Криминалистическое исследование ДНК человека. Учебное пособие

Образцы буккального эпителия. При взятии данных образцов при помощи специального одноразового инструмента (палочки) проводится соскоб эпителиальных клеток с внутренней поверхности щеки.

При самостоятельном заборе образцов буккального эпителия нужно действовать следующим образом:

1.Приобрести обычные гигиенические ватные палочки. Подготовить бумажные конверты по одному для каждого человека, у которого будут браться образцы буккального эпителия, и подписать их.

2.Человек, у которого будет проводиться забор образцов, должен прополоскать рот чистой кипяченой водой.

3.Взять ватную палочку за один конец и провести несколько раз другим

ееконцом по внутренней поверхности щеки с легким нажимом.

4.Не выпуская палочки из руки, поместить ее конец с буккальным эпителием в бумажный конверт и отрезать ножницами так, чтобы половина палочки с биологическим материалом осталась в конверте. Оставшуюся половину выбросить.

От каждого человека необходимо предоставить не меньше трех ватных палочек с образцами буккального эпителия. Хранить и транспортировать образцы нужно в бумажных конвертах при комнатной температуре.

Образцы от разных людей должны быть в отдельных конвертах для исключения взаимного переноса биологического материала.

Образцы ногтей. Для взятия образцов данного вида нужно состричь ногти со всех пальцев рук и ног. Предварительно следует тщательно вымыть пальцы с применением щетки для полного удаления возможных подногтевых загрязнений.

Хранить и транспортировать образцы ногтей следует в бумажных конвертах в условиях пониженной влажности.

Гистологические образцы («парафиновые блоки»). Данные образцы яв-

ляются пригодными для проведения молекулярно-генетических анализов. Иногда возникают ситуации, когда для проведения анализа требуется ис-

следование материала умершего члена семьи. Если известно, что для этого человека при проведении лечения или посмертно, проводилось патологоанатомическое исследование, следует обратиться в лабораторию, проводившую анализ. По существующим правилам, образцы тканей, взятых для гистологических исследований, должны храниться в патологоанатомических отделениях не менее трех лет.

41

По делам, связанным с половыми преступлениями, убийствами, нанесением тяжких телесных повреждений, для проведения молекулярно-

генетической идентификационной экспертизы в работу принимается материал после проведения судебно-медицинского биологического исследования. Су- дебно-медицинской экспертизой решаются вопросы о наличии и природе пятен биологического происхождения (кровь, сперма) на представленных вещественных доказательствах, их видовой (человек или животное) и групповой принадлежности.

В случае идентификационной экспертизы неопознанных и расчлененных трупов (гнилостно измененных) направляют только образцы костей в измельченном виде весом не менее 3 гр. Поэтому, чтобы избежать эксгумации, возможность молекулярно-генетического исследования должна быть предусмотрена заранее. Образцы костных тканей после медико-криминалистического исследования не пригодны для ДНК-анализа из-за глубоких деструктивных изменений в результате вываривания.

Идентификационная экспертиза проводится при наличии живыx предполагаемых родителей или детей.

Пример. В мае 2008 г. на берегу реки Обь был обнаружен труп женщины с признаками насильственной смерти: отчлененной головой, руками и ногами. В июне 2008 г. на берегу реки Инь (правый приток Оби) был найден фрагмент ноги. Других следов на местах происшествий выявлено не было.

По результатам проведения ДНК-анализа изъятых объектов было установлено, что найденные в разных местах останки принадлежат одной женщине. Тогда в качестве образца для сравнительного исследования был взят образец ДНК предполагаемой дочери погибшей. Результаты ДНК-анализа подтвердили правильность предположений, личность убитой женщины была установлена.

По делам, связанным с установлением спорного отцовства, материн-

ства и подмены детей, предъявляются следующие требования:

1. Забор крови должен производиться у предполагаемого отца, матери и ребенка одновременно, в специализированном медицинском учреждении с обязательным составлением протокола забора крови. В случае невозможности предоставления в молекулярно-генетическую лабораторию жидких образцов крови возможна пересылка по почте высушенных на марлевых тампонах образцов крови.

42

2.Все образцы должны быть упакованы в пакеты, содержащие полные реквизиты: четкую маркировку, определяющую содержимое пакетов, фамилию

иподпись лица, производившего забор и упаковку образцов, подписи матери и предполагаемого отца ребенка, опечатанные оттисками печати медицинского учреждения.

3.Изымать образцы крови необходимо на стерильную марлю в 5 слоев. Пятно крови диаметром не менее 3 см должно пропитывать все слои марли.

4.Сушить образцы крови необходимо при комнатной температуре в сухом помещении вдали от солнца и источников тепла. Хранить желательно в холодильнике.

5.Пересылать на адрес молекулярно-генетической лаборатории не позднее 7 суток с момента забора вместе с протоколом изъятия (где, кем и у кого изымались образцы крови).

6.В случае направления жидкой крови для исследования необходимо забирать 5 мл с добавлением 1 мл цитратного антикоагулянта.

7.Хранить и транспортировать образцы жидкой крови с добавленными консервантами необходимо при температуре от 0 до +5 °С не более 5 суток с момента забора (для транспортировки пробирок можно использовать термос со льдом).

Согласно ч. 2 ст. 195 УПК РФ, судебная экспертиза проводится государственными и иными экспертами из числа лиц, обладающих специальными знаниями. Следователь направляет руководителю экспертного учреждения постановление о назначении экспертизы, последний поручает производство конкретному судебному эксперту, разъясняет ему права и ответственность, предусмотренные ст. 57 УПК РФ.

Экспертом лицо становится в тот момент, когда государственный орган или должностное лицо своим процессуальным решением (в данном случае — постановлением о назначении генотипоскопической экспертизы) признает его таковым. Именно тогда лицо приобретает процессуальный статус эксперта, в том числе процессуальные права и обязанности.

Процессуальное положение эксперта в основном закреплено в ст. 57 УПК. Анализ других статей УПК несколько расширяет перечень правомочий эксперта. Так, в частности, в соответствии со ст. 131–132 эксперт имеет право получать возмещение расходов, связанных с явкой по вызову и производством экспертизы.

43

Необходимо заметить, что процессуальные права и обязанности эксперта регламентированы также в ст. 16, 17 Федерального закона «О государственной судебно-экспертной деятельности в Российской Федерации».

В соответствии со ст. 16 данного закона эксперт обязан:

-принять к производству порученную ему руководителем соответствующего государственного судебно-экспертного учреждения судебную экспертизу;

-провести полное исследование представленных ему объектов и материалов дела, дать обоснованное и объективное заключение по поставленным перед ним вопросам;

-составить мотивированное письменное сообщение о невозможности дать заключение и направить данное сообщение в орган или лицу, которое назначило судебную экспертизу, если поставленные вопросы выходят за пределы специальных знаний эксперта, объекты исследований и материалы дела непригодны или недостаточны для проведения исследований и дачи заключения,

иэксперту отказано в их дополнении, современный уровень развития науки не позволяет ответить на поставленные вопросы;

-не разглашать сведения, которые стали ему известны в связи с производством судебной экспертизы, в том числе сведения, которые могут ограничить конституционные права граждан, а также сведения, составляющие государственную, коммерческую или иную охраняемую законом тайну;

-обеспечить сохранность предоставленных объектов исследований и материалов дела.

Эксперт не вправе:

-принимать поручения о производстве судебной экспертизы непосредственно от каких-либо органов или лиц, за исключением руководителя государственного судебно-экспертного учреждения;

-осуществлять судебно-экспертную деятельность в качестве негосударственного эксперта;

-вступать в личные контакты с участниками процесса, если это ставит под сомнение его незаинтересованность в исходе дела;

-самостоятельно собирать материалы для производства судебной экспертизы;

-сообщать кому-либо о результатах судебной экспертизы, за исключением органа или лица, ее назначившего;

-уничтожать объекты исследований либо существенно изменять их свойства без разрешения органа или лица, назначившего судебную экспертизу.

44

Эксперт или государственное судебно-экспертное учреждение не вправе отказаться от производства порученной им судебной экспертизы в установленный судом срок, мотивируя это отказом стороны, на которую судом возложена обязанность по оплате расходов, связанных с производством судебной экспертизы, осуществить оплату назначенной экспертизы до ее проведения.

Кроме того, ст. 57 УПК РФ применительно к уголовному судопроизводству дополнительно устанавливает, что эксперт не вправе:

-давать заведомо ложное заключение;

-разглашать данные предварительного расследования, ставшие известными ему в связи с участием в уголовном деле в качестве эксперта, если он был об этом заранее предупрежден;

-уклоняться от явки по вызовам в суд дознавателя, следователя.

За дачу заведомо ложного заключения эксперт несет ответственность в соответствии со статьей 307 Уголовного кодекса Российской Федерации, а за разглашение данных предварительного расследования эксперт несет ответственность в соответствии со статьей 310 Уголовного кодекса Российской Федерации.

Всоответствии со ст.17 Федерального закона «О государственной судеб- но-экспертной деятельности в Российской Федерации» эксперт вправе:

- ходатайствовать перед руководителем соответствующего государственного судебно-экспертного учреждения о привлечении к производству судебной экспертизы других экспертов, если это необходимо для проведения исследований и дачи заключения;

- делать подлежащие занесению в протокол следственного действия или судебного заседания заявления по поводу неправильного истолкования участниками процесса его заключения или показаний;

- обжаловать в установленном законом порядке действия органа или лица, назначившего судебную экспертизу, если они нарушают права эксперта.

Вст. 57 УПК РФ уточнены права судебного эксперта в уголовном судопроизводстве. В частности, эксперт также вправе:

- знакомиться с материалами уголовного дела, относящимися к предмету судебной экспертизы;

- ходатайствовать о предоставлении ему дополнительных материалов, необходимых для дачи заключения;

- участвовать с разрешения дознавателя, следователя и суда в процессуальных действиях и задавать вопросы, относящиеся к предмету судебной экспертизы;

45

-давать заключение в пределах своей компетенции, в том числе по вопросам, хотя и не поставленным в постановлении о назначении судебной экспертизы, но имеющим отношение к предмету экспертного исследования;

-отказаться от дачи заключения по вопросам, выходящим за пределы специальных знаний, а также в случаях, если представленные ему материалы недостаточны для дачи заключения. Отказ от дачи заключения должен быть заявлен экспертом в письменном виде с изложением мотивов отказа.

Согласно ч. 3 ст. 195 УПК РФ следователь знакомит с постановлением о назначении судебной экспертизы подозреваемого, обвиняемого, его защитника

иразъясняет им их права (ч. 1 ст. 198 УПК РФ).

Всоответствии со ст. 198 УПК РФ подозреваемый, обвиняемый, при назначении и производстве судебной экспертизы, вправе заявить отвод эксперту, просить о назначении эксперта из числа указанных им лиц, о постановке дополнительных вопросов или изменении формулировок, о присутствии при производстве экспертизы, ходатайствовать о назначении повторной и дополнительной экспертизы, представлять через следователя дополнительные материалы. Следователь обязан вынести мотивированное постановление при отказе в подобном ходатайстве обвиняемого, которое объявляется ему под расписку.

§2. Технология криминалистического ДНК-анализа

Всоответствии со ст. 199 УПК РФ при производстве судебной экспертизы в экспертном учреждении следователь направляет руководителю соответствующего экспертного учреждения постановление о назначении судебной экспертизы и материалы, необходимые для ее производства.

Руководитель экспертного учреждения после получения постановления поручает производство судебной экспертизы конкретному эксперту или нескольким экспертам из числа работников данного учреждения и уведомляет об этом следователя. При этом руководитель экспертного учреждения, за исключением руководителя государственного судебно-экспертного учреждения, разъясняет эксперту его права и ответственность, предусмотренные статьей 57 УПК РФ.

После проведения указанных действий эксперт приступает к производству экспертного исследования.

46

Экспертное исследование традиционно подразделяется на несколько этапов: подготовительный этап, рабочий этап (раздельное исследование, сравнительное исследование), анализ проведенного исследования, формирование заключения эксперта.

Каждый этап любого судебно-экспертного исследования имеет свои ор- ганизационно-методические особенности. Не является исключением в данном случае и производство судебной генотипоскопической экспертизы.

Подготовительный этап генотипоскопической экспертизы включает в себя работу эксперта, связанную с:

-изучением материалов уголовного дела, имеющих отношение к проводимому исследованию;

-проверкой и подготовкой специального оборудования и реагентов для проведения исследования;

-проведением сбора образцов для сравнительного исследования (как было отмечено выше, сбор образцов для молекулярно-генетического исследования эксперт осуществляет самостоятельно).

Рабочий этап является наиболее сложным в процессе молекулярногенетического исследования и включает в себя применение различных экспертных методик, направленных на изучение и сравнительное исследование биологического материала, направленного на производство экспертизы. Остановимся более подробно на этом вопросе.

Рабочий этап молекулярно-генетического исследования начинается с процедуры выделения ДНК из биологического материала.

Для выделения ДНК необходимо разрушить клеточные и ядерные мембраны (что чаще всего достигается с помощью протеолитических ферментов либо температурного воздействия), а также по возможности очистить полученный препарат от белковых примесей, различных загрязнений и веществ, препятствующих в дальнейшем проведению полимеразной цепной реакции (ингибиторов ПЦР). Традиционными методами выделения ДНК являются: метод фенольной экстракции, выделение ДНК при помощи 5 % водной взвеси комплекса ионообменных смол — реагента «Chelex 100». В последнее время широкое распространение получили методы, позволяющие экстрагировать высокоочищенную ДНК, а также автоматизировать процесс ее выделения. Это широкий спектр коммерческих наборов реагентов, производимых американскими и европейскими компаниями. Каждый из этих методов имеет свои преимущества и недостатки. Выбор наиболее оптимального метода зависит от вида

47

и количества биологического объекта, характера предмета-носителя, наличия загрязнений.

Очень важный в экспертной практике частный случай — получение ДНК из спермы и смешанных следов, содержащих сперму. Его особенность заключается в том, что хроматин сперматозоидов имеет принципиальное отличие от хроматина соматических клеток — его структура дополнительно стабилизирована дисульфидными связями. Поэтому применяемый по стандартной процедуре выделения ДНК протеолиз в случае спермального хроматина малоэффективен и идет очень медленно, а используемые для диссоциации нуклеопротеинов детергенты практически не оказывают на него стабилизирующего действия. В результате выход спермальной ДНК оказывается практически нулевым. Для преодоления этой трудности при выделении ДНК из спермы в клеточный лизат вводят дополнительно реагенты-восстановители (например, дитиотрейтол или 2-меркаптоэтанол), которые разрушают дисульфидные белковые сшивки. Это позволяет продолжить процесс по стандартной схеме.

После завершения процедуры выделения ДНК эксперт переходит к стадии исследования выделенной из биологического материала молекулы ДНК. Для этого применяются отработанные и апробированные экспертной практикой специфические методы исследования. Наиболее эффективным из них является

метод полимеразной цепной реакции.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод мо-

лекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов ДНК в биологическом материале (пробе).

Данный метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. В отличие от амплификации (репликации) ДНК в живых организмах, с помощью ПЦР амплифицируются относительно короткие участки ДНК. В обычном ПЦР-процессе длина копируемых ДНК-участков составляет не более 3000 пар оснований. С помощью смеси различных полимераз, с использованием добавок и при определённых условиях длина ПЦР-фрагмента может достигать 20-40 тысяч пар нуклеотидов. Таким образом, в течение нескольких часов можно размножить определённую последовательность ДНК в количестве, превышающем исходное в миллион раз и более. Следовательно, исходно требуется очень незначительное количество материала. Необходимым условием для

48

проведения ПЦР является знание нуклеотидной последовательности амплифицируемого фрагмента или, по крайней мере, этого фрагмента.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок обычно с точностью не менее 0,1 °C.

Следующая стадия исследования ДНК — выявление аллельных характеристик ДНК после ПЦР с помощью электрофореза.

Электрофорез ДНК в агарозном геле — это аналитический метод, при-

меняемый для разделения фрагментов ДНК по размеру (длине). При проведении электрофореза фрагменты ДНК мигрируют в геле под воздействием сил электрического поля. Дело в том, что сахарофосфатный остов молекул ДНК заряжен отрицательно, и поэтому цепи ДНК двигаются от катода, заряженного отрицательно, к положительному аноду. Более длинные молекулы мигрируют медленнее, так как задерживаются в геле, более короткие молекулы двигаются быстрее.

Перед началом электрофореза к образцам принято добавлять два разных красителя с кислым значением pH (часто для этих целей используют ксиленовый голубой и бромфеноловый синий), чтобы визуализировать ход электрофореза и утяжелять образцы глицерином (до 20 % глицерина в образце). Краситель также необходим для того, чтобы определить, когда стоит остановить процесс. Электрофорез проводится в камере, заполненной буферным раствором.

После разделения (иногда краситель вносят в расплавленную агарозу) фрагменты ДНК разной длины визуализируют при помощи флюоресцентных красителей, специфично взаимодействующих с ДНК. Например, агарозные гели обычно красят бромистым этидием, который интеркалирует между азотистыми основаниями дуплекса и флюоресцирует в ультрафиолетовых лучах.

Определение размеров производят путем сравнения наборов коммерческих фрагментов ДНК известной длины («DNA ladder», «линейка», «маркеры ДНК») и ДНК в проверяемых образцах. Обычно в коммерческих маркерах также указывают содержание отдельных фрагментов, чтобы можно было, сопоставив интенсивность полос, быстро оценить концентрацию ДНК в проверяемых образцах.

Полученную картину расположения полос ДНК и называют генетиче-

ским отпечатком пальцев.

49