Лабораторная работа 2

Исследование наличия белка и свободных аминокислот в биологическом материале

Химический состав биологических жидкостей (кровь, моча, желудочный сок, слюна и т.п.) характеризуется постоянством и отражает состояние биохимических процессов, происходящих в органах и тканях. Отклонение от нормы в качественном и количественном составах биологических жидкостей может быть показателями патологического процесса.

Материал исследования

Сыворотка крови, слюна, моча.

Реактивы

1) 0,5% р-р нингидрина, 2) 10% р-р NaOH, 3) 10% р-р трихлоруксусной кислоты (ТХУ), 4) 5% р-р CuSO₄.

Проведение анализа

С 5 каплями сыворотки, слюны и мочи проводят биуретовую реакцию (см. "Лабораторная работа 1"), определяя наличие или отсутствие белка в пробах.

Дальнейшие действия зависят от наличия или отсутствия белка в пробах:

• если жидкость не содержит белок, то с 10 каплями исследуемого материала проводят нингидриновую реакцию (см. "Лабораторная работа 1") для определения наличия или отсутствия ‑аминокислот;

• если в жидкости присутствует белок, то для последующего исследования берут 20 капель биологической жидкости, в нее добавляют 5 капель 10% раствора ТХУ и нагревают до осаждения белка. Белок отделяют центрифугированием или фильтрованием через бумажный фильтр (предварительно смочив фильтр водой).

Далее в безбелковом надосадке (или фильтрате) с помощью нингидриновой реакции определяют наличие или отсутствие ‑аминокислот. Для этого к нему добавляют 5 капель 0,5% р-ра нингидрина и нагревают в кипящей водяной бане.

Оформление работы

Результаты анализа вносят в таблицу. Знаками ‘’+’’ и "–‘’ отмечают результаты наблюдения.

Делают вывод о содержании белка и аминокислот в биологических жидкостях и его причинах.

Объект исследования	Обнаруженные соединения
	Белок	Свободные аминокислоты
Сыворотка крови Слюна Моча

Практическое значение

Свойство биологических жидкостей изменять свой состав при патологии нашло применение в клинико-диагностических лабораториях для диагностики заболеваний и контроля лечения. Многие методы определения веществ требуют наличия безбелковой жидкости, поэтому они начинаются с удаления белка из раствора путем фильтрации или центрифугирования.

Цветные реакции на белок и аминокислоты используют в биохимических исследованиях для контроля полноты удаления белка из жидкости, наличия аминокислот в биологических средах, а также качественного анализа белковых лекарственных средств в фармацевтической практике.

Тема 1.2. Структура и физико-химические свойства белков Актуальность

Выделение белков из раствора (в том числе высаливание и денатурация) широко используется в медицине для диагностических целей, получения и очистки белковых лекарственных препаратов, в экспериментальных исследованиях.

Цель

Изучить физико-химические свойства белков (молекулярная масса, форма, ионизация, гидратация, растворимость) и основные типы структур белковых молекул.

Научиться осаждать белки из раствора разными методами и использовать способность к осаждению белков в лабораторной практике.