—2 года полностью утрачивается); 3) от набора алкалоидов, состав которых зависит от вида растения-хозяина и почвенно-климатических условий в период его вегетации.

Токсины спорыньи вызывают у животных нервные симптомы, гангрену, диарею, хромоту, тремор, конвульсии и слепоту. Нару­шается мышечная координация, суживаются кровеносные сосуды, что приводит к параличу и гибели.

Диагностика. Диагноз основывается на клинической картине, результатах обследования пастбищ, данных токсико-микологического анализа кормов. Спорынью легко распознают в образцах зерна. Она имеет вид черного или с пурпурным оттенком тела, часто напоминающего ядро зерна. Труднее или невозможно визуально выявить склероции в приготовленных кормах. В этих случаях зараженность кормов определяют люминесцентным и химическим методами.

Эрготизм следует отличать от отравления ядовитыми растениями и пестицидами. Дифференцируют аборты сальмонеллезного и бру­целлезного происхождения. Следует иметь в виду и микотоксикозы терморгенной этиологии.

Биопрепараты. Специфических противоядий нет. Лечение симптоматическое. Для удаления яда из желудка и кишечника назначают солевые слабительные, делают промывания желудка, ставят клизмы. Для расслабления мышц подкожно вводят 30—50 мл 25—30 %-ного раствора сернокислой магнезии 2—3 раза. Для связывания яда в кишечнике дают 0,2 %-ные растворы танина.

ВОЗБУДИТЕЛЬ СТАХИБОТРИОТОКСИКОЗА

Стахиботриотоксикоз (Stachybotryotoxiecosis) — остро- или подостропротекающий микотоксикоз сельскохозяйственных животных, возникающий при поедании кормов, пораженных токсическим грибом Stachybotrys alternans, растущим главным образом на сене и соломе.

Гриб относится к несовершенным грибам Fungi imperfecti, к роду Stachybotrys; существуют токсические и нетоксические вари­анты гриба.

Морфлогия. Мицелий септирован (наличие поперечных перего­родок), многоклеточный. От мицелия вверх поднимаются споро­носные гифы, конидиеносцы со стеригмами и сидящими на них конидиями. Толщина гиф зависит от возраста и достигает 2—3мкм, Конидиеносцы бесцветные, гладкие, в верх­ней части бородавчатые, оливко-бурого цвета. Раз­меры: 45 х 52 мкм дли­ной, 3—4 мкм в диаметре. Стеригмы розеткообразные, по 6—8 лепестков. Конидии легко опадаю­щие, одноклеточные, яйцевидные, темно-корич­невого или черного цвета. Длина конидий 8—12, ши­рина 6—8 мкм.

Культивирование. В естественных условиях гриб растет на влажных растительных кормах, бо­гатых целлюлозой (соло­ма, сено, зерно, силос), и в почве. На естественных субстратах гриб образует черный, сажистый, легко снимающийся налет.

В качестве искусствен­ных используют жидкие и

плотные питательные среды (агаровую среду Чапека, Сабуро, сусло-агар и среду Ван-Итерсона). На жидких средах гриб даст поверхностный рост, вначале в виде пристеночного кольца, а с 5—6-го дня в виде пленки. Среда остается прозрачной.

На плотных средах (среда Сабуро, агар Чапека) вырастают двухзонные колонии, в центре складчатые, черного цвета; на периферии колонии образуется белая прозрачная каемка. Колонии непросвечивающиеся, овальной формы. Сама среда постепенно окрашивается в черно-коричневый цвет. На фильтровальной бумаге (со средой Ван-Итерсона) на 7—12-е сут образуется черный, иногда с зеленоватым оттенком, сажистый налет. Оптимальная температура для роста и развития гриба 20—27 °С, влажность 45—50 С. Органы плодоношения развиваются через 5—7 сут.

Биохимические свойства. Возбудитель стахиботриотоксикоза является типичным разрушителем целлюлозы.

Токсинообразование. Образование и накопление токсина пораженных грибом субстратах, а также на питательных средах идет параллельно процессу накопления биомассы и пигмента и заканчивается одновременно с окончанием роста гриба. Из культуры гриба S. alternant выделен стахиботриотоксин, содержащий макроциклический эфир 12—13-эпокситрихотецена, повреждающий кожу, токсин В-3, блокирующий сердечную мышцу, родинин Е и верукарин 1. Токсин стабилен при хранении, устойчив к нагрева­нию, высушиванию, рентгеновских и ультрафиолетовых лучей.

Двухчасовая обработка пораженного корма в автоклаве при температуре 112 °С ведет к полному разрушению токсических веществ. Нейтрализация их достигается 0,5 %-ным раствором NaOH. I %-ным раствором аммиака и 5 %-ной суспензией извести. Дрожжевание и молочнокислое брожение не детоксифицируют пораженный корм.

Устойчивость. Споры S. alternans до 6 мес сохраняют жизне­способность в почве, скирдах соломы и стеблях растении, а при достаточной влажности и плюсовой температуре прорастают. При температуре минус 35 °С гриб сохраняет жизнеспособность. Прямые солнечные лучи, воздействующие в течение 10—15 мин, замедляют прорастание конидий гриба; рассеянный свет, рентгеновские и ультрафиолетовые лучи почти не оказывают на них влияния.

При воздействии текучим паром гриб на влажной соломе гибнет в течение 2—3 мин. Сухой жар (120 С) убивает конидии в течение 1 ч, горячая вода (88 °С) — за 30 мин.

Отмечено фунгицидное действие на гриб и его споры 2 %-ного раствора NaOH на протяжении 1 ч; 2 %-ного раствора карболовой кислоты — за 30 мин; 1 %-ного — за 1сут: 0,5 %-ного за 2 сут; 5 %-ного раствора аммиака — за 30 мин.

Патогенность. К стахиботриотоксикозу восприимчивы лошади, свиньи и жвачные. Вспышка стахиботриотоксикоза отмечена у буйволов после скармливания вместе с силосом соломы, пораженной грибом. Описаны случаи стахиботриотоксикоза у лосей, бизонов и других диких животных.

Отмечено, что молодняк молочного периода не болеет. В основе патогенеза лежит действие токсинов, которые из пищева­рительного тракта поступают в кровеносную и лимфатическую систе­мы и разносятся по всему организму. Через несколько часов токсин поражает центральную нервную систему, вызывает глубокие измене­ния в кроветворных органах и сосудистой системе. В кровеносных со­судах возникают воспалительные и некробиотические процессы — стенки сосудов становятся дряблыми и порозными.

Изменения физико-химических свойств крови приводят к нару­шению кровообращения, возникают гиперемия, геморрагический диатез, отек легких, уменьшается количество тромбоцитов. Патологические изменения развиваются в костном мозге, селезенке, лимфатических узлах, печени.

Лабораторная диагностика. Диагноз на стахиботриотоксикоз ставят на основании учета эпизоотологических данных (поражение корма, массовое появление болезни, сезонность, отсутствие забо­леваний у молодняка, высокая летальность и др.), результатов клинического и гематологического исследований, патологоанатомического вскрытия у микологического исследования кормов.

В лабораторию посылают пробы соломы, сена и зернофуража,

покрытых черным сажистым налетом, в количестве 20—30 г каждая. Кроме того, на исследование отправляют кал лошадей, пораженные участки кишечника, преджелудков, костный мозг, печень, кровь. Исследование ведут в трех направлениях: микроскопия, выделение гриба S. alternans из кормов и определение токсичности.

Для микроскопии темный налет соскабливают и помещают на предметное стекло в каплю 5 %-ного водного раствора глицерина, накрывают покровным стеклом и микроскопируют при малом увеличении. В поле зрения видны темноокрашенные конидиеносцы стеригмы и конидии. Вместо глицерина можно использовать дис­тиллированную воду.

Для получения чистой культуры отбирают соломинки с черным налетом и нарезают на кусочки длиной 1,5—2 см. Эти соломинки или пораженные зерна помещают в стерильные бактериологические чашки с фильтровальной бумагой, увлаженной жидкой средой Чапека, и инкубируют при температуре 24—26 °С. К 3—4-му дню в положительном случае появляются морфологические элементы, характерные для гриба S. alternans, к 7—!2-му дню появляется интенсивный темнопорсшистый сажистый налет, который пересевают петлей на агар Чапека. На 5—7-е сут выросшую культуру исследуют под микроскопом и на токсичность.

Токсичность определяют методом кожной пробы на кролике Для этого 50 г пораженной грибом измельченной соломы помешают в бумажные патроны из фильтровальной бумаги и экстрагируют в аппарате Сокслета серным эфиром в течение 6 ч. Эфир отгоняют, полученный экстракт переносят в сосуд и конденсируют при комнатной температуре до испарения эфира, Вместо эфира можно использовать ацетон, хлороформ или другие органические растворители. Полученный экстракт двукратно на­носят на выбритую поверхность кожи кролика размером 3*3 см. Если исследуемая солома содержит токсин, то на месте нанесения экстракта через 3—4 сут появляется воспалительная реакция в виде гиперемии, отечности тканей с последующим развитием некроза. На контрольном участке кожи с другой стороны того же кролика, при втирании экстракта из непора­женной соломы видимых изменений не устанавливают. Чтобы кролик не слизывал нанесенный на кожу экстракт, ему надевают специальный воротник.

Биопрепараты. Специфические средства терапии и профилак­тики отсутствуют. В случаях необходимости используют симпто­матическую лекарственную терапию (дезинфицирующие и вяжущие средства).

Возбудитель дендродохиотоксикоза

Asp. flavus — возбудитель аспергиллофлавитокснкоза — проду­цирует особоопасные токсины — афлатоксины. Это группа ядов, обладающих гепатотропным и канцерогенным действиями. По химической природе афлатоксины — производные кумарина. В их состав входят по десяти токсических компонентов: A, B1, В2, M1. М2, Р и др. ЛД50 токсинов для утят и кроликов составляет: В1 — 0,4. мг/кг; В2—— 1,7 мг/кг. Афлатоксин В: признан наиболее

Морфология. Мицелий бесцветный или белого цвета, септированный, 1—4 мкм шириной. Гифы септированные, от 0,8 до 4,2 мкм шириной. Конидиненосцы плотным слоем располагаются на сплете­ниях гиф мицелия, часто древовидно-разветвленные, шириной 2.4—3,2 мкм. На концах они с мутовчатыми ответвлениями, длиной 10,5—30—40 и шириной 1,5—1.8 мкм. Конидии яйцевидные, продолговато-эллиптические, к обоим концам заостренные, длиной 6.4—9,3 и шириной 2,5—3,4 мкм.

При температуре 25 °С и влажности 50 % гриб образует на соломе и других грубых кормах обильные спородохии. При более низкой температуре и пониженной влажности они развиваются внутри соломинок в виде стерильного мицелия, поэтому поражен­ный микромицетом корм часто имеет вид доброкачественного (С. Н. Харченко. 1982).

Культивирование. Гриб нетребователен к питательным средам, может расти на агаре Сабуро, сусле-агаре Чапека, среде Роллена и др. На агаре Чапека при комнатной температуре образует воздушный белого цвета мицелий, спородохии развиваются мед­ленно. Иногда наблюдают круглые колонии. На растительных, синтетических и полусинтетических средах мицелий септирован, бесцветный. Колонии яйцевидные. На агаре Сабуро формируются шаровидные или грушевидные хламидоспоры.