Лекция_4_ГИ_М_2014
.pdf
ВЕКТОРЫ НА ОСНОВЕ
ВИРУСОВ РАСТЕНИЙ
К а к и е в и р у с ы и с п о л ь з у ю т ?
üвирус табачной мозаики (ВТМ)
üХ вирус картофеля (ХВК)
üвирус мозаики коровьего горошка (ВМКГ)
üвирус мозаики огурца (ВМО)
üвирус кустистой карликовости томата (ВККТ)
ВЕКТОРЫ НА ОСНОВЕ
ВИРУСОВ РАСТЕНИЙ
Ка к и е п р е и м у щ е с т в а ?
üВысокая скорость накопления - от 5 до 20 дней
üВысокий выход целевого белка – до 4 г/кг растительного материала
ДОСТАВКА |
|
ВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ |
Использование |
В РАСТИТЕЛЬНУЮ КЛЕТКУ |
Agrobacterium tumefaciens |
|
кДНК вирусов |
контролем промотора |
вируса мозаики |
капусты (35S-промотора) |
Векторные мРНК, синтезируемые с кДНК-матриц под контролем промотора фага Т7
ВАКУУМНАЯ
ИНФИЛЬТРАЦИЯ
«АГРОИНФИЛЬТРАЦИЯ»
ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ В РАСТЕНИЯХ
МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ С
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВИРУСНЫХ
ВЕКТОРОВ
ИММУНОГЛОБУЛИН G
Нужно получить и легкую и тяжелую цепи в равной пропорции!!!
Нужны два штамма вирусов!!!
Вариабельная
часть Дисульфидные мостики
Легкая |
Легкая |
цепь |
цепь |
Константная
часть
Тяжелая Тяжелая цепь цепь
Условие успешного синтеза –
исключение конкуренции между
вирусными векторами
1. Вирусный вектор на основе В Т М
Act 2 |
Репликаза крВТМ |
Транспортный |
Тяжелая цепь |
терми |
белок ВТМ |
IgG |
натор |
2. Вирусный вектор на основе Х В К
35S |
Репликаза ХВК |
25K |
8K |
Легкая цепь |
терми |
|
12K |
IgG |
натор |
||
|
|
|
|
|
ДВУХ КОМПОНЕНТНАЯ СИСТЕМА
Совместная инъекция
A.tumefaciens # 1
A.tumefaciens # 2
Экстракция
продукта
ВИРУСОПОДОБНЫЕ ЧАСТИЦЫ,
ПОЛУЧАЕМЫЕ В РАСТЕНИЯХ