Вопрос 36

Культивирование микоплазм , риккетсий , хламидий.

Риккетсии и хламидии культивируются так же как и вирусы. Для культивирования вирусов используют культуры клеток , куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти методы применяют и для культивирования риккетсий и хламидий- облигатных внутриклеточных бактерий , которые не растут на искусственных питательных средах. Культуры клеток (тканей ) получают из тканей человека и животных:

- первичные , которые используют путем пассажей в течение только одной генерации

- перевиваемые поддерживают путем пассажей (перевивок) длительное время. Эти клетки довольно прочно прикрепляются к стеклу флакона , образуя монослой , и могут размножаться in vitro. Их готовят их эмбриональных и злокачественных линий клеток. Бляшки представляют собой погибшие клетки в сплошном монослое клеточной культуры. Титр вируса , установленный этим методом , выражают числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл.

Куриный эмбрион- удобная модель для культивирования вирусов, риккетсий и хламидий с целью приготовления диагностических , профилактических и лечебных препаратов - вакцин , диагностикумов. Используют куриные эмбрионы в возрасте от 8 до 12 дней. Как размножаются вирусы , судят по тем морфологическим изменениям , которые обнаруживаются после вскрытия эмбриона на его оболочках. Недостатки данного метода: невозможность обнаружения исследуемого микроба без предварительного вскрытия эмбриона : наличие в нем небольшого количества белков и др-х соединений , затрудняющих последующую очистку вирусов при приготовлении различных препаратов.

Микоплазмы размножаются на бесклеточных питательных средах, но для своего роста большинство из них нуждается в холестерине, который является уникальным ком­понентом их мембраны (даже у микоплазм, не требующих для своего роста стеролов), в жирных кислотах и нативном белке.

Для выделения культур могут быть использованы жидкие и плотные питательные среды. Рост в жидких средах сопровождается едва види­мым помутнением, на плотных средах с дрожжевым экстрактом и лошадиной сыворот­кой формирование колоний происходит следующим образом. В связи с их малыми размерами и отсутствием ригидной клеточной стенки микоплазмы способны проникать с поверхности агара и размножаться внутри его — в промежутках между ни­тями агара.

При нанесении капли материала, содержащего микоплазмы, она проникает через имеющуюся на поверхности агара водную пленку и адсорбируется агаром, образуя небольшое уплотнение между его нитями. В результате размножения микоплазм, при­близительно через 18 ч, внутри сплетенных нитей агара формируется маленькая сфери­ческая колония под поверхностью агара; она растет и через 24—48 часов инкубации достигает поверхностной водной пленки, в результате чего образуются две зоны роста — мутный гранулярный центр, врастающий в среду, и плоская ажурная полупросвечивающая периферическая зона (вид глазуньи).