Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Отклик бактериальных культур на низкоинтенсивное электромагнитное поле крайне высоких частот. Монография
.pdf
21
Таблица 1.4
Изменение показателей процесса культивирования B. subtilis
под действием ЭМП КВЧ
Частота,
ГГц
Кол-во редуцир.
вещ-в (РВ)
в культур.
жидкости, г/л
Выход по РВ
(Y
X/S
),
г АСБ / г РВ
Кол-во
белка
в культур.
жидкости,
г/л
Продуктив-
ность по
белку,
г белка /г
АСБ
53,77
(стим.)
2,56±0,13
0,120±0,02
3,22±0,09
9,2±0,5
53,67
(инг.)
2,47±0,12
0,30±0,04
2,93±0,16
3,91±0,17
контроль
2,88±0,14
0,259±0,04
2,77±0,12
5,13±0,23
Примечание. В питательной среде концентрация РВ 5,04 г/л, концентрация белка 1,37 г/л.
При этом эффективность использования сахаров для роста, определяемая как выход по субстрату, выше по отношению к контролю на
16 % для культуры, подвергнутой обработке ЭМП на частоте 53,77 ГГц.
Эффективность потребления субстрата у бактерий, подвергнутых воздействию ЭМП на частоте 53,67 ГГц (ингибирующая), снизилась по
сравнению с контрольным уровнем практически в два раза. Следовательно, путем воздействия ЭМП определенной частоты можно регулировать изменение концентрации биомассы, а также эффективность ее
образования. Обращает на себя внимание тот факт, что переход к ингибирующей частоте приводит к более выраженному результату (уменьшение на 54 %), чем использование стимулирующей частоты (увеличение на 16 %). Это наблюдение позволяет предположить, что в контроле
условия культивирования Bacillus subtilis были близки к оптимальным.
Культура бактерий Bacillus subtilis используется в сельском хозяйстве для защиты растений. Один из механизмов биоцидного действия этих бактерий связан с выделением ими веществ полипептидной
природы. Анализ изменения концентрации белка в составе культуральной жидкости (табл. 1.4) показывает, что в процессе роста его содержание в культуральной жидкости нарастает для всех исследованных образцов. Однако при воздействии стимулирующей частотой экскреция
белка незначительно превышает контрольное значение, а при воздействии ингибирующей частотой концентрация белка заметно выше контроля. Учитывая, что при использовании стимулирующей и ингибирующей частоты изменяется и количество биомассы, представляло интерес также проанализировать изменения продуктивности культуры по

22
белку. Как можно видеть из представленных данных, обработка культуры на стимулирующей частоте 53,77 ГГц приводит к резкому повышению выделения белка микроорганизмами.
Для подтверждения положительного влияния ЭМП КВЧ на куль-
туру Bacillus subtilis были проведены опытно–промышленные испытания
модифицированного препарата для защиты растений совместно с
ЗАО «НПК Хасилат» в условиях полевого опыта. Модификация состояла
в обработке посевного материала бактериальной культуры ЭМП на стимулирующей частоте. Затем обработанная культура использовалась для приготовления препарата. Семена обрабатывались раствором модифицированного препарата за два дня до посева. Контрольные семена обрабатывались раствором стандартного препарата, приготовленного согласно технологическому регламенту. Результаты испытаний представлены в табл. 1.5.
Полученные результаты показали, что при использовании модифицированного препарата («Фитоспорин-2») происходит снижение пора-
женности болезнями всходов яровой пшеницы сорта «Лада» (мучнистой
росой и бурой листовой ржавчиной) как по сравнению с контролем, так и
по сравнению с вариантом обработки немодифицированным препаратом
«Фитоспорин». Следовательно, в условиях полевого опыта была продемонстрирована возможность повышения антагонистических характеристик биологического препарата в отношении возбудителей листовых
форм болезней путем его обработки ЭМП соответствующей частоты.
Таблица 1.5
Пораженность яровой пшеницы сорта «Лада» листовыми
формами болезней
Варианты опытов
Пораженность болезнями, %
Мучнистой росой
Бурой листовой
ржавчиной
Фаза кущения
Начало цветения
Фаза начала налива
зерна
%
Характер по-
ражен.
%
Характер
поражен.
%
Характер
поражен.
Контроль –
увлажнение водой, 10 л/т
28
Средняя
16
Слабая
5
Очень слабая
Фитоспорин-2 – 1 л/т
семян
22
Слабая
12
Слабая
4
Очень слабая
Фитоспорин-2 – 1 л/т
семян + 2х опрыскива-
ние посевов (5 л/га)
23
Слабая
14
Слабая
5
Очень слабая
Фитоспорин – 1 л/т се-
мян
24
Средняя
13
Слабая
5
Очень слабая

23
Следует отметить, что наблюдаются незначительные отличия результатов, полученных при однократной обработке семян и комбинированном применении препарата, включающего дополнительное опрыскивание посевов. Это позволяет сделать вывод о необходимости проведения лишь предпосевной обработки семян без повторных опрыскиваний, что значительно снижает трудовые и материальные затрата на проведение подобных операций.
Кроме того, препарат испытывался на овощных (огурцы, томаты)
и цветочных (гвоздики и каллы) культурах в условиях тепличного комбината «Декоративные культуры» (г. Казань).
Обработка растений производилась троекратно, процедура повторялась периодически через 10–15 дней. Нормы расхода препарата
составляли 0,5–1,0 л на 400 л воды. Полученный объем рабочего раствора использовали для однократного опрыскивания оранжереи площадью 1000 м2. Результаты испытаний показали, что препарат интенсивно снижает пораженность корневыми гнилями на огурцах, гвоздиках и каллах, а также задерживает развитие фитофтороза у томатов.
Известно, что каждая клетка обладает собственной частотой
электромагнитных колебаний [13, 15, 18–21]. Возможно, при определенных частотах воздействия происходит наложение их на собственные
частоты микробной клетки, что и приводит к явлению резонанса. Основываясь на мнении Н. Д. Девяткова и М. Б. Голанта, что ЭМП КВЧ являются формой передачи информации для клетки [22–24], можно ожидать в условиях резонанса стабилизации или усиления степени скоординированности функционирования систем клетки. Это, в свою очередь, приводит к более эффективному ее росту. По результатам проведенных экспериментов такой частотой для культуры Bacillus subtilis
ВНИИСХМ 128 является частота 53,77 ГГц.
Вместе с тем наложение чужеродных частотных характеристик
может привести к изменению распределения собственных частот
клетки, в результате чего эффективность роста резко падает. Это положение подтверждается данными о росте бактерий, обработанных ЭМП
с частотой 53,67 ГГц. Кроме того, проведенные опытно-промышленные
испытания модифицированного препарата «Фитоспорин» на разных
сельскохозяйственных культурах показали его высокую эффективность
в отношении ряда заболеваний, имеющих бактериальную и грибную
природу.

24
1 . 3 . В о з д е й с т в и е н и з к о и н т е н с и в н о г о
э л е к т р о м а г н и т н о г о п о л я К В Ч - д и а п а з о н а н а п р о ц е с c
с к в а ш и в а н и я к а п у с т н о г о с о к а
Капустный сок представляет из себя пример глубокой переработки сельскохозяйственного сырья (капусты) и получения ценного
продукта лечебно-профилактического назначения. Капустный сок рекомендуется как дополнительное средство в комплексной терапии заболеваний желудочно-кишечного тракта, заболеваний обмена веществ
и др. [25, 26]. Крайне важны антиоксидантные свойства белокочанной
капусты, предотвращающие возникновение и развитие таких болезней
как нарушение кровообращения, ИБС, эмфизема легких, воспалительные процессы и многие другие [25, 27]. В связи с этим при характеристике капустного сока большое внимание уделяется его антиоксидантной активности (АОА).
Длительное хранение капустного сока невозможно. Уже через несколько часов резко снижаются его биологические свойства, начинает активно развиваться сопутствующая микрофлора. Перспективным методом
сохранения капустного сока является его ферментирование молочнокислыми бактериями. Выделяющаяся при этом молочная кислота не только
способствует ограничению развития посторонней, а зачастую и болезнетворной микрофлоры, но также положительно влияет на процессы пищеварения. Ранее было показано, что ферментирование капустного сока
предпочтительнее вести с использованием молочнокислых бактерий Lac-
tobacillus plantarum [28]. Химический состав капустного сока обеспечивает активное развитие этой культуры. Кроме того, доказано, что эта
культура обладает пробиотическими свойствами [29, 30]. В настоящее
время разработана принципиальная схема получения ферментированного
капустного сока. Вместе с тем ряд авторов отмечают, что в процессе ферментации может происходить снижение АОА [31]. В связи с этим особую
важность приобретают вопросы повышения биологической активности
капустного сока в процессе сквашивания. В литературе имеются данные
о стимуляции роста молочнокислых бактерий при сквашивании капустного сока путем воздействия постоянного электрического поля [32]. В последнее время активно разрабатываются теоретические и практические
аспекты применения переменного электромагнитного поля крайне высокой частоты (ЭМП КВЧ). Показано положительное воздействие такого
поля на биологические объекты разного уровня организации, в том числе

25
и на микроорганизмы [33]. Следует напомнить, что ЭМП КВЧ обладает
низкой интенсивностью, экологично, не вызывает мутагенных эффектов
[34]. В связи с этим целью работы являлось исследование влияния ЭМП
КВЧ на процесс ферментирования капустного сока при контроле его антиоксидантной активности.
С целью создания благоприятных условий для роста молочнокислых бактерий в процессе ферментации капустный сок предварительно
подвергали стерилизации ультрафиолетовым излучением с плотностью
потока 7 мВт/см2 в течение 30 мин. Ферментацию вели с использованием
молочнокислых бактерий Lactobacillus plantarum 8P–A3, представляю-
щих собой микробную массу живых, антагонистически активных лактобактерий, лиофилизированных в среде культивирования с добавлением
защитной сахарозо-желатино-молочной среды. Для приготовления закваски препарат разбавляли стерильным физиологическим раствором таким образом, чтобы концентрация молочнокислых бактерий составляла
не менее 108 КОЕ/ мл. Закваску добавляли в количестве 1,25 % от объема
капустного сока. Культивирование вели при температуре 30 °С в течение
24 ч. Микробиологический анализ и определение концентрации биомассы КОЕ/мл проводили путем высевов на питательную среду КМАФАнМ. Титруемую кислотность определяли стандартным методом.
В основе КВЧ технологий лежат результаты исследований, показывающие, что в КВЧ диапазоне существует несколько фиксированных
частот, резонирующих при низкой интенсивности сигнала с отдельными органами и системами организма. Среди них особое место занимают такие частоты, как 60,4 и 61,22 ГГц [13, 34]. Поэтому при проведении исследований нами были использованы именно эти частоты. Дополнительно исследовали влияние частоты 60,2 ГГц, которая по ранее
полученным литературным данным не оказывала влияния на функционирование бациллярных систем. В контрольном варианте инокулят облучению не подвергали.
Таблица 1.6
Влияние ЭМО на показатели роста бактерий Lactobacillus
plantarum (закваска в состоянии анабиоза)
Частота, ГГц
КОЕ/мл
Титруемая кислотность, мл
61,22
4,2±0,2×108
40±0,1
60,2
9,1±0,5×106
32±0,3
60,4
8,5±0,7×107
34±0,1
контроль
5,8±0,2×106
25±0,2

26
Из данных табл. 1.6 можно видеть, что обработка ЭМП КВЧ положительно влияет на состояние популяции молочнокислых бактерий
во всех исследуемых образцах. Наиболее интенсивный рост наблюдается при электромагнитной обработке культуры при 61,22 ГГц. Величина КОЕ возросла в этом случае с 6±0,3×106 до 25±0,4×1010. В меньшей степени действие ЭМП КВЧ проявилось при действии частоты
60,2 ГГц. В этом случае количество КОЕ увеличилось лишь в 1,5 раза.
Другим важным показателем, характеризующим культуру молочнокислых бактерий, является выделение молочной кислоты – основного метаболита, о накоплении которой можно судить по изменению кислотности. Обработка инокулята ЭМП КВЧ всех исследованных частот вызывает рост этого показателя. Максимальное повышение кислотности
наблюдается при воздействии ЭМП с частотой 61,22 ГГц. В этом случае титруемая кислотность превышает кислотность контроля на 60 %.
Микроорганизмы вносят большой вклад в формирование биологической ценности сквашенного капустного сока. Как видно из рис. 1.11,
действие частоты 61,22 ГГц приводит также к значительному повышению АОА, которая составила 209 мг рутина/100 мл. Это на 34,8 %
больше, чем в исходном стерилизованном соке. Повышение антирадикальной активности сброженного капустного сока наблюдали и другие
исследователи, однако не столь значительные [35]. Действие других частот (60,2 и 60,4 ГГц) привело к снижению этого показателя по сравнению
с контролем. Следует отметить, что АОА стерильного сока, не подвергавшегося сквашиванию, за то же время снизилась на 12,2 %.
Рис. 1.11. Изменение АОА в зависимости от частоты ЭМО;
к – к – контрольный уровень

27
Можно предположить, что в формирование высокого уровня антиоксидантного статуса ферментированного капустного сока превалирующий вклад вносят, помимо витамина С, и другие соединения, обладающие антиоксидантными свойствами [36–38].
Известно, что стрептобактерии, к которым относится Lactobacil-
lus plantarum, обладают высокой протеолитической активностью и значительно повышают содержание свободных аминокислот в среде культивирования [30]. Вместе с тем доказано, что многие аминокислоты,
особенно серосодержащие, могут выступать в качестве антиоксидантов
[36, 38]. Во-вторых, сами микроорганизмы, имея мощные окислительно-восстановительные ферментные системы, могут также оказывать сильное влияние на АОА ферментированного продукта. Кроме
того, известно, что молочнокислые бактерии выделяют витамины
группы В и РР, которые также могут выступать в качестве антиоксидантов. Таким образом, повышение АОА капустного сока при ферментации
является функцией активности молочнокислых бактерий, а не определяется только его исходным антиоксидантным статусом.
Предполагается, что низкоинтенсивное электромагнитное поле
миллиметрового диапазона длин волн может оказывать влияние на активность ферментных систем. Вместе с тем ферментативная активность
организма также может меняться в зависимости от физиологического
состояния микробной культуры. В связи с этим нами было исследовано
влияние действия ЭМП КВЧ на активизированную закваску. Для этого
перед электромагнитной обработкой культура предварительно выдерживалась в термостате при 30 °С в течение 60 мин. При этом активизировались все жизненные процессы и бактерии проходили ЭМО в состоянии активного роста (табл. 1.7).
Таблица 1.7
Влияние ЭМО на показатели роста бактерий Lactobacillus
plantarum (активированная закваска)
Образец
КОЕ/мл
Титруемая кислот-
ность, мл
АОА,
мг рутина /100 мл
61,22 Ггц
2,5±0,4×1011
58±0,3
222,6±0,4
контроль
6±0,3×106
51±0,4
168,5 ±0,3 8,7
Такой подход позволил еще больше увеличить производство биомассы и молочной кислоты. Обращает на себя внимание тот факт, что
обработка активированного инокулята привела к значительному

28
повышению концентрации лактобацилл. Уровень АОА вырос на
46,3 %. Несомненным положительным качеством такой подготовки за-
кваски (активирование + ЭМО) является снижение времени ферментации с 24 до 17,5 ч за счет более быстрого нарастания кислотности. Органолептический анализ ферментированного напитка на основе капустного сока, полученного с использованием обработанных молочнокислых бактерий, показал его высокие вкусовые качества. Напиток имеет
однородную консистенцию, обладает приятным кисловатымвкусом.
Анализ представленных данных позволяет сделать вывод о том,
что оптимальной частотой для развития молочнокислых бактерий является 61,22 ГГц. При действии этой частоты наблюдается резкое повышение количества микробных клеток, сопровождающееся значительным выделением молочной кислоты и повышением уровня АОА. Большое значение имеет и подготовка инокулята. Активизированная культура является более чувствительной к действию ЭМП. Можно предположить, что усиление метаболизма приводит к экскреции низко- и высокомолекулярных веществ, обладающих антиокислительной активностью (помимо аскорбиновой кислоты), что, наряду с ростом микробных
клеток при действии ЭМП КВЧ, вызывает значительный прирост АОА
по сравнению с контролем. Получаемый продукт можно отнести к
группе продуктов лечебно-профилактического направления с выраженными антиоксидантными и детоксицирующими свойствами, обладающего длительным сроком хранения.
1 . 4 . В л и я н и е э л е к т р о м а г н и т н о й о б р а б о т к и
на с и н т е з э к з о п о л и с а х а р и д а к с а н т а н а
м и к р о б и о л о г и ч е с к и м п у т е м
Одним из наиболее известных микробных экзополисахаридов
(ЭПС), используемых в технических целях, является ксантан. Он выделяется при культивировании бактерий Xanthomonas campestris. Благодаря уникальным реологическим свойствам ЭПС находит широкое
применение в различных отраслях промышленности. Химическое стро-
ение ксантана обусловливает его хорошую растворимость как в холодной, так и в горячей воде и сообщает его растворам уникальные

29
свойства – высокую вязкость при предельно низкой концентрации.
В настоящее время микробные полисахариды применяются в медицине, фармацевтической, пищевой, химической промышленности, в
гидрометаллургии, а также в нефтедобыче [39].
Возрастающие потребности промышленности в ксантане диктуют
необходимость стимулирования процессов его получения. В последнее
время в качестве одного из перспективных методов интенсификации
микробного метаболизма рассматривается низкоинтенсивное электромагнитное поле миллиметрового диапазона [13, 15]. Показано его положительное влияние на рост и синтез метаболитов разных микробных
культур. Существенным достоинством этого метода воздействия является высокая эффективность при незначительных экономических затратах. Кроме того, следует отметить экологичность данного метода – практически полное отсутствие вредных влияний на окружающую среду. Ранее рядом авторов было также показано отсутствие мутагенного эффекта от воздействия миллиметровых волн на микробные культуры и
теплокровных животных [33]. В этой связи и было проведено исследование влияния электромагнитного поля миллиметрового диапазона на
рост биомассы бактерий Xanthomonas campestris и синтез ими ксантана.
Объектом исследования являлся продуцент экзополисахаридаксантана
штамм бактерии Xanthomonas campestris ВКМ В–611. Ее выращивание
осуществляли в условиях fed-batch аэробного культивирования (периодического культивирования с подпиткой) при 24–26 °С. Подпитку в виде
5 % об. раствора углеводов вносили после 72 ч ферментации и продолжали выращивание еще 24 ч. Культивирование вели на синтетической
среде состава (г/л): глюкоза – 50, К2НРО4 – 5.0, (NH4)2SO4 – 3.0, лимонная кислота – 2.0, H3BO3 – 0.006, ZnO – 0.006, FeCl3·6H2O – 0.0024,
CaCO3 – 0.02 [40]. Концентрацию биомассы определяли нефелометрическим и весовым методом. Кинематическую вязкость культуральной
жидкостианализировали с использованием капиллярного вискозиметра
ВПЖ–2. Выделение ксантана проводили по методике, описанной в [41].
Ранее рядом авторов была показана возможность стимулирования физиологических процессов в организмах различного уровня организации частотой 61,22 ГГц [13, 34]. Эта частота получила название те-
рапевтической. В связи с этим нами была исследована возможность изменения метаболической активности культуры Xanthomonas campestris
путем ее электромагнитной обработки на частотах, близких к терапевтической частоте. Экспериментальные данные представлены на
рис. 1.12.

30
Рис. 1.12. Изменение концентрации биомассы Xanthomonas campestris
и вязкости культуральной жидкости в зависимости
от длительности ее электромагнитной обработки на частоте
61,22 ГГц
Как можно видеть из рисунка, воздействие электромагнитного
поля частотой 61,22 ГГц вызвало ингибирующий эффект как в отношении концентрации биомассы, так и в отношении вязкости культуральной жидкости Xanthomonas campestris. Причем возрастание длительности обработки практически не оказывало влияния на полученный результат.
Следует отметить, что, несмотря на то, что в большинстве случаев при воздействии данной частотой наблюдается положительный
эффект, в ряде экспериментов он не был достигнут. Предполагается,
что это связано с особенностями строения и функционирования отдельных биологических объектов [13, 34]. Анализ литературных данных
позволил нам сделать предположение, что большинство таких отклонений характерно для микроорганизмов, осуществляющих биосинтез экзометаболитов по дисконкордантному типу. Такой тип метаболизма
характерен также и для Xanthomonas campestris. Таким образом, полученные нами данные не противоречат общей тенденции.
Как показывают полученные результаты (рис. 1.13), обработка с
близкими к 61,22 ГГц частотами (60,4 и 61,4 ГГц) приводит к повышению концентрации биомассы Xanthomonas campestris в 1,7 и 1,14 раза
соответственно. Симбатно этому показателю растут значения кинематической вязкости. Однако их рост не столь существенен. Так, при обработке частотой 60,4 ГГц наблюдается рост вязкости в 1,3 раза, а при
61,4 ГГц – в 1,12 раза.
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
