Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Отклик бактериальных культур на низкоинтенсивное электромагнитное поле крайне высоких частот. Монография

.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
07.09.2026
Размер:
2 Мб
Скачать
21
Таблица 1.4
Изменение показателей процесса культивирования B. subtilis
под действием ЭМП КВЧ
Частота,
ГГц
Кол-во редуцир.
вещ-в (РВ)
в культур.
жидкости, г/л
Выход по РВ
(Y
X/S
),
г АСБ / г РВ
Кол-во
белка
в культур. жидкости,
г/л
Продуктив-
ность по
белку,
г белка /г
АСБ
53,77
(стим.)
2,56±0,13
0,120±0,02
3,22±0,09
9,2±0,5
53,67
(инг.)
2,47±0,12
0,30±0,04
2,93±0,16
3,91±0,17
контроль
2,88±0,14
0,259±0,04
2,77±0,12
5,13±0,23
Примечание. В питательной среде концентрация РВ 5,04 г/л, концентрация белка 1,37 г/л.
При этом эффективность использования сахаров для роста, опре­деляемая как выход по субстрату, выше по отношению к контролю на 16 % для культуры, подвергнутой обработке ЭМП на частоте 53,77 ГГц. Эффективность потребления субстрата у бактерий, подвергнутых воз­действию ЭМП на частоте 53,67 ГГц (ингибирующая), снизилась по сравнению с контрольным уровнем практически в два раза. Следова­тельно, путем воздействия ЭМП определенной частоты можно регули­ровать изменение концентрации биомассы, а также эффективность ее образования. Обращает на себя внимание тот факт, что переход к инги­бирующей частоте приводит к более выраженному результату (умень­шение на 54 %), чем использование стимулирующей частоты (увеличе­ние на 16 %). Это наблюдение позволяет предположить, что в контроле условия культивирования Bacillus subtilis были близки к оптимальным.
Культура бактерий Bacillus subtilis используется в сельском хо­зяйстве для защиты растений. Один из механизмов биоцидного дей­ствия этих бактерий связан с выделением ими веществ полипептидной природы. Анализ изменения концентрации белка в составе культураль­ной жидкости (табл. 1.4) показывает, что в процессе роста его содержа­ние в культуральной жидкости нарастает для всех исследованных об­разцов. Однако при воздействии стимулирующей частотой экскреция белка незначительно превышает контрольное значение, а при воздей­ствии ингибирующей частотой концентрация белка заметно выше кон­троля. Учитывая, что при использовании стимулирующей и ингибиру­ющей частоты изменяется и количество биомассы, представляло инте­рес также проанализировать изменения продуктивности культуры по
22
белку. Как можно видеть из представленных данных, обработка куль­туры на стимулирующей частоте 53,77 ГГц приводит к резкому повы­шению выделения белка микроорганизмами.
Для подтверждения положительного влияния ЭМП КВЧ на куль-
туру Bacillus subtilis были проведены опытно–промышленные испытания модифицированного препарата для защиты растений совместно с ЗАО «НПК Хасилат» в условиях полевого опыта. Модификация состояла в обработке посевного материала бактериальной культуры ЭМП на стиму­лирующей частоте. Затем обработанная культура использовалась для при­готовления препарата. Семена обрабатывались раствором модифициро­ванного препарата за два дня до посева. Контрольные семена обрабатыва­лись раствором стандартного препарата, приготовленного согласно техно­логическому регламенту. Результаты испытаний представлены в табл. 1.5.
Полученные результаты показали, что при использовании модифи­цированного препарата («Фитоспорин-2») происходит снижение пора- женности болезнями всходов яровой пшеницы сорта «Лада» (мучнистой росой и бурой листовой ржавчиной) как по сравнению с контролем, так и по сравнению с вариантом обработки немодифицированным препаратом «Фитоспорин». Следовательно, в условиях полевого опыта была проде­монстрирована возможность повышения антагонистических характери­стик биологического препарата в отношении возбудителей листовых форм болезней путем его обработки ЭМП соответствующей частоты.
Таблица 1.5
Пораженность яровой пшеницы сорта «Лада» листовыми
формами болезней
Варианты опытов
Пораженность болезнями, %
Мучнистой росой
Бурой листовой
ржавчиной
Фаза кущения
Начало цветения
Фаза начала налива
зерна
%
Характер по-
ражен.
%
Характер
поражен.
%
Характер поражен.
Контроль –
увлажнение водой, 10 л/т
28
Средняя
16
Слабая
5
Очень слабая
Фитоспорин-2 1 л/т
семян
22
Слабая
12
Слабая
4
Очень слабая
Фитоспорин-2 1 л/т
семян + 2х опрыскива-
ние посевов (5 л/га)
23
Слабая
14
Слабая
5
Очень слабая
Фитоспорин – 1 л/т се-
мян
24
Средняя
13
Слабая
5
Очень слабая
23
Следует отметить, что наблюдаются незначительные отличия ре­зультатов, полученных при однократной обработке семян и комбиниро­ванном применении препарата, включающего дополнительное опрыс­кивание посевов. Это позволяет сделать вывод о необходимости прове­дения лишь предпосевной обработки семян без повторных опрыскива­ний, что значительно снижает трудовые и материальные затрата на про­ведение подобных операций.
Кроме того, препарат испытывался на овощных (огурцы, томаты)
и цветочных (гвоздики и каллы) культурах в условиях тепличного ком­бината «Декоративные культуры» (г. Казань).
Обработка растений производилась троекратно, процедура по­вторялась периодически через 10–15 дней. Нормы расхода препарата составляли 0,5–1,0 л на 400 л воды. Полученный объем рабочего рас­твора использовали для однократного опрыскивания оранжереи пло­щадью 1000 м2. Результаты испытаний показали, что препарат интен­сивно снижает пораженность корневыми гнилями на огурцах, гвозди­ках и каллах, а также задерживает развитие фитофтороза у томатов.
Известно, что каждая клетка обладает собственной частотой электромагнитных колебаний [13, 15, 18–21]. Возможно, при опреде­ленных частотах воздействия происходит наложение их на собственные частоты микробной клетки, что и приводит к явлению резонанса. Осно­вываясь на мнении Н. Д. Девяткова и М. Б. Голанта, что ЭМП КВЧ яв­ляются формой передачи информации для клетки [22–24], можно ожи­дать в условиях резонанса стабилизации или усиления степени скоор­динированности функционирования систем клетки. Это, в свою оче­редь, приводит к более эффективному ее росту. По результатам прове­денных экспериментов такой частотой для культуры Bacillus subtilis ВНИИСХМ 128 является частота 53,77 ГГц.
Вместе с тем наложение чужеродных частотных характеристик может привести к изменению распределения собственных частот клетки, в результате чего эффективность роста резко падает. Это поло­жение подтверждается данными о росте бактерий, обработанных ЭМП с частотой 53,67 ГГц. Кроме того, проведенные опытно-промышленные испытания модифицированного препарата «Фитоспорин» на разных сельскохозяйственных культурах показали его высокую эффективность в отношении ряда заболеваний, имеющих бактериальную и грибную природу.
24
1 . 3 . В о з д е й с т в и е н и з к о и н т е н с и в н о г о
э л е к т р о м а г н и т н о г о п о л я К В Ч - д и а п а з о н а н а п р о ц е с c
с к в а ш и в а н и я к а п у с т н о г о с о к а
Капустный сок представляет из себя пример глубокой перера­ботки сельскохозяйственного сырья (капусты) и получения ценного продукта лечебно-профилактического назначения. Капустный сок ре­комендуется как дополнительное средство в комплексной терапии за­болеваний желудочно-кишечного тракта, заболеваний обмена веществ и др. [25, 26]. Крайне важны антиоксидантные свойства белокочанной капусты, предотвращающие возникновение и развитие таких болезней как нарушение кровообращения, ИБС, эмфизема легких, воспалитель­ные процессы и многие другие [25, 27]. В связи с этим при характери­стике капустного сока большое внимание уделяется его антиоксидант­ной активности (АОА).
Длительное хранение капустного сока невозможно. Уже через не­сколько часов резко снижаются его биологические свойства, начинает ак­тивно развиваться сопутствующая микрофлора. Перспективным методом сохранения капустного сока является его ферментирование молочнокис­лыми бактериями. Выделяющаяся при этом молочная кислота не только способствует ограничению развития посторонней, а зачастую и болезне­творной микрофлоры, но также положительно влияет на процессы пище­варения. Ранее было показано, что ферментирование капустного сока предпочтительнее вести с использованием молочнокислых бактерий Lac- tobacillus plantarum [28]. Химический состав капустного сока обеспечи­вает активное развитие этой культуры. Кроме того, доказано, что эта культура обладает пробиотическими свойствами [29, 30]. В настоящее время разработана принципиальная схема получения ферментированного капустного сока. Вместе с тем ряд авторов отмечают, что в процессе фер­ментации может происходить снижение АОА [31]. В связи с этим особую важность приобретают вопросы повышения биологической активности капустного сока в процессе сквашивания. В литературе имеются данные о стимуляции роста молочнокислых бактерий при сквашивании капуст­ного сока путем воздействия постоянного электрического поля [32]. В по­следнее время активно разрабатываются теоретические и практические аспекты применения переменного электромагнитного поля крайне высо­кой частоты (ЭМП КВЧ). Показано положительное воздействие такого поля на биологические объекты разного уровня организации, в том числе
25
и на микроорганизмы [33]. Следует напомнить, что ЭМП КВЧ обладает низкой интенсивностью, экологично, не вызывает мутагенных эффектов [34]. В связи с этим целью работы являлось исследование влияния ЭМП КВЧ на процесс ферментирования капустного сока при контроле его ан­тиоксидантной активности.
С целью создания благоприятных условий для роста молочнокис­лых бактерий в процессе ферментации капустный сок предварительно подвергали стерилизации ультрафиолетовым излучением с плотностью потока 7 мВт/см2 в течение 30 мин. Ферментацию вели с использованием молочнокислых бактерий Lactobacillus plantarum 8P–A3, представляю- щих собой микробную массу живых, антагонистически активных лакто­бактерий, лиофилизированных в среде культивирования с добавлением защитной сахарозо-желатино-молочной среды. Для приготовления за­кваски препарат разбавляли стерильным физиологическим раствором та­ким образом, чтобы концентрация молочнокислых бактерий составляла не менее 108 КОЕ/ мл. Закваску добавляли в количестве 1,25 % от объема капустного сока. Культивирование вели при температуре 30 °С в течение 24 ч. Микробиологический анализ и определение концентрации био­массы КОЕ/мл проводили путем высевов на питательную среду КМА­ФАнМ. Титруемую кислотность определяли стандартным методом.
В основе КВЧ технологий лежат результаты исследований, пока­зывающие, что в КВЧ диапазоне существует несколько фиксированных частот, резонирующих при низкой интенсивности сигнала с отдель­ными органами и системами организма. Среди них особое место зани­мают такие частоты, как 60,4 и 61,22 ГГц [13, 34]. Поэтому при прове­дении исследований нами были использованы именно эти частоты. До­полнительно исследовали влияние частоты 60,2 ГГц, которая по ранее полученным литературным данным не оказывала влияния на функцио­нирование бациллярных систем. В контрольном варианте инокулят об­лучению не подвергали.
Таблица 1.6
Влияние ЭМО на показатели роста бактерий Lactobacillus
plantarum (закваска в состоянии анабиоза)
Частота, ГГц
КОЕ/мл
Титруемая кислотность, мл
61,22
4,2±0,2×108
40±0,1
60,2
9,1±0,5×106
32±0,3
60,4
8,5±0,7×107
34±0,1
контроль
5,8±0,2×106
25±0,2
26
Из данных табл. 1.6 можно видеть, что обработка ЭМП КВЧ по­ложительно влияет на состояние популяции молочнокислых бактерий во всех исследуемых образцах. Наиболее интенсивный рост наблюда­ется при электромагнитной обработке культуры при 61,22 ГГц. Вели­чина КОЕ возросла в этом случае с 6±0,3×106 до 25±0,4×1010. В мень­шей степени действие ЭМП КВЧ проявилось при действии частоты 60,2 ГГц. В этом случае количество КОЕ увеличилось лишь в 1,5 раза. Другим важным показателем, характеризующим культуру молочнокис­лых бактерий, является выделение молочной кислоты – основного ме­таболита, о накоплении которой можно судить по изменению кислот­ности. Обработка инокулята ЭМП КВЧ всех исследованных частот вы­зывает рост этого показателя. Максимальное повышение кислотности наблюдается при воздействии ЭМП с частотой 61,22 ГГц. В этом слу­чае титруемая кислотность превышает кислотность контроля на 60 %.
Микроорганизмы вносят большой вклад в формирование биологи­ческой ценности сквашенного капустного сока. Как видно из рис. 1.11, действие частоты 61,22 ГГц приводит также к значительному повыше­нию АОА, которая составила 209 мг рутина/100 мл. Это на 34,8 % больше, чем в исходном стерилизованном соке. Повышение антиради­кальной активности сброженного капустного сока наблюдали и другие исследователи, однако не столь значительные [35]. Действие других ча­стот (60,2 и 60,4 ГГц) привело к снижению этого показателя по сравнению с контролем. Следует отметить, что АОА стерильного сока, не подвергав­шегося сквашиванию, за то же время снизилась на 12,2 %.
Рис. 1.11. Изменение АОА в зависимости от частоты ЭМО;
к – к – контрольный уровень
27
Можно предположить, что в формирование высокого уровня ан­тиоксидантного статуса ферментированного капустного сока превали­рующий вклад вносят, помимо витамина С, и другие соединения, обла­дающие антиоксидантными свойствами [36–38].
Известно, что стрептобактерии, к которым относится Lactobacil- lus plantarum, обладают высокой протеолитической активностью и зна­чительно повышают содержание свободных аминокислот в среде куль­тивирования [30]. Вместе с тем доказано, что многие аминокислоты, особенно серосодержащие, могут выступать в качестве антиоксидантов [36, 38]. Во-вторых, сами микроорганизмы, имея мощные окисли­тельно-восстановительные ферментные системы, могут также оказы­вать сильное влияние на АОА ферментированного продукта. Кроме того, известно, что молочнокислые бактерии выделяют витамины группы В и РР, которые также могут выступать в качестве антиоксидан­тов. Таким образом, повышение АОА капустного сока при ферментации является функцией активности молочнокислых бактерий, а не определя­ется только его исходным антиоксидантным статусом.
Предполагается, что низкоинтенсивное электромагнитное поле миллиметрового диапазона длин волн может оказывать влияние на ак­тивность ферментных систем. Вместе с тем ферментативная активность организма также может меняться в зависимости от физиологического состояния микробной культуры. В связи с этим нами было исследовано влияние действия ЭМП КВЧ на активизированную закваску. Для этого перед электромагнитной обработкой культура предварительно выдер­живалась в термостате при 30 °С в течение 60 мин. При этом активизи­ровались все жизненные процессы и бактерии проходили ЭМО в состо­янии активного роста (табл. 1.7).
Таблица 1.7
Влияние ЭМО на показатели роста бактерий Lactobacillus
plantarum (активированная закваска)
Образец
КОЕ/мл
Титруемая кислот-
ность, мл
АОА,
мг рутина /100 мл
61,22 Ггц
2,5±0,4×1011
58±0,3
222,6±0,4
контроль
6±0,3×106
51±0,4
168,5 ±0,3 8,7
Такой подход позволил еще больше увеличить производство био­массы и молочной кислоты. Обращает на себя внимание тот факт, что обработка активированного инокулята привела к значительному
28
повышению концентрации лактобацилл. Уровень АОА вырос на 46,3 %. Несомненным положительным качеством такой подготовки за-
кваски (активирование + ЭМО) является снижение времени фермента­ции с 24 до 17,5 ч за счет более быстрого нарастания кислотности. Ор­ганолептический анализ ферментированного напитка на основе капуст­ного сока, полученного с использованием обработанных молочнокис­лых бактерий, показал его высокие вкусовые качества. Напиток имеет однородную консистенцию, обладает приятным кисловатымвкусом.
Анализ представленных данных позволяет сделать вывод о том, что оптимальной частотой для развития молочнокислых бактерий явля­ется 61,22 ГГц. При действии этой частоты наблюдается резкое повы­шение количества микробных клеток, сопровождающееся значитель­ным выделением молочной кислоты и повышением уровня АОА. Боль­шое значение имеет и подготовка инокулята. Активизированная куль­тура является более чувствительной к действию ЭМП. Можно предпо­ложить, что усиление метаболизма приводит к экскреции низко- и вы­сокомолекулярных веществ, обладающих антиокислительной активно­стью (помимо аскорбиновой кислоты), что, наряду с ростом микробных клеток при действии ЭМП КВЧ, вызывает значительный прирост АОА по сравнению с контролем. Получаемый продукт можно отнести к группе продуктов лечебно-профилактического направления с выражен­ными антиоксидантными и детоксицирующими свойствами, обладаю­щего длительным сроком хранения.
1 . 4 . В л и я н и е э л е к т р о м а г н и т н о й о б р а б о т к и
на с и н т е з э к з о п о л и с а х а р и д а к с а н т а н а
м и к р о б и о л о г и ч е с к и м п у т е м
Одним из наиболее известных микробных экзополисахаридов (ЭПС), используемых в технических целях, является ксантан. Он выде­ляется при культивировании бактерий Xanthomonas campestris. Благо­даря уникальным реологическим свойствам ЭПС находит широкое применение в различных отраслях промышленности. Химическое стро- ение ксантана обусловливает его хорошую растворимость как в холод­ной, так и в горячей воде и сообщает его растворам уникальные
29
свойства – высокую вязкость при предельно низкой концентрации. В настоящее время микробные полисахариды применяются в меди­цине, фармацевтической, пищевой, химической промышленности, в гидрометаллургии, а также в нефтедобыче [39].
Возрастающие потребности промышленности в ксантане диктуют необходимость стимулирования процессов его получения. В последнее время в качестве одного из перспективных методов интенсификации микробного метаболизма рассматривается низкоинтенсивное электро­магнитное поле миллиметрового диапазона [13, 15]. Показано его поло­жительное влияние на рост и синтез метаболитов разных микробных культур. Существенным достоинством этого метода воздействия явля­ется высокая эффективность при незначительных экономических затра­тах. Кроме того, следует отметить экологичность данного метода – прак­тически полное отсутствие вредных влияний на окружающую среду. Ра­нее рядом авторов было также показано отсутствие мутагенного эф­фекта от воздействия миллиметровых волн на микробные культуры и теплокровных животных [33]. В этой связи и было проведено исследо­вание влияния электромагнитного поля миллиметрового диапазона на рост биомассы бактерий Xanthomonas campestris и синтез ими ксантана. Объектом исследования являлся продуцент экзополисахаридаксантана штамм бактерии Xanthomonas campestris ВКМ В–611. Ее выращивание осуществляли в условиях fed-batch аэробного культивирования (перио­дического культивирования с подпиткой) при 24–26 °С. Подпитку в виде 5 % об. раствора углеводов вносили после 72 ч ферментации и продол­жали выращивание еще 24 ч. Культивирование вели на синтетической среде состава (г/л): глюкоза – 50, К2НРО4 – 5.0, (NH4)2SO4 – 3.0, лимон­ная кислота – 2.0, H3BO3 – 0.006, ZnO – 0.006, FeCl3·6H2O – 0.0024, CaCO3 – 0.02 [40]. Концентрацию биомассы определяли нефелометриче­ским и весовым методом. Кинематическую вязкость культуральной жидкостианализировали с использованием капиллярного вискозиметра ВПЖ–2. Выделение ксантана проводили по методике, описанной в [41].
Ранее рядом авторов была показана возможность стимулирова­ния физиологических процессов в организмах различного уровня орга­низации частотой 61,22 ГГц [13, 34]. Эта частота получила название те- рапевтической. В связи с этим нами была исследована возможность из­менения метаболической активности культуры Xanthomonas campestris путем ее электромагнитной обработки на частотах, близких к терапев­тической частоте. Экспериментальные данные представлены на рис. 1.12.
30
Рис. 1.12. Изменение концентрации биомассы Xanthomonas campestris
и вязкости культуральной жидкости в зависимости
от длительности ее электромагнитной обработки на частоте
61,22 ГГц
Как можно видеть из рисунка, воздействие электромагнитного поля частотой 61,22 ГГц вызвало ингибирующий эффект как в отно­шении концентрации биомассы, так и в отношении вязкости культу­ральной жидкости Xanthomonas campestris. Причем возрастание дли­тельности обработки практически не оказывало влияния на получен­ный результат.
Следует отметить, что, несмотря на то, что в большинстве слу­чаев при воздействии данной частотой наблюдается положительный эффект, в ряде экспериментов он не был достигнут. Предполагается, что это связано с особенностями строения и функционирования отдель­ных биологических объектов [13, 34]. Анализ литературных данных позволил нам сделать предположение, что большинство таких отклоне­ний характерно для микроорганизмов, осуществляющих биосинтез эк­зометаболитов по дисконкордантному типу. Такой тип метаболизма характерен также и для Xanthomonas campestris. Таким образом, полу­ченные нами данные не противоречат общей тенденции.
Как показывают полученные результаты (рис. 1.13), обработка с близкими к 61,22 ГГц частотами (60,4 и 61,4 ГГц) приводит к повыше­нию концентрации биомассы Xanthomonas campestris в 1,7 и 1,14 раза соответственно. Симбатно этому показателю растут значения кинема­тической вязкости. Однако их рост не столь существенен. Так, при об­работке частотой 60,4 ГГц наблюдается рост вязкости в 1,3 раза, а при 61,4 ГГц – в 1,12 раза.
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]