Микотоксикозы животных. Учебно-методическое пособие по ветеринарной токсикологии для студентов очной, заочной и очно-заочной (вечерней) формы образова

Диагноз ставится на основании анамнестических данных,

клинической картины и результатов химико-токсикологического

анализа.

Патологоанатомические изменения. Находят некротические процессы на коже вокруг рта, носа, на слизистых оболочках ротовой полости, глотки, пищевода, пилорической части желудка. При выраженной степени токсикоза отмечают геморрагический диатез,

дистрофию паренхиматозных органов.

Лечение. Специфических методов лечения нет. Необходимо исключить из рациона сено или солому, пораженные грибом (черный,

сажистый налет). Не cлeдyeт использовать также солому, пораженную грибом, в качестве подстилки. С целью предотвращения развития некротических процессов назначают отвары из крахмала, мучную болтушку, а также антибиотики.

Ветсанэкспертиза. Токсикокинетика сатротоксинов, роридинов и веррукаринов не изучена. Однако по химической структуре они относятся к классу трихотеценов, так же как Т-2-токсин, ДОН и некоторые другие микотоксины. Поэтому ветеринарно-санитарную экспертизу продуктов убоя можно проводить так же, как и при Т-2-

токсикозе.

Профилактика. Необходимо исключить пораженные корма менять подстилку. Из рациона жвачных при возникновении заболеваний убирают кислые корма (щелочная среда неблагоприятна для токсинов).

Задачи для выписывания рецептов:

1. Кофеин - Coffeinum. Кофеин получают из листьев чая, семян кофе, орехов кола, а также синтетическим путем - из мочевой кислоты гуанина. Представляет собой белые шелковистые игольчатые кристаллы или белый кристаллический порошок горьковатого вкуса,

без запаха. Медленно растворим в воде (1:60), легко - в горячей воде

31

(1:2), трудно растворим в спирте (1:50), мало растворим в эфире.

Растворы имеют нейтральную реакцию, стерилизуют их при 100°С в течение 30 минут. Выпускают в форме порошка и комбинированных таблетках. Дозы внутрь (г): лошадям и крупному рогатому скоту 3-8;

мелкому рогатому скоту и свиньям 0,5-2; собакам 0,2-0,5; курам 0,05- 0,1.

2. Ветбицин-5 - Vetbicinum-5. Ветбицин-5 - лекарственное антибактериальное средство пролонгированного действия в форме порошка для приготовления инъекционного раствора. 1 флакон Ветбицина-5 содержит в качестве действующих веществ смесь двух антибиотиков: бензатина бензилпенициллин - 1200000 ЕД и бензилпенициллина новокаиновую соль - 300 000 ЕД. Представляет собой порошок белого или белого с желтоватым оттенком цвета, с

водой образует стойкую суспензию. Расфасовывают в герметично закрытые стеклянные флаконы вместимостью 10 мл или 20 мл,

укупоренные резиновыми пробками и обкатанные алюминиевыми колпачками. Перед применением во флакон с Ветбицином-5, проколов колпачок и пробку, добавляют 5-6 мл воды для инъекций (или стерильного изотонического раствора хлорида натрия, или 1-2%

стерильного раствора новокаина), флакон тщательно встряхивают до образования гомогенной суспензии, которую немедленно вводят животному глубоко внутримышечно. Полученную суспензию вводят животным однократно в следующих разовых дозах на 1 кг массы животного, которые указаны в таблице.

32

Таблица. Дозы введения препарата животным

3. Крахмал - Amylum. Крахмал - полисахарид, получаемый из зерен пшеницы, кукурузы, риса, клубней картофеля. Представляет собой белый мучнистый порошок без запаха и вкуса. Нерастворим в холодной воде, в горячей воде образует коллоидный раствор

(клейстер). Наружно его применяют в качестве обволакивающего и подсушивающего средства при мокнущих ранах, при дерматитах в виде присыпок с окисью цинка, тальком, йодоформом. Внутрь крахмал назначают в виде слизи, для приготовления которой берут 1 часть крахмала и размешивают в 4 частях холодной воды, а затем содержимое при помешивании выливают в 45 частей кипящей воды и кипятят 5 минут. Вводят внутрь 3-4 раза в день (г на животное):

лошадям 50-100; крупному рогатому скоту 50-150; овцам 10-50;

свиньям 10-30; собакам 1-5; кошкам 1-3.

8. ПАТУЛИН

Патулин был впервые выделен в 1943 г. из культуры Penicillium patulum как антибиотик. Обнаружение у патулина высокой токсичности, мутагенных и канцерогенных свойств, а также выявление

33

его в качестве загрязнителя пищевых продуктов заставляет отнести патулин к особо опасным микотоксинам.

По химической структуре патулин представляет собой 4-гидро-

ксифуропиран. Продуцентами патулина являются различные виды

Penicillium - P. expansion, P. claviforme, P. urticae (P. patulum), P. cyclopium, P. viri-dicatum, P. roqueforti; и Aspergillus - A. clavatus, A. terreus, A. giganyeus; а также Byssochlamysfulva. Продуценты патулина поражают преимущественно фрукты и некоторые овощи. Токсин обнаруживается в яблоках, грушах, абрикосах, персиках, черешне,

винограде, бананах, клубнике, голубике, бруснике, облепихе, томатах, а

также фруктовых соках, компотах, пюре и джемах. Чаще, чем другие плоды, патулином загрязняются яблоки. Следует подчеркнуть, что патулин концентрируется в основном в подгнившей части яблока, в то время как в неповрежденной части определяется только около 1%

общего количества токсинов.

Однако в томатах независимо от размеров подгнившего участка патулин распределяется равномерно по всей ткани. Экспериментально доказано, что цитрусовые и некоторые овощные культуры (картофель,

лук, редис, редька, баклажаны, цветная капуста, тыква и хрен)

обладают естественной резистентностью к заражению продуцентами патулина.

Максимальное токсинообразование наблюдается обычно при температуре 21...30°С.

Патулин оказывает мутагенное действие на организм человека и животного - изменение генетической информации, тератогенное действие, приводящее к появлению уродств и отклонениям в развитии молодого организма, и некротическое действие, вызывающее гибель клеток.

Предельно допустимая концентрация патулина, по медико-

биологическим требованиям, предъявляемым к фруктовым и овощным

34

сокам, пюре, составляет не более 0,05 мг/кг; в продуктах детского и диетического питания присутствие следов патулина не допускается.

Это микотоксикоз, развивается при поедании животными кормов,

содержащих микотоксин патулин.

Патулин был впервые выделен из культуры Р. раtulum и затем из Р. expansum как антибиотик. Он известен и под другими названиями:

клавиформин, клавицин, эксианзин, мукопин, микоин, пеницидин,

терцинин, происхождение которых связано с названиями грибов-

продуцентов. Обнаружение у патулина высокой токсичности,

мутагенных и канцерогенных свойств, а также выявление его в качестве загрязнителя пищевых продуктов заставляет отнести патулин к особо опасным микотоксинам.

По химической структуре патулин представляет собой 4-

гидроксифуропиран. В щелочной среде патулин теряет свою биологическую активность. При нагревании загрязненного патулином яблочного сока при 80ОС в течение 10-20 мин его концентрация падает на 50%. К разрушению токсина приводит и добавление аскорбиновой кислоты. Продуцентами патулина являются различные виды

Penicillium- Р. expansum, Р. claviforme, Р. intrecae (Р. patulum), Р. cyclopium, Р. viridicatum, Р. roqueforti, и Aspergillius - A. clavatus, A. terreus, A. giganteus, а также Byssochlamys fulva. Максимальное токсинообразование наблюдается обычно при температуре 21-30°С.

Острый токсикоз у крыс, мышей и хомячков характеризуется преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта

(полнокровие, геморрагии, изъязвления).

У мышей и крыс наблюдали также диффузный отек легких,

полнокровие, геморрагии, иногда - некрозы печени, почек и селезенки.

Значения LD50 патулина для мышей поданным разных авторов составляют: при введении внутрь - 17-36,2 мг на 1 кг массы тела; при

35

внутрибрюшинном введении - 7,6-8,17, при внутривенном введении - 17,8-25 и при подкожном - 10-15 мг/кг.

У обезьян Масаса nemestrina, получавших патулин в дозе 5-500

мкг/кг в течение 4-6 недель, не наблюдали каких-либо клинических или биохимических признаков интоксикации. При клинических испытаниях патулина как антибиотика его введение людям внутривенно в дозе до

100 мг не давало побочных эффектов, но при его введении внутрь наблюдались тошнота и рвота.

Патулин относят к канцерогенным соединениям, поскольку в опытах на крысах при подкожном введении в количестве 0,2 мг 2 раза в неделю в течение 61-64 недель он индуцировал фибросаркомы. В то же время, в последующих экспериментах, проведенных на крысах и мышах, не удалось подтвердить его канцерогенную активность.

Мутагенные свойства патулина выявлены в опытах на бактериальных и дрожжевых тест-системах. При введении беременным крысам и мышам патулин оказывал эмбриотоксическое и эмбриоцидное действие, но не проявлял тератогенных и мутагенных свойств. Патулин обладает высокой антибактериальной активностью широкого спектра: подавляет рост как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий в концентрации 2-100 мкг/мл. К его действию чувствительны некоторые виды микроскопических грибов,

простейшие, амфибии: токсин цитотоксически действует на клеточные и тканевые культуры.

Биохимические механизмы действия патулина изучены мало.

Токсин активно взаимодействует с SH-группами и подавляет активность тиолзависимых ферментов, что, по-видимому, играет важную роль в механизме его токсического действия. Следует отметить, что цитотоксическое, антимикробное и фитотоксическое действие патулина в значительной степени уменьшается в присутствии

SH - содержащих соединений - глутатиона, цистеина, тиогликолата,

36

дитиотреигола. Токсичность патулина в определенной степени может быть связана с энтеротоксинемией, вызванной резким изменением микрофлоры кишечника.

Продуценты патулина поражают преимущественно фрукты и некоторые овощи. Токсин обнаружен в яблоках, грушах, абрикосах,

персиках, винограде, бананах, клубнике, голубике, бруснике, в томатах и некоторых фруктовых соках и пюре. Чаще, чем другие плоды патулином загрязняются яблоки. По данным разных авторов,

содержание токсина в яблоках варьирует от 0,02 до 17,7 мг/кг. В ФРГ и Канаде патулин выявляли в 50% исследованных яблок, причем в отдельных случаях содержание его доходило до 18 мг/кг. В Португалии патулин обнаружили в 67% подгнивших яблок в концентрации 0,8-100

мг/кг. Следует подчеркнуть, что патулин концентрируется в основном в подгнившей части яблока, где его содержание может достигать 1,2 г/кг,

в то время как в неповрежденной части определяется только около 1%

общего количества токсина. Однако в томатах независимо от размеров подгнившего участка патулин распределяется равномерно по всей ткани.

Симптомы. В начале заболевания отмечают посинение пятачка у свиней и нижней части живота, угнетенное состояние. В дальнейшем появляется кашель, обильная саливация, возможна рвота. У животного резко нарушено дыхание, в грудной полости прослушиваются хрипы,

пульс учащен. В тяжелых случаях течения болезни появляются шаткость походки, парез тазовых конечностей, затем наступают конвульсии и животное погибает. Хронический патулинотоксикоз протекает без видимых клинических признаков. Животные отстают в росте, хуже поедают корм, в отдельных случаях появляется диарея.

Патологические изменения. Отмечают отек легких, скопление серозной жидкости в грудной и брюшной полостях, катаральный гастроэнтерит.

37

Диагноз ставят на основании клинических признаков,

патологических изменений, выделения из корма гриба-продуцента патулина и воспроизведения болезни в эксперименте культурой этого гриба.

Лечение симптоматическое.

Профилактика общая для микотоксикозов. Патулин разрушается при обработке щелочью, пропаривании, термической обработке.

Например, при обработке яблочного сока при 80ОС в течение 10-20

минут его концентрация падает на 50%. К разрушению токсина также приводит добавлении аскорбиновой кислоты.

Задачи для выписывания рецептов:

1. Кофеин-бензоат натрия - Coffeinum-natrii benzoas. Содержит кофеина 43,7% и бензоата натрия 56,7%. Белый порошок слабогорького вкуса, растворимый в воде (1:2), труднее - в спирте (1:70). Растворы стерилизуют текучим паром при 100°С в течение 30 минут. Выпускают в порошке, таблетках по 0,1 и 0,2 г и в ампулах по 1, 2, 5, 10, 50, 100 мл и др. 10% и 20% раствора.

Дозы внутрь: лошадям и крупному рогатому скоту 3-8 г; мелкому рогатому скоту и свиньям 1-2 г; собакам 0,2-0,5 г; курам 0,05-0,1 г;

подкожно: лошади и крупному рогатому скоту 2-5 г; мелкому рогатому скоту и свиньям 0,5-1,5 г; собакам 0,1-0,3 г.

Дозы подкожно 20% раствора применяют в следующих дозах (в мл на одно животное): лошади и крупному рогатому скоту 5-10, овцам,

козам и свиньям 0,5-2, собакам 0,2-0,5.

2. Антитокс – Antitoxum. Препарат представляет собой стерильную, прозрачную жидкость со специфическим запахом серы.

Препарат выпускают расфасованным по 50; 100; 250 см3 в стеклянных флаконах. Вводят медленно, внутривенно, внутримышечно, подкожно или внутрибрюшинно, один раз в день, до выздоровления, в дозах (на животное, мл): лошадям и крупному рогатому скоту 30-40; свиньям,

38

овцам и козам 20-30; собакам 5-15; кошкам, кроликам, норкам 3-5;

морским свинкам, шиншиллам, хомякам 0,5-1,5.

3. Нистатин – Nystatinum, противогрибковое антибиотик. Светло-

желтый порошок со специфическим запахом, горького вкуса.

Практически нерастворим в воде, очень мало в спирте. Выпускают в таблетках по 250000 и 500000 ЕД, а также в форме мази в тубах по 5, 10, 25 и 50 г, содержащей в 1 г 100000 ЕД. Назначают внутрь собакам и кошкам по 10000-20000 ЕД/кг 3 раза в день.

9. Методы обнаружения микотоксинов в кормах и

патологическом материале

Метод основан на экстракции токсинов из кормов водным ацетоном, очистке экстракта от сопутствующих примесей гексаном,

переэкстракции токсинов в хлорофором или бензол, их очистке на хроматографической колонке с силикагелем и окисью алюминия.

Идентифакция и количественное определение основано на методе хроматографии экстракта в тонком слое с использованием пластинок

«Силуфол». Чувствительность метода составляет 10 мг/кг, время анализа - 3 часа.

1. Подготовка образца к анализу и экстрагирование токсинов

Полученный для исследования образец тщательно измельчают и перемешивают. Для анализа отбирают пробу массой 50 г в колбу емкостью 500 мл с притертой пробкой. Навеску заливают 150 мл смеси ацетон-вода (85+15), закрывают пробкой и встряхивают на щуттель-

аппарате в течение 45 мин. Полученный экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр в мерный цилиндр на 100 мл, отбирая первые

75 мл фильтрата.

2. Очистка экстракта. 75 мл фильтрата переносят в делительную воронку на 500 мл. Цилиндр ополаскивают 5 мл ацетона и сливают в ту же делительную воронку. К фильтрату приливают 50 мл гексана,

39

закрывают пробкой и энергично встряхивают 1,5-2 минуты. Затем в делительную воронку приливают 120 мл 4%-ного раствора натрия хлорида, аккуратно перемешивают содержимое воронки и дают слоям разделиться. После этого нижний водно-ацетоновый слой сливают во вторую делительную воронку и в ней проводят переэкстракцию токсинов из водного ацетона в бензол или хлороформ.

1) При использовании хлороформа в делительную воронку приливают 25 мл его, аккуратно перемешивают и дают слоям разделиться, После разделения слоев нижний слой сливают вколбу на

200-250 мл через бумажный фильтр со слоем безводного сульфата натрия. Операцию переэкстрагирования повторяют ещё трижды,

каждый раз сливая нижний слой в ту же колбу. После этого промывают фильтр 10 мл хлороформа, полученный объединенный экстракт упаривают на водяной бане до объема - 5 мл и используют для очистки на хроматографической колонке.

2) В нижнюю часть хроматографической колонки помещают ватную пробку, вносят силикагель (высота столбика - 1 см) и на силикагель наслаивают окись алюминия (высота столбика - 2-2,5 см)

На окись алюминия помещают слой безводного сульфата натрия 3 см.

Колонку по мере наполнения обстукивают для лучшего уплотнения сорбентов.

В колонку количественно переносят упаренный до 5 мл экстракт,

дают ему впитаться и элюируют токсины 100 мл смеси хлороформ-

ацетон (9:1) под слабым разряжением, собирая элюат в колбу Бунзена.

Из колбы Бунзена элюат количественно переносят в колбу Эрленмейера на 200 мл и упаривают на водяной бане до объема 4-5 мл.

Упаренный элюат количественно переносят в мерную пробирку на 10

мл хлороформом и доводят объем до метки (основной раствор).

Полученный экстракт используют для тонкослойной хроматографии.

40