23. Лабораторная диагностика эшерихиозов.

Микробиологическая диагностика.

Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, остатки съеденной пищи. Микроскопический метод. Для ускоренной идентификации патогенных типов кишечных палочек применяется метод иммунофлуоресценции с использованием группоспецифических меченых сывороток (против наиболее часто встречающихся серогрупп: О-1, О-26, О-55, О-111, О-114, О-124, О-151, О157).

Бактериологический метод. Исследуемый материал засевают на чашки со средой Эндо и Плоскирева. Через 24 часа инкубации при 37° С выбирают окрашенные колонии. Принадлежность к диареегенным кишечным палочкам устанавливают с помощью РА – на стекле со смесью сывороток против чаще всего встречающихся серогрупп (поливалентная ОКА-сыворотка). При отрицательном результате РА повторяется с поливалентными сыворотками против менее часто встречающихся серогрупп: с поливалентными OKB, OKC, OKD и OKF-сыворотками. Исследуют не менее 10-колоний с каждой чашки. При положительном результате РА оставшуюся часть колоний пересевают на скошенный агар и короткий пестрый ряд или на среду Рессела. Полученную культуру идентифицируют на основании морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных свойств. Серогруппу патогенных эшерихий определяют в реакции агглютинации с моновалентными (монорецепторными) сыворотками, входившими в состав поливалентной, давшей положительную РА.Помимо выделения чистой культуры патогенных эшерихий в бактериологическом этапе могут быть использованы методы определения их биологических компонентов. Так, для определения как LT, так и ST применяется реакция коагглютинации. LT выявляют также при культивировании энтеротоксигенных эшерихий на культуре клеток надпочечников YJ, чувствительных к этому токсину. Для определения веротоксинов VT1 и VT2 используются реакция обращенной пассивной латексной агглютинации (РОПЛА метод) и метод иммуноферментного анализа(ИФА). Методом ДНК-зондов можно обнаружить гены плазмид E.coli, контролирующих синтез их цитотоксинов

Биологический метод. Может быть использован для идентификации чистой культуры: а) энтеротоксигенных эшерихий, продуцирующих термостабильный токсин (ST) – на мышах-сосунках при внутрибрюшинном введении; б)энтерогемморагических эшерихий, продуцирующих VT1 и VT2 на взрослых мышах весом 16 – 18 г при внутрибрюшинном введении. При положительном результате мыши погибают через 10 - 12 часов. При вскрытии погибших мышей обнаруживаются патологические изменения в тонком (энтеротоксигенные эшерихии) или толстом кишечнике при наличии энтерогемморагических эшерихий (отёк слизистой, эритемы, геморрагии); в) энтероинвазивных – по возникновению конъюнктивита у морских свинок при внесении культуры в их конъюнктивальный мешок.

Серологический метод. Заключается в выявлении антител к энтеропатогенным кишечным палочкам в РА или РНГА с аутокультурой. Реакция считается положительной при нарастании титра антител в 4 и более раз в динамике заболевания. Наличие О-антител позволяет отличить острый инфекционный процесс от бактерионосительства.

Аллергологический метод. Не применяется, так как тип иммунного ответа при эшерихиозах – В

24. Сальмонеллы: классификация, биохимизм, антигены, роль в патологии человека.

Классификация сальмонелл, основанная на строении ДНК включает 2 вида – Salmonella enterica и Salmonella bongori. Вид Salmonella enterica включает 6 подвидов, в каждом из которых множество серотипов. Вид Salmonella bongori (S. suipestifer), раньше считался пятым (V) подвидом Salmonella enterica; для человека он непатогенен.

Сальмонеллы имеют 3 основных антигенных комплекса:

О антиген, К- и Н- антигены. О-антиген – соматический, термостабильный, связанный с телом микробной клетки. К-антиген (поверхностный, «капсульный»), имеющийся только у Salmonella typhi и Salmonella paratyphi С. Одним из компонентов К-антигена является Vi-антиген или антиген «вирулентности». Это полимер N-ацетилгалактозаминоурановой кислоты, расположен на поверхности микробной клетки, является специфическим рецептором для некоторых фагов, называемых Vi-фагами. В состав К-антигена входит также М-антиген (слизистый). Н-антиген – термолабильный, связанный со жгутиками.

Биохимические свойства Сальмонеллы ферментируют углеводы (глюкозу, мальтозу, маннит, арабинозу, маннозу) с образованием кислоты и газа. Не ферментируют лактозу, сахарозу. В отличие от остальных сероваров S.Тyphi не выделяет газ при ферментации углеводов. При расщеплении белков образуют сероводород, за исключением S. Paratyphi A. Индол не образуют. Оксидазоотрицательны, каталазоположительны