Mikrobiologia (2)

Бактериоскопия. Мазки фиксируют на пламени, окра­шивают по Граму и Козловскому. При микроскопии учитывают, что бруцеллы — мелкие, грамотрицательные бактерии, окрашива­ющиеся по Козловскому в красный цвет.

Бактериологическое исследование. Посевы из патологического материала производят на ПГГБ, ПГГА, МППБ, МППГГА, картофельный агар. С целью подавления посторонней микрофлоры в среды можно добавлять генцианвиолет (1:200000) или кристаллвиолет (1:100000). При исследовании материала от крупного рогатого скота одну часть посевов инкубируют в атмосфере с содержанием 10—15 % СО2. Выделение культур В. ovis проводят на плотных или полужидких печеночно-сывороточном или печеночно-аминопептидном агарах в атмосфере с 10—15 % СО2. Посевы помещают при температуре 37—38 °С и инкубируют 30 дней.

Культуры бактерий, обладающие типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами, дающие положительную РА с позитивной сывороткой, относят к бруцеллам.

Виды бруцелл дифференцируют по способности роста в отсут­ствие повышенной концентрации СО2, выделению H2S, чувстви­тельности к фагу Тб, бактериостатическому действию анилиновых красителей и агглютинации моноспецифическими сыворотками.

Биопроба. Проводят ее на морских свинках (не менее двух), сыворотка которых в разведении 1:5 отрицательно реагирует в РА с бруцеллезным антигеном. На 15, 25 и 40-й день после заражения берут кровь и сыворотку, исследуют в пробирочной РА в титрах от 1:10 до 1:80. Результат на бруцеллез считается положительным, если сыворотка реагирует в титре 1:10 и выше.

Для выделения культуры свинок убивают и делают посевы из лимфоузлов, селезенки, печени и костного мозга.

Серологические методы. Для диагностики 6руцеллеза животных применяют реакцию агглютинации в пробир­ках (РА), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию длительного связывания комплемента (РДСКК пластинчатую реакцию агглютинации с роз бснгал антигеном (роз бенгал проба, РБП) и кольцевую реакцию с молоком (КР).

РА ставят в объеме 1 мл с единым бруцеллезным антигеном для РА, РСК и РДСК. Сыворотки крови овец, коз, буйволов, оленей и собак исследуют в разведениях 1:25, 1:50, 1:100, 1:200; крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов - 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400. РА считают положительной при наличии агглютинация с сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов, начиная с разведения 1:100 (100 ME); овец, коз, буйволов, оленей и собак — с 1:50 (50 ME) с оценкой не менее чем на 2 плюса. Сомнительной — при наличии агглютинации только в разведении 1:50 (50 ME) с сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов и 1:25 (25 ME) — с сыворотками овец, коз, буйволов, оленей и собак с оценкой не менее чем на 2 плюса.

РСК — специфический и высокочувствительный метод диагно­стики бруцеллеза животных. Ее показания более постоянны и длительней сохраняются: комплементсвязываюшие антитела появ­ляются позже, чем агглютинины. Эта реакция позволяет выявить большее количество больных в стадах с давней инфекцией. РСК применяют при диагностике бруцеллеза у вышеперечисленных животных, а также свиней.

РДСК более чувствительный тест, чем РСК. При инфекционном эпидидимите баранов используют только РДСК с овисным антиге­ном. РСК и РДСК считают положительными при задержке гемолиза на 2—4 плюса в одном или двух разведениях (1:5 или 1:10) и полном гемолизе эритроцитов в контрольной пробирке (без анти­гена). Сомнительной — при задержке гемолиза с оценкой в один плюс.

РБП используют для исследования сывороток крови крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей, свиней, буйволов, верблюдов и оленей. Реакцию ставят при температуре 18—30 °С с бруцел­лезным антигеном, окрашенным бенгальским розовым, на пластин­ках с лунками. При положительной реакции в течение 4 мин появляются мелкие или крупные хлопья агглютината розового цвета.

КР ставят с цельным свежим или консервированным формали­ном молоком коров и антигеном — взвесью убитых бруцелл, окрашенных в синий идет гематоксилином. При наличии в молоке специфических антител происходит агрегация антигена, образовав­шийся комплекс адсорбируется сливками молока и поднимается с ними вверх, образуя четкое, окрашенное кольцо. Проводится реакция в уленгутовских пробирках, в которые вносят по 0,05 мл антигена, добавляют 1 мл молока и содержимое тщательно сме­шивают. Реакция проходит при температуре 37 — 38 °С в течение 1 ч. Результаты учитывают визуально и оценивают а плюсах: «+++» — четко выраженное синее кольцо в верхней части молока, остальная часть молока белая, «++»-достаточно выраженное синее кольцо, столбик молока синеватого цвета. Пробы, давшие реакцию с оценкой 3 и 2 плюса, считают положительными. Эту реакцию рекомендуют для проверки благополучия стад (ферм) по бруцеллезу крупного рогатого скота и молока на рынках.

Для выявления бруцелл непосредственно в патологическом материале, а также в объектах внешней среды предложен прямой метод иммунофлюоресценции (РИФ), непрямой же метод позволяет обнаружить антитела в сыворотке крови больных, переболевших или привитых животных.

Аллергический метод. Для аллергической диагностики бруцеллеза овец, коз и свиней используют бруцеллин ВИЭВ, изготовляемый из неагглютиногенного и авирулентного штамма. B.abortus В-1. у овец и коз применяют пальцебральную пробу, свиньям препарат вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины. У животных, больных бруцеллезом, на месте введения бруцеллина развивается воспалительная реакция.

Возбудитель туберкулеза

Род Mycobacterium включает в себя много видов (49), как патогенных, так и непатогенных. К патогенным относятся микробактерии, вызывающие туберкулез у людей (Myc.tuberculosis), животных (Myc.bovis), птиц, мышей и микробактерии туберкулеза холоднокровных-рыб, змей, лягушек, черепах. Сюда же относятся возбудители проказы и паратуберкулеза крупного рогатого скота.

Наряду с истинными возбудителями от животных, человека, с объектов внешней среды изолируют так называемые атипичные, неклассифицированные, анонимные микробактерии, отличающиеся по своим свойствам от туберкулезных и друг от друга.

Морфология. Микробактерии туберкулеза – кислото-, спирто- и щелочеустойчивые микроорганизмы, неподвижны, спор и капсул не образуют, жгутиков не имеют. Их типичная форма-стройные или слегка изогнутые палочки с закругленными краями. В электронном микроскопе микобактерии всех видов имеют вид палочки с закругленными краями. Однако встречаются нередко изогнутые и овальные формы. Размеры клеток одной и той же культуры могут значительно варьировать – длина от 1,5 до 4, ширина от 0.2 до 0.5 мкм. Особенно это заметно в культурах розных возрастов Установлена филогенетическая близость туберкулезных микобактерий с лучистыми грибами-актиномицетами. Это сходство проявляется в медленном развитии микобактерий на элективных питательных средах, а также в способе размножения, полиморфности и способности при определенных условиях иногда образовывать нитевидные ветвистые формы с колбовидными вздутиями на концах, что напоминает актиномицесты. Это и явилось причиной замены названия бациллы Коха микобактсрий туберкулеза.

Микобактерии характеризуются высоким содержанием липидов (от 30,6 до 38,9 %), вследствие этого медленно воспринимают анилиновые красители. Окрашивание их достигается с применением карболовой кислоты при подогревании. При таком способе окраски микобактерии туберкулеза хорошо удерживают ее при воздействии разведенных кислот, щелочей и спирта, чем и отличаются от других микробов. На этом основан метод окраски микобактерии по Цилю — Нильсену.

Микобактерии с трудом окрашиваются по Граму и приобретают темно-фиолетовый цвет.

В настоящее время для быстрого обнаружения их в различных объектах используют люминесцентный метод, в основе которого лежит способность микобактерий окрашиваться люминесцентными красителями и давать золотисто-желтый цвет под воздействием ультрафиолетового облучения. Метод обладает высокой чувствительностью, дает цветное изображение объекта исследование ведется при средних увеличениях, что дает возмож­ность просмотреть большее поле, чем при обычной микроскопии, требующей иммерсии.

При исследовании в электронном микроскопе у микобактерии выявлены клеточная стенка, микрокапсула, цитоплазматическая мембрана. В состав цитоплазматической мембраны входят липопротеидные комплексы, различные ферментные системы, в частности ответственные за окислительно-восстановительные процессы.

Цитоплазма микобактерий представлена гранулами, вакуолями и полостями, число которых может возрастать в клетках, подвергнутых воздействию химических агентов.

В микрокультурах, развивающихся на жидких питательных средах, микобактерии человеческого и бычьего видов образуют косы, жгуты, завитки, скопления, имеющие, как правило, ориентированный рост. Это явление названо корд-фактором и связано с целостностью липидных структур, расположенных на поверхности клетки, и присуще только вирулентным микобактериям.

Микобактерии птичьего вида и атипичные, за исключением М.kansassii, M.chelonei, не склонны образовывать строго ориентированные колонии. Микрокультуры легко обнаруживаются при обычной микроскопии мазков, окрашенных методом Циля-Нильсена. В препаратах, приготовленных из первичных посевов, при исследовании под фазовым контрастом обычно обнаруживаются гомогенные зернистые элементы, среди которых встречаются сферические светопреломляющие структуры.

В культурах, выделенных от крупного рогатого скота, чаще находят шаровидные образования правильной формы, одинаковых размеров, а также отдельно лежащие нитевидные структуры.

Культивирование. Микобактерии туберкулеза способны размно­жаться в строго аэробных условиях на соответствующих элективных питательных средах, содержащих в определенных соединениях углерод, азот, водород и кислород. Из минеральных веществ жизненно необходимыми оказались магний, калий, сера и фосфор. Стимулирующее влияние на рост туберкулезных микобактерий оказывают соли железа и некоторые другие элементы. Для осуще­ствления биохимических процессов у микобактерий необходимым условием является оптимальная температура: 37—38 °С для чело­веческого, 38—39 СС для бычьего и 39—41 С для птичьего вида. Следует отметить, что микобактериям туберкулеза присущ мед­ленный обмен веществ, а следовательно, они характеризуются замедленным ростом культур на средах. Рост их проявляется через 7—30 дней и более, В начале роста образуются почти незаметные микроколонии, из которых затем формируются визуально наблю­даемые макроколонии. В 1887 г. Нокар и Ру впервые обнаружили у микобактерий туберкулеза глицеринофильность. Глицерин ока­зался лучшим источником углерода. Прибавляя его к мясному бульону и агару, они» получали обильный рост культур.

При выборе среды следует учитывать се назначение: для пересева и сохранения субкультур лучше пользоваться простыми глицеринсодержащими средами (МПГБ, глицериновый картофель). Для первичного выделения культур оправдали себя только плотные яичные среды (Петраньяни, Гельберга и др.). Для работы по изучению биохимии микобактерий и других целей целесообразно пользоваться безбелковыми синтетическими средами (Сотона, Мо­дели).

Возбудители туберкулеза, особенно птичьего вида, ряд атипич­ных и сапрофитных микобактерий при росте на жидких питатель­ных средах имеют как поверхностный, так и донный рост и характеризуются наличием пленки, рыхлой, матовой, крошкоподобной или сплошной, морщинистой, блестящей и соответствующего цвета.

На плотных средах микобактерии растут в виде колоний, которые могут быть гладкими (S-форма) или шероховатыми

(R-форма), крошкоподобными мелкими либо крупными, блестящими или матовыми, в виде единичных обособленных или сплошными скоплениями, в виде морщинистого налета белого или белого с желтоватым оттенком, или же другого цвета.

Существуют методы ускоренного выращивания (микрокультивирование) микобактерий, предложенных рядом исследователей (Прайс, 1941; Е. А. Школьникова, 1948; Н. М. Колычев, 197 и др.).

Метод Прайса. Готовят мазок на стекле, высушивают, затем выдерживают 5 мин в 5 %-ном стерильном водном растворе серной кислоты. Кислоты нейтрализуют стерильной дистиллированной водой, а мазок помещают в жидкую питательную среду. Такая среда обеспечивает появление роста микобактерий на стеклах через 2—6 дней в виде микрокультур, которые обнаруживаются при микроскопии мазков, окрашенных по Цилю-Нильсену.

Биохимические свойства. Микобактерии туберкулеза содержат различные ферменты. Ферменты эстеразы и липазы расщепляют жиры, что дает возможность микобактериям использовать их в качестве питательного материала. Дегидразы расщепляют органические кислоты, в том числе аминокислоты. Уреазы расщепляют мочевину, перигалоза — углеводы, каталаза — перекись водорода.

Протеолитические ферменты (протеазы) расщепляют белок. Микобактерии ферментируют алкоголь, глицерин и многочисленные углеводы, лецитин, фосфатиды. У молодых микобактерий туберкулеза сильно выражены редуцирующие свойства, что, в частности, проявляется в их способности восстанавливать теллурит.

Токсинообразование. Микобактерии туберкулеза содержат эндотоксины - туберкулины (Р. Кох, 1890), которые проявлют токсическое действие только в больном организме. Жирные кислоты (масляная, пальмитиновая, туберкулостеариновая, олеиновая) способствуют распаду клеточных элементов, творожистому перерождению тканей, блокируют липазу и протеазы, вырабатываемые микобактериями. Вирулентные микобактерии содержат полисахаридные компоненты, корд-фактор, обусловливающий вирулентность, склеивание микобактерий и рост их в виде жгутов и кос. Корд-фактор разрушает митохондрии клеток заражением макроорганизма, нарушает функцию дыхания и фосфорилирование.

Устойчивость. Микобактерии туберкулеза обладают значительной устойчивостью к химическим и физическим воздействиям, особенно к высушиванию. В высушенной мокроте, кусочках пора­женной ткани, пыли микобактерии жизнестойки от 2 до 7 мес и более. В воде микроб выживает 5 мес, в почве — 7 мес, при гниении материала — 76—167 дней и дольше. Холод не влияет на жизнеспособность микобактерий.

Микобактерии весьма чувствительны к воздействию прямых солнечных лучей, в жаркие дни в мокроте они погибают через 1,5—2 ч. Особенно губительны для микобактерий ультрафиоле­товые лучи. Важное значение в санитарно-профилактическом отношении имеет высокая чувствительность микобактерий к нагреванию. Во влажной среде микобактерии гибнут при 60 °С в течение 1 ч, при 65 °С — ^ерез 15 мин, при 70—80 °С — через 5—10 мин. В свежем молоке возбудитель туберкулеза сохраняется 9—10 дней, в скисшем молоке гибнет под воздей­ствием молочной кислоты, В масле микобактерии сохраняются Йеделями, а в некоторых сырах — даже месяцами. Микобактерии туберкулеза по сравнению с другими неспорообразующими бак­териями значительно более устойчивы к химическим дезинфи­цирующим веществам, 5 %-ный раствор фенола и 10 %-ный раствор лизола разрушают возбудителя по истечении 24 ч, 4%-ный формалин — после 12 ч.

Из дезинфицирующих растворов при туберкулезе рекомендуют: 15 %-ный раствор смеси, приготовленный из равных частей сер- но-карболовой кислоты и 16 %-ного раствора гидроокиси натрия, воздействие до 4 ч; 3 %-ный щелочной раствор формальдегида при 3-кратном нанесении на объект и 3-часовой экспозиции; хлорную известь в виде порошка, растворов и взвесей, содержащих не менее

% активного хлора при экспозиции не менее 3 ч; 3—5 %-ный раствор хлорамина Б, гипохлор, 1 %-ный раствор глутарового альдегида, 5 %-ный фенолят натрия, 8 %-ную эмульсию феносмо- лина из расчета 1 л/м и экспозиции 3 ч и др.

Патогенность. Микобактерии бычьего вида патогенны для мно­гих животных (коровы, овцы, козы, свиньи, лошади, кошки, собаки, олени, маралы и др.). Из лабораторных животных наиболее чувствительны кролики и морские свинки, у которых развивается генерализованный туберкулез.

Птичий вид микобактерий вызывает туберкулез у кур, индеек, цесарок, фазанов, павлинов, голубей, уток и др. В естественных условиях птичьими микобактериями заражаются домашние животные (лошади, свиньи, козы, овцы, иногда крупный рогатый скот), а в некоторых случаях и человек.

Из экспериментальных животных генерализованным туберкулезом болеют кролики. Морские свинки менее восприимчивы.

Заражение туберкулезом происходит воздушно-капельным и воздушно-пылевым путем, иногда через корма, объекты среды обитания, обсемененные микобактериями туберкулеза.

При аэрогенном заражении первичный инфекционный очаг развивается в легких, а при алиментарном — в мезентериальных лимфатических узлах.

Инкубационный период длится от нескольких недель до нескольких лет. Доказана персистенция L-форм, которые обладают способностью к реверсии в типичные микобактерии. Наличие L-форм рассматривают как причину рецидива туберкулеза в оздоровленных стадах(В. С. Федосеев, А. Н. Байгазанов, 1987).

Лабораторная диагностика. Выделить возбудителя туберкулеза в чистом виде трудно. Успех во многом зависит от характера исследуемого материала. В качестве последнего можно использовать пораженные органы и ткань, кровь, экссудат, транссудат, гной, молоко, масло, творог, мочу, фекалии, навоз, почву, воду, соскобы с различных объектов животноводческих помещений и т. п.

В каждом случае перед посевом необходимо выбирать соответствующий метод обработки материала.

Для освобождения от посторонней микрофлоры исследуемый материал обрабатывают 6—10 %-ным , раствором серной кислоты (метд Гона). Общее воздействие раствора серной кислоты на материал не должно превышать 25—30 мин.

Для обработки жидкого, полужидкого, кашицеобразного материала и с объектов среды обитания животных используют метод флотации. Сущность метода заключается в том, что исследуемый материал взбалтывают в колбе вместе с углеводородами (бензол, бензин и др.) и всплывающий слой пены, т. е. флотат, содержащий микобактерии туберкулеза, используют для приготовления мазков, посевов на питательные среды, заражения лабораторных животных.

Возбудитель ку-риккетсиоза (ку-лихорадка)

ку-риккетсиоз вызывается Coxiеlla burneli, характеризуется развитием ринита, пневмонии, конъюнктивитами и абортами. Болеет крупный и мелкий рогатый скот. Другие животные, в том числе птицы, могут быть риккетсоносителями.

Морфология и тинкториальные свойства. Риккетсиии Бернета – плеоморфные микроорганизмы, преобладают кокковидные и палочковидные формы шириной 0,2—0,4 и длиной 0,4—1,0 мкм. Выявлены две фазы их существования, аналогичные гладким и шероховатым формам бактерий. Фаза I — естественная форма существования микроорганизма. Фаза II образуется при пассиро­вании на куриных эмбрионах. Эти фазы несколько различаются по морфологии, патогенным, антигенным и другим свойствам. Обе фазы грамотрицательны, но при некоторых условиях окрашиваются по Грамму положительно. Неподвижны, не имеют жгутиков.

Культивирование. Хорошо культивируются риккетсии в желточных мешках куриных эмбрионов, клеточных культурах (фибриобласты, клетки L и др.), органах и тканях лабораторных животных (морские свинки, хомячки, белые мыши, кролики) Размножаются бинарным делением.

Устойчивость. В высохшей крови, взятой от больных животных, сохраняются 180 дней, в сухих фекалиях клещей — 586, в молоке при 4 °С — от 40 до 150 дней, и моче и навозе — несколько недель.

Лабораторная диагностика. У животных она основана на серологических исследованиях, микроскопии мазков (обнаружение возбудителя) и биологической пробе. Объектами для лабораторного исследования могут быть: при жизни животного — кровь, взятая из яремной вены (15—20 мл), клещи, собранные с животных, выделения из матки и влагалища, плацента абортировавшего животного; от погибших или убитых с диагностической целью (крупный и мелкий рогатый скот) — части пораженною легкого, головного мозга, селезенки, паренхимы вымени, регионарные лим­фатические узлы.

При микроскопии мазков обращают внимание на то, что риккетсии — внутриклеточные паразиты и поэтому могут быть обнаружены не только вне клеток тканей, но и внутри их. При этом можно видеть коккоподобные (0,2—0,5 мкм), палоч­ковидные (2 мкм) и нитевидные (10—12 мкм) формы, распо­лагающиеся одиночно, попарно и короткими цепочками.

С целью выделения возбудителя из патологического материала готовят суспензию с использованием физиологического раствора (1:10), в которую доавляют пенициллин (1000 ЕД/мл) и стрептомицин (500 ЕД/мл), через час проверяют ее на бактериальную стерильность пуем высева на сахарный МПА и в МБП. После этого суспензию (0,2-0,25мл) вводят с помощью шприца через скорлупу в желточный мешок 5-6 суточных куриных эмбрионов и помещают в термостат при 35-37 С.

Скорлупу яиц предварительно обрабатывают спиртом и йодом. Так проводят 4-6 «слепых» пассажей. При положительном результате отмечают гибель и отставание в развитии (по сравнению с контрольными) зараженных эмбрионов. Риккетсии обнаруживают микроскопически в препаратах — мазках из растертых оболочек желточного мешка. Иногда используют культуры куриных или мышиных фибробластов.

Биопроба. Для выявления риккетсий Бернета и подтвер­ждения их патогенности исходным патологическим материалом (суспензия 1:5 после обработки антибиотиками) или эмбриональ­ной культурой заражают двух молодых морских свинок (250-300 г) или четырех молодых белых мышей. Материал вводят внутрибрюшинно по 3-5 мл (морские свинки) и 0,5—1 мл (мыши). Морских свинок ежедневно термометрируют. Для получения четкой реакции проводят 3-5 «слепых» пассажей. В последних пассажах у морских свинок через 3—10 cvт после заражения появляется лихорадка, продолжающаяся 3—12 дней затем животные погибают. У погибших или убитых в период лихорадки животных отмечают увеличение печени, селезенки и лимфатических узлов.

Серологическая диагностика. Ставят РСК. Исследуемым материалом служит сыворотка крови больных животных. Реакцию учитывают по общепринятой схеме. При получении положительного результата (4 и 3 плюса) РСК повторяют для подтверждения полученных данных. Продолжительность серологи­ческого исследования составляет 3 сут.

Проводят также РА и РИФ (непрямой метод). Продолжитель­ность лабораторного исследования 1,5 мес.

Наличие ку-риккетсиоза у лабораторных животных подтверждают путем обнаружения возбудителей (чаще палочковидной формы) в препаратах-отпечатках на селезенке и печени, а также путем заражения куриных эмбрионов и постановки РА, РСК с сывороткой крови, взятой v морских свинок в конце периода лихорадки.

ПАТОГЕННЫЕ КОККИ

Кокки — широко распространенная в природе группа шаровид­ных сапрофитных и реже патогенных бактерий. Они относятся к семействам Micrococcaceaе и Deinococcaceaе.

Патогенными для животных являются главным образом бактерии родов Staphylococcus и Streptococcus. Обитают они на коже и слизистых оболочках дыхательных, пищеварительных и мочеполо­вых путей. Многие кокки — представители нормальной микрофлоры организма.

СТАФИЛОКОККИ

Стафилококки — сферические грамположительные неподвижные аспорогенные бактерии рода Staphylococcus из семейства Micrococcaceae. Открыты в 1880 г. независимо друг от друга Л. Пастером и А. Огстоном и более детально изучены Ф. Розенбахом в 1884 г.

Они вызывают фурункулы, абсцессы, флегмоны, остеомиелиты, маститы, эндометриты, бронхиты, пневмонии, менингиты, пиемии и септицемии, энтероколиты, пищевые токсикозы, стафилококкоз птиц.

Морфология. Стафилококки — сферические клетки диаметром 0,5—1,5 мкм. В препаратах из гноя и молодых бульонных культур располагаются одиночно, парами, короткими цепочками или небольшими кучками; в мазках из агаровых культур — и виде отдельных скоплений неправильной формы, напоминающие гроздь винограда. Жгутиков и капсул не имеют, спор не образуют. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, грамположительны, в старых культурах от дельные клетки окрашиваются грамотрицательно.

Культивирование. Факультативные анаэробы. Хорошо растут на универсальных питательных средах при температуре 35—40 С (возможен рост в интервале 6,5—46 С), оптимум рН 7,0—7.5. Добавление к питательной среде глюкозы или крови ускоряет рост стафилококков. Характерное свойство большинства штаммов — способность расти в присутствии 15 % хлорида натрия или 40 % желчи. На МПА образуют круглые, слегка возвышающиеся над поверхностью агара колонии с ровными краями диаметром 2—5 мм. ; Колонии могут быть окрашенными, так как стафилококки выра­батывают нерастворимые в воде пигменты, относящиеся к каротиноидам. Наиболее интенсивно пигменты образуются на агаре с 10 % обезжиренного молока после 24-часовой инкубации при 37 С и на картофеле при температуре 20—25 °С в аэробных условиях на свету. S.aureus синтезирует золотистый или оранжевый пигмент, встречаются и беспигментные штаммы; S.epidermidis, как правило, синтезирует пигмент белого или желтого цвета; у большинства штаммов S.saprophytics пигмент отсутствует.

При росте в МПБ стафилококки вначале вызывают диффузное помутнение с последующим выпадением рыхлого хлопьевидного осадка. Характерно растут в столбике желатина. Через 24—26 ч наряду с обильным ростом по уколу намечается начальное разжи­жение среды, которое затем увеличивается, и к 4—5-му дню по ходу укола образуется воронка, наполненная жидкостью. На кровяном агаре патогенные штаммы стафилококков образуют зна­чительную зону гемолиза.

Токсинообразование. Патогенные стафилококки синтезируют и секретируют высокоактивные экзотоксины и ферменты. Среди экзотоксинов выделяют четыре типа гемотоксинов (стафилолизинов), лейкоцидин и энтеротоксины.

К гемотоксинам относятся альфа-, бета-, гамма- и дельта-гемолизины.

Альфа-гемолизин вызывает лизис эритроцитов (Овец, свиней, собак, обладает летальным и дерматонекротическим действием, разрушает лейкоциты, агрегирует и лизирует тромбоциты.

Бета-гемолизин лизирует эритроциты человека, овец, крупного рогатого скота, летален для кроликов.

Гамма - гемолизин обнаруживается у штаммов, выделенных от человека, его биологическая активность низкая.

Дельта-гемолизин вызывает лизис эритроцитов человека, лошадей, овец, кроликов, разрушает лейкоциты.

Все стафилококковые гемолизины—мембранотоксины: они спо­собны лизировать мембраны клеток эукариотов.

Лейкоцидин негемолитический экзотоксин, вызывает дегрануляцию и разрушение лейкоцитов.

Энтеротоксины — термостабильные полипептиды, обра­зуются при размножении энтеротоксигенных стафилококков в питательных средах, продуктах питания (молоко, сливки, творог и др.), кишечнике. Устойчивы к действию пищеварительных ферментов. Известно шесть антигенных вариантов. Энтеротоксины вызывают пищевые токсикозы человека, к ним чувствительны кошки, особенно котята, и щенки собак.

К факторам патогенности стафилококков также относятся фер­менты коагулаза, гиалуронидаза, фибринолизин, ДНК-аза, лецитовителлаза и др. Коагулаза — бактериальная протеиназа, свер­тывающая плазму крови животных. Наличие коагулазы является одним из наиболее важных и постоянных критериев патогенности стафилококков.