Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Микроскопические грибы рода Fusarium. Учебное пособие по дисциплине «Микробиология» для студентов по специальности 36.05.01 «Ветеринария»
.pdf
41
Рисунок 48 – Тестирование гриба рода Fusarium на личинках Galleria
mellonella
Критерии оценки биотестирования: токсичный – выживших 0-39 %,
почернение брюшка; слаботоксичный – выживших 40-69 %, насекомые
совершают манежные движения или малоподвижны; нетоксичный –
выживших 70-100 %, насекомые активны, сохранена способность к прядке
паутинной нити.
Метод определения патогенных свойств мицелиальных грибов.
С агаровой пластинки Чапека делают смыв культуры гриба стерильным
физиологическим раствором. Полученную суспензию гриба рода Fusarium
центрифугируют в градуированных пробирках при 1000 об/мин в течение 15
мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок разводят до 1 мл стерильным
физиологическим раствором. Количество клеток гриба в суспензии
подсчитывают в счетной камере Горяева (1 см
3
, т.е. на 1 мл). Для
приготовления взвеси с плотностью, которая необходима для заражения
подопытных животных, применяется метод последовательного разведения.
Для приготовления споровой суспензии добавляют 1-2 капли Твина-80.
42
Для заражения используют 2 кроликов. Суспензию кроликам вводят
внутривенно в количестве 1 мл. В случае вирулентности штамма заболевание
отмечается на 2-4 сутки. Наблюдается угнетение, повышается температура,
парезы, параличи.
Метод определения вирулентности штамма
Внутрижелудочное введение при помощи металлического зонда – иглой
от шприца с напаянной на конце оливой. Допустимая доза введения суспензии
гриба - до 1 мл жидкости.
При внутрибрюшинном введении мышам мицелиальной суспензии
гриба фиксированное животное опускают головой вниз, место вкола
освобождают от волос и дезинфицируют. Стенку живота (нижней трети) берут
большим и указательным пальцем в складку, у основания которой делают
прокол. После прокола брюшной стенки иглу направляют по ходу складки.
Инъекцию можно проводить, держа иглу перпендикулярно брюшной стенке,
но в таких случаях конец иглы, чтобы не повредить внутренние органы должен
быть сточен. Допустимо инъецировать не более 2 мл жидкости.
43
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РОСТА ГРИБОВ
РОДА FUSARIUM
Картофельный агар с глюкозой (по Щербакову).
20 г очищенного картофеля.
10 г глюкозы.
2 г агара.
100 куб. см воды.
Картофель нарезают ломтиками и заливают водой, стерилизуют 40 минут текучим
паром, сливают и объем восстанавливают, кладут 2 г агара и 1 час стерилизуют
текучим паром, потом добавляют 10 г глюкозы, разливают в пробирки и
стерилизуют до одной атмосферы.
Употребляется для изучения окраски питательной среды, производимой грибами
рода Fusarium.
Картофельный агар подкисленный (по Щербакову).
В ещё горячий картофельный агар, налитый в пробирки из расчёта 10 куб. см и уже
простерилизованный, прибавляют 1-2 капли лимонной кислоты 50 % раствора,
отдельно простерилизованной.
Употребляется при выделении Fusarium из материала, сильно загрязнённого
бактериями и для изучения окраски среды
Ломтики картофеля. Нарезают небольшие ломтики картофеля, помещают
их в пробирки; стерилизуют текучим паром как рис.
Овсяный агар (по Щербакову).
10 г овса.
2 г агара.
100 куб. см воды.
В овёс наливают 100 куб. см воды, ставят в сушильный шкаф на 1 час
при t 60 °С, отфильтровывают и восстанавливают прежний объём, затем
прибавляют 2 г агара и стерилизуют 1 час текучим паром.
Для культивирования Fusarium.
Черносливовый агар.
5 г чернослива.
2 г агара.
100 куб. см воды.
Сливы заливают 100 куб. см воды и кипятят 1 час, затем фильтруют, прибавляют
агар, снова кипятят 1 час, разливают по пробиркам и стерилизуют 2 раза с
суточными промежутками каждый раз в течение 1 часа текучим паром.
Для культивирования Sclerotinia sclerotiorum.
Морковный агар
25 г моркови
2 г агара.
100 куб. см воды.
44
25 г моркови пропускают через тёрку, обливают 100 куб. см воды и ставят в
автоклав на 1 час, затем фильтруют, восстанавливают объём, прибавляют 2 г агара
и кипятят 1 час текучим паром.
ОПИСАНИЕ ПИГМЕНТА КУЛЬТУРЫ
описание культуры производят на 30 сутки, описывается окраска первичной
грибницы, окраска зерен риса, каймы вокруг зерен, появление вторичной
грибницы, окраска ее, склероции и.т.д.
Грибы-продуценты
Микотоксины
Fusarium poae
Ацетил Т-2 токсин
Fusarium equiseti, F. tricinctum,
F. graminearum
Бутенолид
Fusarium sp
Дсоксипиналемол
Fusarium-sp.
Диацетоксисцирпенол
Fusarium graminearum (Gibberella
zeae), F. culmorum, F. equiseti, F.
moniliforme, F. tricinctum.
Зеараленон
Fusarium moniliforme, F. graminearum,
F. fusarioides, Gibberella fujikuroi
Монилиформин
Fusarium culmorum, F. solani, F. poae,
F. sporotrichioides, F. lateritium, F.
equiseti, F. averaceum
Неосоланиол
Fusarium nivale
Ниваленол
Fusarium poae, F. sporotrichioides
Споротрихин
Fusarium sp.
Т-2 токсин
Fusarium nivale, F. graminearum, F.
equiseti, F. solani, F. lateritium, F.
avinaceum
Фузаренон X
45
МАКСИМАЛЬНО ДОПУСТИМЫЕ УРОВНИ СОДЕРЖАНИЯ
МИКОТОКСИНОВ
Микотоксин
Корм, вид животного, половозрастная группа
МДУ
Т-2 токсин
Комбикорма для всех видов животных
100 мкг/кг
ДОН
Фуражное зерно и продукты его переработки
2 мг/кг
Комбикорма для всех видов животных
1 мг/кг
Зеараленон
Комбикорма для свиноматок, ремонтного молодняка до 2-х
месячного возратса, хряков-производителей
0,035 мг/кг
Фуражное зерно поступающее по импорту
1 мг/кг
Корма для свиней на откорме массой до 50 кг
2 мг/кг
Корма для свиней на откорме массой свыше 50 кг
3 мг/кг
Фумонизин В
1
Кукуруза
0,2 мг/кг
46
СЛОВАРЬ ТЕРМИНОВ
Анаморфа – стадия бесполого размножения в цикле развития гриба
(несовершенная форма).
Апекс – вершина, кончик.
Аскоспора – эндогенная спора полового размножения у сумчатых грибов
(Ascomycota). Аскоспоры формируются внутри одноклеточной сумки (аска).
Вегетативный мицелий – мицелий, не несущий спорообразующих органов и
спор.
Воздушные гифы – гифы мицелия, образующиеся на поверхности субстрата
или выступающие над субстратом (в лабораторных условиях – агаризованная
питательная среда). У видов Fusarium образуемые на воздушных гифах
макроконидии более вариабельны и менее характерны, чем образуемые в
спородохиях. Так в случае Fusarium semitectum макроконидии на переплетенных
гифах воздушного мицелия прямые, тогда как образуемые в спородохиях/пионотах
– изогнутые.
Гетероталличный вид – анаморфный вид грибов, у которого структуры
полового размножения образуются при скрещивании двух раздельнополых и
совместимых талломов (штаммов).
Гифа – нитевидный элемент гриба, септированный (с перегородками –
септами) или без септ (одноклеточный).
Голоморфа – гриб, как совокупность его телеоморфной и анаморфной стадий.
Гриб – эукариотический организм, лишенный хролофилла, питающийся
путем поглощения молекул и ионов, гетеротрофный, размножающийся как
половым, так и бесполым путем, с одноклеточным или многоклеточным (мицелий)
вегетативным телом и клеточной стенкой, содержащей хитин, целлюлозу или другие
сложныеполисахариды.
Конидиогенная клетка – клетка, образующая конидии; у грибов рода
Fusarium
Конидия – экзогенная спора бесполого размножения грибов.
Макроконидии - образуются в воздушном мицелии на простых или
ветвящихся конидиеносцах или представляют собой скопления массы
конидиеносцев в виде спородохиев, или образуют пионоты.
Микроконидии – меньше из конидий двух типов, возникающих одинаковым
путем. Обычно образуется у грибов рода Fusarium и у некоторых дерматофитов.
Мицелий – грибковый таллом (вегетативное тело) большинства видов
грибов, состоящий из массы ветвящихся нитевидных гиф.
Перетеций – бутылевидный аскокарп с выводным отверстием.
Перидий – оболочка клейстотеция.
Плесневый гриб – мицелиальный гриб.
Ростковая щель – тонкостенное углубление в конидии или в споре полового
размножения, через которое происходит прорастание.
Септа – поперечная клеточная перегородка в гифе.
47
Субстратные гифы – гифы мицелия, пронизывающие субстрат (в
лабораторных условиях – агаризованная питательная среда).
Сумка (аск) – особая клетка, формирующаяся у сумчатых грибов
(Ascomycota), внутри которой образуются аскоспоры.
Склероций – вегетативная структура, состоящая из видоизмененных плотно
переплетенных гиф мицелия и служащая для перенесения неблагоприятных
условий.
Спора – любая репродуктивная пропагула; могут быть споры бесполового
размножения (возникающие без предшествующего полового процесса) и споры
полового размножения (образованию которых предшествует половой процесс),
например, акоспоры и базидиоспоры.
Спорангий – мешковидная структура, внутреннее содержимое который
постепенно распадается на бесполые репродуктивные пропагулы.
Строма – компактная вегетативная структура, на которой или внутри которой
развиваются плодовые тела.
Таллом – вегетативное тело гриба.
Телеоморфа – стадия полового размножения в цикле развития гриба
(совершенная форма).
Фиалида – конидиогенная клетка на верхушке конидиеносца,
последовательно образующая на верхнем открытом конце конидии (фиалоконидии).
Хламидоспора – расширенная толстостенная клетка мицелия, как правило,
шаровидной формы. Структура вегетативного размножения, служащая также для
перенесения неблагоприятных условий.
Шнур – извитая слизистая масса конидий, выталкиваемая из пикниды или
перитеция наподобие зубной пасты из тюбика.
Экссудат – капли жидкости, образующиеся на поверхности культур, часто
интенсивно.
48
ЛИТЕРАТУРА
1.Белосохов, А.Ф. Микобиота клубней картофеля / А.Ф. Белосохов, М.М.
Ярмеева, С.М. Миславский, М.Л. Курчаев, А.М.Долгов, Г.П. Албантов, Д.Н.
Скоков, А.А. Цинделиани, Л.Ю. Кокаева, Е.М. Чудинова., С.Н. Еланский
//Микология и фитопатология. 2023. Т. 57. № 2. С. 123-133.
2. Билай, В.И. Фузарии (Биология и систематика). Киев: изд-во АН УССР,
1955.320 с.
3. Билай, В.И. Фузарии // Киев. Наукова Думка. 1977. 440 с.
4. Билай, В.И., Определитель токсинообразующих микромицетов / В.И. Билай,
З.А. Курбацкая // Киев: Наукова думка, 1990. 236 с.
5. Билай, В.И. Метод микрокультуры для получения типичного
конидиеобразования у фузариев / В.И. Билай И.А. Элланская // Микология и
фитопатология. - 1975. - Т. 9. - Вып. 1.-С. 74-76.
6. Виноградова, Ю.А. Разнообразие почвенных микромицетов в торфяных
мерзлотных почвах южной тундры / Ю.А. Виноградова, Е.М. Лаптева, В.А.
Ковалева, Е.М. Перминова // Микология и фитопатология. 2022. Т. 56. № 3.
С. 155-170.
7. Гагкаева, Т.Ю. Эколого-популяционные исследования гриба Fusarium
graminearum Schwabe и фузариоустойчивость пшениц и эгилопсов. Автореф.
дисс. СПб, 1994. 22 с.
8. Гагкаева, Т.Ю. Пораженность видов злаковых растений грибом Fusarium
graminearum II Тез. докл. конф. молод, ученых «Экологические проблемы
защиты растений». JL, 1990. С. 74.
9.. Гагкаева, Т.Ю. Внутривидовое разнообразие гриба F. graminearum//
Современная микология в России. I съезд микологов России. Тез. докл. М. -
2002. - С. 179-180.
10. Гагкаева, Т.Ю., Орина А.С., Гаврилова О.П. Разнообразие грибов рода
Microdochium, выявленных на зерновых культурах в России. //Микология и
фитопатология. 2020. Т. 54. № 5. С. 347-364.
11. Гарифуллина, Г.Ф. Распространение и видовой состав возбудителей
фузариоза озимой ржи на территории Башкирии / Г.Ф. Гарифуллина, А.В. //
Микология и фитопатология. - 1996. — Т. 30. - № 1.-С. 51-55.
12. Гарифуллина, Г.Ф. Структура популяций фузариевых грибов,
поражающих рожь в Башкирии / Г.Ф. Гарифуллина, А.В. Долгова, И.Д.
Инсарова, Ю.Т. Дьяков // Микология и фитопатология. - 1996. - Т. 30. - Вып.
2. - С. 43-51.
13. Гвоздева, М.С. Влияние фунгицида колосаль на структуру популяции
возбудителя бурой ржавчины пшеницы по признакам патогенности и
49
чувствительности / М.С. Гвоздева, Г.В. Волкова //Микология и
фитопатология. 2022. Т. 56. № 1. С. 52-63.
14. Ермолаева, О.К. Микрофлора кормов в районах республики Татарстан /
О.К. Ермолаева, С.А. Танасева, Л.Е. Матросова, Р.М. Потехина, Ю.В.
Красовская //Ученые записки Казанской государственной академии
ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2020. Т. 243. № 3. С. 84-87.
15. Ермолаева, О.К. Пораженность кормов грибами рода фузариум / О.К.
Еромолаева, Р.М. Потехина, Л.Е. Матросова, Э.И. Семенов // Ученые записки
Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.
Баумана. – 2019. – Т. 239, № 3. – С. 121-124.
15. Жданова, Н.Н. Трофические особенности штаммов Fusarium oxysporum
Schlecht. Fr., изолированных из почвы и зерновых культур / Н.Н. Жданова,
И.Н. Курченко, И.А. Элланская, Е.В. Соколова // Микология и фитопатология.
- 1997. - Т. 31. - Вып. 3. - С. 39-44.
16. Иванов, А.И. Влияние экологических факторов на пространственное
распределение напочвенных агарикомицетов (agaricomycetes) в пойменных
местообитаниях / А.И. Иванов, А.А. Ермолаева //Микология и фитопатология.
2021. Т. 55. № 4. С. 239-255.
17. Иващенко, В.Г. Биоэкологические и фитосанитарные аспекты
исследования фузариоза колоса / В.Г.Иващенко, Н.П. Шипилова, Л.Н.
Нефедова, Т.Ю. Гагкаева, Л.А. Назаровская, Л.Б. Хлопунов // Микология и
фитопатология. - 1997 а. — Т. 31. - Вып. 2. - С. 58-63.
18. Иващенко, В.Г. Видовой состав грибов рода Fusarium на злаках в
азиатской части России / В.Г. Иващенко, Н.П. Шипилова, М.М Левитин //
Микология и фитопатология. - 2000. -Т. 34. - Вып. 4. - С. 54-58.
19. Иващенко, В.Г. Фузариоз колоса хлебных злаков: монография / В.Г.
Иващенко, Н.П. Шипилова, Л.А. Назаровская // СПб, 2004.164 с.
20. Кислых, Т.И. Распространенность и видовой состав возбудителей фузарио-
за колоса зерновых культур в лесостепной зоне Украины// Микология и
фитопатология. - 2000. - Т. 34. - Вып. 1. - С. 42-47.
21. Кононенко, Г.П. Видовой состав и токсигенность возбудителей фузариоза
колоса всходов пшеницы в Московской области / Г.П. Коненко, Л.С.
Малиновская, Е.А. Пирязева, Н.А. Соболева // Микология и фитопатология. -
1998. - Вып. 4. - Т. 32. - С. 37-41.
22. Кононенко, Г.П. Распространенность и токсинообразующие свойства
грибов рода Fusarium, поражащих зерно хлебных злаков в Московской
области / Г.П. Кононенко, Л.С. Малиновская, Н.А. Соболев, Е.А. Пирязева,
Е.В. Зотова, О.И. Шалыганова // Микология и фитопатология. - 1999. - Т. 33.Вып. 2. - С. 118-123.
50
23. Кононенко, Г.П. Интенсивность токсинообразования Penicillium roqueforti,
P. brevicompactum, P. chrysogenum на зерновых субстратах / Г.П. Кононенко,
Е.А. Пирязева, А.А. Буркин //Микология и фитопатология. 2021. Т. 55. № 4.
С. 285-290.
24. Котик, А.Н. Обнаружение в пшенице нафтихинонового фузариотоксина –
аурофузарина / А.Н. Котик, В.А. Труфанова // Микология и фитопатология. -
1998. - Т. 32. - Вып. 6. -С. 58-61.
25. Левитин, М.М. Сравнительный анализ популяций Fusarium graminearum S
chwabe, выделенных с разных органов озимой пшениц / М.М. Левитин, Т.Ю.
Гагкаева // Микология и фитопатология. - 1991. - Т. 25. - Вып. 1. - С. 73-78.
26. Левитин, М.М., Возбудители фузариоза колоса зерновых культур и формы
проявления болезни на Северо-западе России / М.М. Левитин, В.Г. Иващенко,
Н.П. Шипилова // Микология и фитопатология. - 1994. - Т. 28. - Вып. 3. - С. 58-
64.
27. Леонов, А.Н. Особенности биосинтеза три-хотеценов у изолятов Fusarium
graminearum Schwabe на зерне /А.Н. Леонов, Г.П. Кононенко, Н.А. Соболева
// Микология и фитопатология. -1990 с. - Т. 24. -№ 6. - С. 551-557.
28. Леонов, А.Н. Токсиногенность изолятов Fusarium graminearum Schw. из
зерна фузариозной пшеницы в Краснодарском крае / А.Н.Леонов, Л.С.
Малиновская, Н.А. Соболева, Г.П. Кононенко // Доклады ВАСХНИЛ. - 1990
а. - № 11. - с. 21-26.
29. Львова, Л.С. Санитарно-гигиеническое состояние фузариозного зерна
пшеницы: его прием, хранение, переработка / Л.С. Львова, М.Д. Омельченко,
Н.Ю. Орлова, О.И. Кизленко, А.П. Шульгина, З.К. Быстрякова, Л.Г. Ересько
// Вестник с/х науки. - 1990. - № 10. — С. 68-73.
30. Львова, Л.С. Распространение и особенности образования зеараленона в
фузариозной пшенице / Л.С. Львова, М.Д. Омельченко, Н.Ю. Орлова, В.В.
Пименова, К.И. Эллер // Прикладная биохимия и микробиология. — 1992. -Т.
28. — Вып. — 2. - С. 261-268.
31. Львова, Л.С. Распространение токси-генных грибов и микотоксинов в
зерне разных культур / Л.С, Львова, Н.Ю. Орлова, З.К. Быстрякова и др. //
Прикл. биохимия и микробиология. - 1993. - Т. 29. - Вып. 1. - С. 70-79.
32.Матросова, Л. Е. Анализ токсичности кормов в отдельных регионах
российской федерации / Л.Е. Матросова, З.Х. Сагдеева, Е.Ю. Тарасова, Р.М.
Потехина, О.К. Ермолаева // Вестник Бурятской государственной
сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова. – 2020. – № 4(61). – С.
69-75.
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]