Оформление работы

Отмечают принцип метода и ход работы. Результаты работы оформляют в виде таблицы. В выводах отмечают причину отсутствия окраски в одной из проб и специфичность фермента.

Пробы	Субстрат реакции	Окраска	Наличие реакции
Опыт 1 Опыт 2

Обнаружение специфичности действия амилазы слюны Принцип

Метод основан на сравнительном изучении способности фермента амилазы (КФ 3.2.1.1.) гидролизовать разные углеводные субстраты – полисахарид крахмал и дисахарид сахарозу.

Субстрат + Н₂О Продукт (мальтоза, декстрины)

Действие фермента на субстрат выявляют при помощи качественной реакции на свободную альдегидную группу углеводов (реакция Троммера).

Реакция Троммера может быть положительной (красно-оранжевая окраска) только в случае расщепления субстратов до восстанавливающих сахаров (мальтоза, глюкоза и другие), которые имеют свободную альдегидную группу и обладают восстанавливающими свойствами. Субстраты реакции (крахмал и сахароза) не имеют свободной альдегидной группы, поэтому не дают положительной реакции Троммера.

Проведение реакции

Приготовление раствора слюны (выполняет дежурный для всей группы).

Собирают 1 мл слюны в мерную пробирку и доводят дистиллированной водой до метки 10 мл, хорошо перемешивают.

	Опыт 1, капли	Опыт 2, капли
1% р-р крахмала 1 % р-р сахарозы Р-р слюны	–– 10 5	10 –– 5
	Перемешивают. Инкубируют при температуре 37°С в течение 10 минут
Реактив Феллинга I Реактив Феллинга II	3 3	3 3
	Перемешивают. Выдерживают в кипящей водяной бане при температуре 100°С до появления желтого или красно-оранжевого окрашивания в одной из пробирок

Оформление работы

Отмечают принцип метода и ход работы. Результаты работы оформляют в виде таблицы. В выводах отмечают причину отсутствия реакции в одной из проб и специфичность фермента.

Пробы	Субстрат реакции	Окраска	Наличие реакции
Опыт 1 Опыт 2

Лабораторная работа 4 Влияние активаторов и инактиваторов на активность амилазы Принцип

Метод основан на сравнении скорости гидролиза крахмала под действием амилазы (диастаза, 1,4‑‑D‑глюкангидролаза, КФ 3.2.1.1.) слюны без добавления каких-либо веществ и после добавления ионов Cl^–и Cu²⁺. Активность фермента выявляется по степени гидролиза крахмала при помощи цветной реакции с йодом.

Нерасщепленный крахмал с йодом дает синее окрашивание. Гидролиз крахмала под действием амилазы проходит через стадии образования декстринов до дисахарида мальтозы.

Крахмал + Н₂ОМальтоза + Декстрины

Декстрины в зависимости от размера молекул дают с йодом окрашивание: ● амилодекстрины – фиолетовое, ● эритродекстрины – красно-бурое, ● ахродекстрины и мальтоза – цветная реакция отсутствует, желтый цвет соответствует цвету водного раствора йода.