Реактивы

1) Р-р субстрата АсАТ: смесь ‑кетоглутаровой кислоты и аспарагиновой кислоты, 2) р-р субстрата АлАТ: смесь‑кетоглутаровой кислоты и аланина, 3) р-р 2,4‑динитрофенил­гидразина в 1,0 М HCl, 4) 0,4 М р-р NaOH.

Стандартный р-р пировиноградной кислоты, 0,1 ммоль/л.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Проведение анализа

	Проба 1, стандартная, мл	Проба 2, опытная для АлАТ, мл	Проба 3, опытная для АсАТ, мл
Субстратный р‑р АлАТ	0,25	0,25	––
Субстратный р‑р АсАТ	––	––	0,25
Стандартный раствор пировиноградной кислоты	0,05	––	––
Сыворотка крови	––	0,05	0,05
	Инкубируют 30 минут при 37°С
2,4‑ДНФГ	0,25	0,25	0,25
	Инкубируют при комнатной температуре в течение 20 минут
NaOH	2,5	2,5	2,5
	Инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут. Колориметрируют опытные и стандартную пробы против воды при 540 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

Активность АлАТ, ммоль/л·ч =

Активность АсАТ, ммоль/л·ч = , где

Е_ст, Е_оп2, Е_оп3– соответственно оптическая плотность стандартной и опытных проб для АлАТ и АсАТ, С_ст – концентрация стандартного раствора, 2 – коэффициент перевода 30 минут в 1 час.

Нормальные величины

Сыворотка крови	Активность АлАТ	0,10-0,68 ммоль/л·ч
	Активность АсАТ	0,10-0,45 ммоль/л·ч
Коэффициент де Ритиса ()		1,330,40

Клинико-диагностическое значение

Наиболее часто определение активности АсАТ и АлАТ используется в клинической практике для выявления патологических процессов в миокарде и печени.

В миокардегораздо более высокая активность АсАТ, чем АлАТ. Повышение в крови активности обоих ферментов, особенно АсАТ, в остром периоде инфаркта миокарда является достоверным диагностическим тестом и имеется в 95% случаев. Активность АсАТ достигает максимума через 24-36 часов (обычно повышена в 4-5 раз) и при адекватном лечении снижается к 3‑7‑м суткам. При стенокардии активность ферментов в крови изменяется незначительно.

При поражении печени(токсический, сывороточный и инфекционный гепатит) в сыворотке крови высока активность также обоих ферментов, однако более выражено повышается активность АлАТ, чем АсАТ. При инфекционном гепатите активность ферментов повышается еще до появления желтухи. В половине случаев цирроза печени, однако, наблюдается более высокая активность АсАТ, чем АлАТ.

Коэффициент де Ритиса (отношение АсАТ/АлАТ) при инфаркте миокарда значительно увеличивается, при гепатитах снижается.

Оформление работы

Указывают принцип метода, ход работы, нормальные величины и результаты исследования, отмечают клинико-диагностическое значение показателя и делают выводы о возможной патологии.

Тема 5.3. Пути превращения аммиака и его обезвреживание

Актуальность

Непрерывное образование больших количеств аммиака в организме определяет необходимость его постоянного обезвреживания и выведения. Врожденные и приобретенные нарушения процессов обезвреживания аммиака вызывают серьезные клинические осложнения. Знание этих процессов необходимо для адекватной терапии заболеваний печени и почек, нарушений азотистого обмена.

Цель

Изучить основные пути обезвреживания аммиака с образованием конечных продуктов белкового обмена.

Научиться определять содержание мочевины и креатинина в сыворотке крови и моче.

Вопросы для самоподготовки

1. Основные источники аммиака в тканях. Реакции обезвреживания биогенных аминов, прямого дезаминирования глутаминовой кислоты.

2. Основные пути связывания аммиака в клетках:

• реакция восстановительного аминирования (реаминирование), фермент и значение реакции;

• реакции образования амидов глутаминовой и аспарагиновой кислот, отметьте их биологическое значение, опишите в каких органах проходят эти реакции;

• реакция синтеза карбамоилфосфата.

3. Транспортные формы аммиака в крови (глутамин, аспарагин, аланин). Схема глюкозо-аланинового цикла.

4. Роль печени, почек и кишечника в связывании и выведении аммиака.

5. Реакции орнитинового цикла синтеза мочевины. Его локализация, ферменты, значение. Связь орнитинового цикла и ЦТК.

6. Представление о гипераммониемиях, их причинах и последствиях. Нормальный и предельно допустимый уровни концентрации аммиака в крови. Причины токсичности аммиака.

7. Аммониегенез, химизм, локализация, значение.

8. Креатин и креатинфосфата, реакции синтеза. Биологическая роль креатинфосфата.

9. Креатинин, реакция образования, выведение.

10. Количественное определение мочевины в сыворотке крови и моче. Принцип метода, его клинико-диагностическое значение, нормальные показатели.

11. Количественное определение концентрации креатинина в сыворотке крови и моче. Принцип метода, его клинико-диагностическое значение, нормальные показатели.