Вопрос 33

Методы культивирования вирусов(куриные эмбрионы).

Вирусы являются облигатными внутриклеточными микроорганизмами и принципиально отличаются от всех остальных микроорганизмов отсутствием клеточной организации и ферментов строительного и энергетического метаболизма , наличием одного типа НК (ДНК или РНК) , неспосотбностью к бинарному делению.Для культивирования вирусов используют культуры клеток , куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти методы применяют и для культивирования риккетсий и хламидий- облигатных внутриклеточных бактерий , которые не растут на искусственных питательных средах. Культуры клеток (тканей ) получают из тканей человека и животных:

- первичные , которые используют путем пассажей в течение только одной генерации

- перевиваемые поддерживают путем пассажей (перевивок) длительное время. Эти клетки довольно прочно прикрепляются к стеклу флакона , образуя монослой , и могут размножаться in vitro. Их готовят их эмбриональных и злокачественных линий клеток. Бляшки представляют собой погибшие клетки в сплошном монослое клеточной культуры. Титр вируса , установленный этим методом , выражают числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл.

- полуперевиваемые культуры- к ним относятся диплоидные клеткичеловека.

Куриный эмбрион- удобная модель для культивирования вирусов, риккетсий и хламидий с целью приготовления диагностических , профилактических и лечебных препаратов - вакцин , диагностикумов. Используют куриные эмбрионы в возрасте от 8 до 12 дней. Как размножаются вирусы , судят по тем морфологическим изменениям , которые обнаруживаются после вскрытия эмбриона на его оболочках. Недостатки данного метода: невозможность обнаружения исследуемого микроба без предварительного вскрытия эмбриона : наличие в нем небольшого количества белков и др-х соединений , затрудняющих последующую очистку вирусов при приготовлении различных препаратов.

Вопрос 34

Методика определения липолитических свойств.

Определение липолитической активности

Липолитические свойства культуры исследуют на среде определённого состава (бульон Штерна). Готовят бульон следующим образом: к 100 см3 МПБ добавляют 1 см3 глицерина и приливают 2см3 свежеприготовленного 10 %-ного водного раствора сульфита натрия, затем по каплям 10 %-й спиртовой раствор основного фуксина (≈ 5 кап.).

Культуры культивируют в термостате при 37 0С. Отмечают изменение цвета среды, рН (лакмусовой бумагой), помутнение, наличие хлопков.

Вопрос 35

Методика определения титра(силы) бактериофага по Аппельману (опыт).

В 10 проборок наливают по 4мл бульона. В первую пробирку вносят 0,5 мл фага. Получается разведение 1:10. После размешивания из первой пробирки новой пипеткой переносят 0,5 мл жидкости во вторую. Получается второе разведение 1:100 и так далее до 9-й пробирки, из которой 0.5мл разбавленной жидкости выливают. В 10-ую пробирку , содержащую такое же количество бульона , бактериофаг не добавляем (контроль). Во все пробирки вносят по 0,25мл культуры бактерий. Опыт проводится в стерильных условиях. Пробирки должны быть закрыты пробками. Засеянные пробирки выдерживают в термостате 24 часа. После чего отмечается результат опыта . Последняя прозрачная пробирка в ряду определяет титр бактериофага. Например если последней прозрачной пробиркой является 7-я , то титр фага в данном случае обозначается десять в минус седьмой степени.