Лекция_4_ГИ_М_2014
.pdf
кампестерин SCC-E |
дегидрогеназа |
3 карденолиды |
|
|
5-3β-гидроксистероид |
|
|
холестерин |
|
|
2 |
прегненолон |
прогестерон |
4 |
|
|
|||
ситостерин |
|
|
|
стигмастерин |
|
|
5 6 |
Масс-спектры
GC-SIM для определения прегненолона
A- трансгенное растение, В – контрольное растение.
А – масс-спектр прегненолона ацетата (стандарт), В – масс-спектр ГХ-фракции трансгенного растения.
A
В
С
А – масс-спектр прегненолона ацетата (стандарт), В – масс-спектр ГХ-фракции трансгенного растения,
С – масс-спектр ГХ-фракции Digitalis lanata.
Прегненолон не является гормоном, но продукт его последующего превращения – прогестерон - оказывает влияние на процессы роста и развития растений.
кампестерин SCC-E 5-3β-гидроксистероид дегидрогеназа
холестерин
прегненолон 
прогестерон
ситостерин
стигмастерин
?
3 карденолиды
2
4
5 |
6 |
Иммуноферментное определение прогестерона
|
Концентрация прогестерона, |
|
20 |
15,552 |
|
|
|
|
|
||
|
пмоль/л |
9,442 |
|
||
|
15 |
|
6,11 |
||
|
10 |
|
|||
|
|
|
|||
|
5 |
|
|
||
|
|
|
|
||
|
|
|
0 |
|
|
|
|
|
К |
CYP11A1 |
CYP11A1 - К |
|
|
|
1 |
2 |
3 |
|
|
|
Без очистки методом ТСХ |
||
Концентрациярогестерона, |
15 |
|
|
|
|
10 |
|
6,11 |
5,339 |
5,947 |
|
|
|
||||
5 |
|
|
|
|
|
пмольл/ |
|
11 |
22 |
3 |
|
|
0 |
|
|||
|
|
|
|||
|
Концентрация прогестерона в пробе: |
||||
|
1 – без очистки с помощью ТСХ, |
||||
|
2 – после ТСХ, |
|
|
||
|
3 – Digitalis lanata. |
|
|||
|
20 |
|
|
|
Концентрация прогестерона, пмоль/л |
15 |
|
|
|
10 |
|
6,535 |
5,339 |
|
5 |
1,196 |
|
|
|
|
0 |
К 1 |
CYP11A1 CYP11A1 - К |
|
|
|
|||
|
|
1 |
2 |
3 |
|
После очистки методом ТСХ |
|||
Содержание прогестерона в трансгенных растениях табака
Содержание
Образец прогестерона,
пмоль/г-1 сырого веса
CYP11A1 без |
очистки |
2,4 |
|
методом ТСХ |
|
||
|
|
||
CYP11A1 |
после |
2,1 |
|
очистки методом ТСХ |
|||
|
|||
Digitalis lanata |
2,4 |
кампестерин SCC-E |
дегидрогеназа |
3 карденолиды |
|
|
5-3β-гидроксистероид |
|
|
холестерин |
|
|
2 |
прегненолон |
прогестерон |
4 |
|
|
|||
ситостерин |
|
|
|
стигмастерин |
|
|
5 6 |
Карденолиды дигоксинового ряда широко используются в современной фармакотерапии сердечно-сосудистых
заболеваний.
Стероидные
гликозиды дигоксинового типа
(Rf=0,1-0,7)
1 – трансгенное растение,
2 – свидетель дигоксин,
3 – контрольное растение
При проведении ТСХ данные соединения обнаруживаются в виде десяти полос с хроматографической подвижностью от 0,1 до 0,7. В интактных растениях подобные полосы не обнаруживаются.
Выводы
Ø Полученные данные указывают на то, что в трансгенных
растениях рекомбинантный цитохром P450SCC проявляет свойственную ему каталитическую активность.
ØСозданные растения морфологически отличаются от
интактных растений (характеризуются повышенной скоростью роста и развития).
ØПрегненолон, образующийся в трансгенных растениях,
подвергается дальнейшему ферментативному превращению с образованием новых регуляторных молекул стероидной природы подобных карденолидам наперстянки Digitalis sp.
Сырьем для производства лекарственных препаратов является листовая масса нескольких видов наперстянки
(Digitalis ssp).
Digitalis purpurea L
üСбор сырья производят перед цветением üНаперстянка – двулетнее растение
Биотехнологические подходы
üразработка более эффективных методов выделения лекарственно ценных веществ; üсоздание новых форм растений, отличающихся повышенным содержанием карденолидов;
üсоздание растений с большим выходом биомассы;
üиспользование трансгенных растений табака как продуцентов карденолидов
Использование культуры HR в биотехнологии