Лекция_4_ГИ_М_2014
.pdf
Поиск систем экспрессии синтетических генов спидроинов
Дрожжи - выход продукта выше, но остается проблема дорогостоящих ферментаций и сложной процедуры выделения белков из клеток–продуцентов
Поиск систем экспрессии синтетических генов спидроинов
Растения – преимущества использования как биофабрик для наработки спидроинов:
-растения в своем геноме стабильно поддерживают собственные большие гены с прямыми повторами и эффективно синтезируют собственные сложные белки типа фибриллярных
-наличие высокоэффективных методов трансформации, разработанных для многих видов растений, отлаженная технология сбора, хранения и переработки растительного материала до их использования, простота масштабирования производства.
Необходимость использования новых подходов для дизайна систем экспрессии синтетических генов спидроина 1
•Низкая иммуногенность спидроинов и низкая степень связывания красителей со спидроинами
•Необходимость тестирования молекулярных масс рекомбинантных спидроинов в составе белковых экстрактов трансгенных растений
•Быстрый отбор трансгенных растений, экспрессирующих синтетические гены спидроина 1
•Определение уровня накопления спидроинов
Повторяющийся элемент спидроина 1: [GGAGQGGYGGLGSQGAGRGGLGGQGAG(A)4-7]
Повторяющийся элемент спидроина 2: [GPGGYGPGQQGPGGYAPGQQPSGPGS(A)6-10]
|
5 повторов спидроина 1 |
35S CaMV |
licBM2 polyA |
|
9 повторов спидроина 1 |
Tr2’ promoter
licBM2 polyA
Phenotype of Transgenic Potato Plants
35S CaMV
Tr2’ promoter
licB
1 – LicB
2 – GUS-LicB |
E. coli |
|
3– LicB-GUS
4– Маркер мол. масс
5– T91
6– S510
7 |
– S52 |
Plants |
8 |
– S52* |
|
polyA
licB polyA
Уровни накопления рекомбинантных белков спидроина в трансгенных растениях гаплоида табака
% от суммарного растворимого белка
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
LicB |
S5 |
T9 |
LicB – контрольные трансгенные растения, экспрессирующие ген лихеназы под контролем 35S CaMV промотора;
S5 – трансгенные растения табака линии S5; Т9 – трансгенные растения табака линии Т9.
Использование экспрессионной системы для генов спидроина 1
Имитация природного процесса прядения нитей спидроина 1
Для этого необходимо:
Высокая концентрация белка (около 40-45%)
Изменение рН и концентрации ионов Удаление воды из белкового раствора спидроина 1
