Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Острая лучевая болезнь сельскохозяйственных животных. Учебно-методическое пособие
.pdf
Изменение периферической крови при осторой лучевой болезни
При острой лучевой болезни раньше всего обнаруживают изменения со
стороны белой крови, несколько позже выявляют нарушения количества
тромбоцитов и эритроцитов. Установление количества лейкоцитов и
эритроцитов, определение гемоглобина осуществлют по общепринятой
методике.
Количество эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина зависит от вида,
возраста, пола, порды животного, времени дня, сост
ояния организма и
других моментов. Их количество у здоровых животных показано в таблице-5.
Таблица -5
Количество эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина у здоровых
животных
№
п/п
Вид животного Количество
эритроцитов в
3
1 мм
крови
(млн)
Количество
лейкоцитов
в 1 мм3
крови (тыс)
Количество
гемоглобина (в
делениях по
шкале Сали)
1. Лошади 5,5-11,5 6-12 50-110
2. Верблюды 7,5-12,5 11,5-20,5 66-114
3. Крупный рогатый
5,5-8,0 6,5-10,5 56-74
скот
4. Овцы 8,0-16,0 5,8-10,6 54-80
5. Козы 15,0-19,0 8-17 45-81
6. Свиньи 6,0-8,0 9-21 51-69
7. Собаки 5,5-9,8 6-12 65-95
8. Кошки 6,6-9,4 3,5-15,5 –
9. Куры 2,9-5,2 – 51-99
10. Кролики 4,5-7,5 6,5-9,5 51-87
21
Занятие – 1.
Определение количества эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина в
крови животных при острой лучевой болезни
Цель занятии: Изучение и освоение методик определения количества
эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина с целью постановки диагноза
лучевой болезни.
План занятия:
1. Оприделение количества эритроцитов в крови животных при острой
лучевой болезни
2. Оприделение количест
лучевой болезни
3. Оприделение количест
лучевой болезни
Оборудов
покровные ст
ание и реактивы. Микроскоп, счетная камера Горяева
екла. Меланжеры для счета эритроцитов и лейкоцитов,
.
ва лейкоцитов в крови животных при ос
трой
.
ва гемоглобина в крови животных при острой
.
физиологический раствор, 3% раствор уксусной кислоты, подкрашенной
метиленовой синькой, гемометр Сали, децинормальный раствор солянной
кислоты, дистиллированная вода, стеклянная палочка.
,
Опред
еление количества эритроцитов в крови животных при
острой лучевой болезни
Цитарную кровь от исследуемого животного набрать в капилляр
меланжера для эритроцитов (рис. 9) до метки 0,5 (разведение 1:200) или до
метки 1 (разведение1:100),затем предварительно удалив ваткой с кончика
капилляра лишнюю кровь, в смеситель до до метки 101 осторожно набрать
физиологический раствор (капилляр держать перпендикулярно к жидкости,
следить,чтобы в ба
ллончике не образовались пузырьки) и закрыв отверстие
меланжера с обеих сторон перемешать разбавитель с кровью в течение 1-2-х
минут.
Рис 9. Меланже
22
р для эритроцитов.
Перед зарядкой камеру Горяева (рис. 10) нужно подгот
овить, для этого
на чистую счетную камеру накладывают покровное стекло и его притирают
до появления радужных колец, счетную камеру с притертым покровным
стеклом закрепляют на столике микроскопа и при малом увеличении находят
счетную камеру. После этого из заряженного меланжера удаляют на вату
первые 2-3 капли разведенной крови, а следующую кап
лю наносят на
среднюю полоску счетной камеры вблизи от притертого покровного стекла,
затем при среднем увеличении (объектив 40) подсчитывают число
эритроцитов в 5-и больших квадратах, разделенных на 16 маленьких.
Рис. 10. Каме
ра Горяева.
Техника подсчета. Счетную камеру поместить под микроскоп
(объектив 8), найти сетку, а затем при среднем увеличении подсчитать число
эритроцитов в 5-и больших квадратах, разделенных на маленькие. После
подсчета количества эритроцитов в 5-и больших квадратах определяют
3
количество эритроцитов в одном мм
по формуле:
n • 4000 • У
А = ------------------------- ;
С
где, А – количество эритроцитов в 1 мм
3
крови;
n – количество эритроцитов, сосчитанное в 5-и больших
квадратах;
4000 – объем/величина, обратная объему одного маленького
3
квадратика, равная 1/4000 мм
;
У – разведение крови;
С – количество маленьких квадратиков, в которых
подсчитывались эритроциты.
23
Разведени
е крови для подсчета числа эритроцитов можно проводить в
пробирке, для чего в пробирку Флоринского берут 4 мл 0,85% раствора
хлорида натрия, вносят туда 0,02 мл крови пипеткой от гемометра Сали
(разведение крови 1:200) и смешивают. Каплю разбавленной крови наносят
на счетную камеру, и подсчет ведут так, как описано выше и количество
эритроцитов вычисляют по формуле:
Х = А • 10000;
где, Х – количество эритроцитов в 1 мм
3
крови;
А – количество эритроцитов, подсчитанных в больших квадратах.
Определение количества лейкоцитов в крови животных при
острой лучевой болезни
От исследуемого животного в меланжер для лейкоцитов (рис.11)
набрать кровь до метки 0,5 (разделение 1:20) или до метки 1 (разведение
1:10), затем, предварительно удалив ватой с кончика капиляра лишнюю
кровь, в смеситель до метки 11, осторожно набр
ать жидкость Тюрка (3%
раствор уксусной кислоты – 100 мл, 1℅ раствор метиленового синего – 1 мл),
тщательно перемешать раствор с кровью.
Рис.11. Ме
ланжер для лейкоцитов.
Счетную камеру устанавливают на столик микроскопа, и после
обнаружения сетки под малым увеличением заполняют счетную камеру,
предварительно удалив 1-2 капли жидкости из меланжера.
При оприделении количества лейкоцитов пробирочным способом
берут 0,4 мл жидкости Тюрка и 0,02 мл крови берут пипеткой гемометра
Сали (разведение 1:20) затем Пастеровской пипеткой берут смесь и заряжают
счетную ка
меру, подсчет клеток проводят в 100 больших квадратах сетки.
24
Количество лейкоцитов определяют по формуле:
А • Б • Г
Х = ------------------- = 50 • А;
В
3
где, Х – количество лейкоцитов в 1 мм
крови;
А – количество лейкоцитов в100 больших квадратах;
Б – степень разведения крови;
Г – объем счетной камеры над маленьким квадратом;
В – количество маленьких квадратов в 100 больших
(100 • 16=1600).
Затем перевести на среднее увелечение и подсчитовать количество
лейкоцитов в 100 больших квадратах, не разделенных на маленькие.
Изменения количества эритоцитов бывают:
Эритроцитопения (эритропения, олигоцитемия) – уменьшение
количеств
а эритроцитов – встречается при анемиях, интоксикациях,
инвазиях, пироплазмидозах, кровопотериях, лучевой болезни,
злокачественных образованиях, лейкозах.
Эритроцитоз (полицитемия, полиглобулия) – увеличение количества
эритроцитов – наблюдается при коликах, поносах, механических эмфиземах
легких, декоменсации сердца.
Изменения количества лейкоцитов бывают:
Лейкоцитоз – увеличение количества лейкоцитов – может быть
относительный (перераспределительный) и абсалютный (реактивный).
Лейкоцитозы разделяют на физиологические, медикаментозные и патологически
е.
Лейкопения – уменьшение количества лейкоцитов в крови-
встречается при вирусных болезнях, паратифе телят, стахиботриотоксикозе,
лучевой болезни и др.
Определение количества гемоглобина в крови животных при
острой лучевой болезни
Гемоглобин является дыхательным ферментом, он переносит
молекулярный кислород из легких в ткани, транспортирует углекислый газ из
тканей в легкие. Гемоглобин состоит из гема, содер
жит железо в виде
двухвалентной закисной формы, и глобина, который входит в группу
гистонов – серосодержащих белков типа альбуминов. В капиллярах альвеол
гемоглобин, соединяясь с кислородом, образует оксигемоглобин, который в
капиллярах тканей отщепляет от себя кислород.
Разновидность гемоглобина. Физиологическая разновидность-
гемоглобин взрослых животных НВП и фетальный гемоглобин – Нв,
25
который состовляет у плода основную массу этого пигмента, затем у
взрослых полностью исчезает.
Патологические разновидности гемоглобина (В, С, Д, Е и др.)
возникают вследствие врожденного нарушения синтеза гемоглобина.
Соедение гемоглобина с уграным газом – карбоксигемоглобин, с нитратами –
метгемоглобин, с сульфаниламидами – сульфгемоглобин.
Олигохромемия – снижение содержания гемоглобина в крови, бывает
при кровотечениях, гиповитаминозе В
, пироплазмидозах, лучевой
12
болезни и др.
Гиперхромемия – увеличение количества гемоглобина – бывает при
поносах, потливности, рвоте, миоглобинурии, эмфизе легких, кишечной
непроходимости.
(количество Нв у исследованных животных •
среднее количество эритроцитов)
Цветной показтель = ----------------------------------------------------------------------
(среднее количество Нв у здорового животного •
количество эритроцитов у исследуемого животного).
Рис. 12. Гемометр Сали.
В градуированную пробирк
у гемометра Сали (рисунок-12) до нижней
метки наливают децинормальный раствор соляной кислоты. В капилярную
пипетку до метки 20 набирают кровь и вносят ее в градуированную
пробирку, где содержится соляная кислота. При этом кончик пипетки должен
только касаться поверхности жидкости. Кровь подает на дно. Из прозрачного
верхнего слоя жидкости несколько раз опаласкивают пипетку, набирая и
выдувая жидкость. Пробирку встряхивают (до растворения крови) и
26
оставляют на 5-10 минут. Через 5-10 мин, в пробирку добовляют
дистиллированную воду при помешивании стеклянной палочкой до тех пор,
пока цвет исследуемой крови не будет одинаков с цветом стандарта. Цифры,
соответствующие уровню жидкости в пробирке, показывают количество
гемоглобина в единицах Сали или грамм/процентах.
Сразу же после окончания подсчетов выдуть кровь из меланжеров.
Смесит
ель дважды и более прополоскать водой, спиртом и эфиром, затем
продувать резиновым балоном до тех пор пока полностью не высохнет
внутренняя поверхность смесителя. После промывания шарик в смесителе не
должен прилипать к стенкам меланжера. Не сушить меланжер ртом, а так же
в термостате и в сушильном шкафу.
Занятие – 2
Выведение лейкоцитарной формулы (лейкограммы) при острой
лучевой болезни
Цель занятии: Изучение и освоение методик
и выведения лейкоцитарной
формулы крови изменение гемограммы и их диагностические значения при
острой лучевой болезни.
План занятия:
1. Выведение лейкоцитарной формулы крови
Реактивы и оборудование. Микроскоп, предметные и шлифованные
стекла, ванночки для высушивания и окраски мазков, стаканчики для
фиксации мазков, пинцет, фильтровальн
ая бумага, ватта, бинт или марля,
спирт, эфир, краска Ромоновского – Гимза, дистиллированная вода,
иммерсионное масло.
Для здоровых животных характерно относительно постоянное
процентное соотношение между видами лейкоцитов. Это соотношение
выражается так называемой лейкоцитарной формулой (таблица -6)
Лейкоцитарная формула или лейкограмма – это процентное
соотношение отдельных видов лейкоцитов, записанное в определенном
порядке.
Лейкоцитарная формула с буквенным обозначением форменных
элементо
в белой крови имеет следующий вид.
27
52-60 4-10
Лимфоциты Моноциты
*
24-30
Сегменто -
Палочко -
ядреные
ядреные
Нейтрофилы
Юные
Процентное соотношение лейкоцитов
– –
–
циты
Миэло -
филы
Эозино -
Таблица -6
Лейкоцитарная формула (лейкограмма) крови у здоровых животных.
Базо -
филы
0-2 3-8 0 0-1 2-5 20-35 40-65 2-7
0-1 4-12 0 0-2 3-6 35-45 40-50 2-5
0-1 3-12 0 0 1-5 29-38 47-64 2-4
0-1 2-6 0 0-1 3-6 45-62 25-44 2-4
0-1 1-4 0 0-2 2-4 40-48 40-50 2-6
0-1 3-9 0 0 1-6 43-71 21-40 1-5
0-2 1-3 0 0 5-9 33-39 43-62 1-3
1-3 6-10
Вид
животных
8
* – псевдоэозинофилы.
Крупный
рогатый скот
Овцы
Козы
Лошади
Свиньи
Собаки
Кролик
Куры
1
№
п/п
2
28
3
4
5
6
7
Количест
во
лейкоцитов
Б Э
Нейтрофилы
Л М
М Ю П С
Для выввведения лейкограммы используют окрашен
ный мазок из
периферической крови. Мазок крови готовится по ниже указанным
методикам.
Техника приготовления мазка крови
Кровяные мазки готовят на предварительно тщательно обработанных и
обезжиренных предметных стеклах. При приготовлении мазка на
предметном стекле пользуются, для размазывания капли, прошлифованным
предметным стеклом, несколько более узким, чем обычное предметное
ло (рис.13.). Правильно сделанный мазок должен быть тонким (на свету
стек
отливать цветами радуги), ровным, иметь свободные края со всех 4-х сторон,
занимать не менее 2/5 часть предметного стекла. Мазок высушывают на
воздухе. Посередание его пишут булавкой, иглой или другим острым
предметом кличку животного и дату взятия крови. Летом необходимо беречь
мазки от мух. Ма
зки, изготовленные на холоду и внесенные сразу в комнату,
гемолизируются; поэтому необходимо в зимнее время плотно завертывать
мазки несколькими слоями бумаги и развертывать в комнате лишь через
несколько часов.
Рис.1
3. Техника приготовления мазка крови.
Фиксация мазка
29
Высохший на воздухе мазок погружают в широкогорлую
закрывающюся банку или в специальные кюветы с фиксирующей
жидкостью, которой могут служить метиловый спирт (фиксация 5 мин),
абсолютный алкоголь и смесь разных частей спирта и эфира (фикация 20-30
минут без доступа воздуха), ацетон (фиксация 5 мин) ацетон попалам с
метиловым спиртом (фиксация 5 мин). В крайнем случае можно уп
для фиксации 96
0
этиловый или денатурированный спирт. После фиксации
отреблять
мазки вынимают пинцетом и ставят в наклонном положении на
фильтровальную бумагу для высыхания. Фиксированные мазки можно
хранить неокрашенными до 2-х месяцев; при более длительном хранении они
портятся.
Окраска мазков
Окраска мазков чаще производится краской Романовского – Гимза.
Последниюю разводят перед употреблением дистилированной водой (1
капля краски на 1 мл дистилированной воды) и наливают высоким слоем на
фиксированный п
репарат. Лучше, однако, краску подводить под мазок.
Препарат в таких случях кладут вниз мазком на спичку в
бактериологическую чашку и под него подливают краску. Длительность
окраски-20-30 минут, после чего краску смывают водой и мазки
просушывают. Цвет препаратов зависит от реакции дистилированной воды:
если вода имеет ки
слую реакцию- мазки красаные; при щелочной реакции
воды мазки синие; поэтому дистиллированная вода, употребляемая при
разведении краски должна быть строго нейтральной реакции.
При подсчете белой крови необходимо определить стуктурные
особенности цитопазмы и ядра клеток: вид зернистости, формы кариолиза и
т.п. Эти особенности имеют большое значение в оценке лучевого поражения.
Принадлежность кле
тки к той или иной группе определяют на основе
совокупности изменений цитоплазмы и ядер.
При окрашивании лейкоцитов по Рамоновскому – Гимза ядра всех
клеток приобретают вишнево – фиолетовый цвет, тогда как окраска
цитоплазмы для разных клеток неодинакова. Базофильные лейкоциты имеют
лопастовидное ядро, в цитоплазме видны крупные зерна, окрашенные в
синий цвет. У эозинофильнных лейкоцитов ядро сегментировано, зер
на
цитоплазмы интенсивно окрашены в ярко – красный цвет. Миелоциты
предстовлют незрелые формы гранулоцитов и характеризуются большой
величеной клетки и крупным ядром. Встречаются в крови при различных
заболеваниях организма.
Нейтрофильные лейкоциты – крупные клетки с резко очерченным
темным ядром. Цитоплазма слегка розового цвета, содержит мелкие
зернышки розоватофиолетового цвета:
ядро;
а) юнные формы имеют большое палочкообразное или к
30
олбасовидное
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]