3 курс / Фармакология / ФАРМАКОЛОГИЯ_ПРЕПАРАТОВ_НА_ОСНОВЕ_ПРИРОДНЫХ_АЛЮМОСИЛИКАТОВ_И_ИХ
.pdfлетальная для самок), контрольным крысам скармливали только основной рацион, на протяжении опыта крысы обеих групп находились в одинаковых условиях содержания и кормления.
На 21 день опыта (19-21 день беременности) половину беременных са-
мок каждой группы убивали декапитацией под наркозом диэтилового эфира с соблюдением принципов гуманности, изложенных в директивах Европей-
ского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинской декларации.
Крыс вскрывали и определяли степень общей и избирательной эмбрио-
токсичности: подсчитывали количество нормально и ненормально резвив-
шихся зародышей, живых и мертвых плодов, их массу, развитие, в яичниках подсчитывали количество желтых тел, число мест имплантаций, количество мест резорбций. Другую половину самок оставляли до родов и проводили наблюдение за физическим развитием потомства до окончания вскармлива-
ния (выживаемость, масса).
По полученным данным высчитывали процент предимплантационной
(в процентном отношении разность между количеством желтых тел и коли-
чеством мест имплантаций от числа желтых тел) и постимплантационной (в
процентном отношении разность между количеством мест имплантаций и количеством живых плодов от числа имплантаций) гибели эмбрионов.
Все плоды взвешивали, затем переносили в чашку Петри с физиологи-
ческим раствором и далее при помощи бинокулярной лупы и микроскопа проводили внешний осмотр плодов. При этом пытались выявить различные аномалии глаз (анофтальмию, микрофтальмию, циклопию), мозга (экзенце-
фалию, энцефалоцелию, гидроцефалию), лицевого черепа (заячью губу, вол-
чью пасть), конечностей, пальцев, позвоночника, хвоста, передней брюшной стенки. Далее все плоды разделили на две группы, одну группу плодов фик-
сировали в жидкости Буэна, у них изучали состояние внутренних органов,
другую группу плодов зафиксировали в 96%-ном спирте для изучения воз-
можных аномалий развития скелета.
141
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
После рождения крысят у оставшихся беременных крыс определяли ко-
личество плодов, из них число живых и мертвых, устанавливали среднюю массу потомства, наличие аномалий и уродств. Наблюдение за крысятами проводили в течение 30 дней, оценивая при этом степень их физического раз-
вития (время отлипания ушей, прорезывание глаз, развитие шерстного покро-
ва). По окончании лактации часть потомства убивали, проводили внешнее и внутреннее обследование на наличие аномалий внутренних органов и скелета.
В результате проведенных исследований установили, что назначение
тиононтрита-S в субтоксической дозе не вызывает нарушение процесса оплодотворения у опытных крыс, а скармливание препарата беременным бе-
лым крысам не оказывает патологического влияния на течение беременности и эмбриогенез, не изменяет продолжительность беременности. Число желтых тел в яичниках опытных крыс в среднем на одну самку составило 10,62±053,
а у контрольных – 11,42±0,41 (таблица 32). Среднее количество мест имплан-
тации в матке в опытной группе достигало 9,86±0,47 и в контрольной группе
10,54±0,69.
Постимплантационная гибель плодов у опытных крыс составила 7,7 %,
а в контроле 8,9 %. Видимых уродств в развитии плодов, как у опытных, так и у контрольных крысят не выявляли. При сравнении массы эмбрионов в опытной группе и контроле не было обнаружено значимых отличий.
По внешним признакам развитие опытных крысят в лактационный пе-
риод не отличалось от развития контрольного молодняка. Сроки развития,
как у опытных, так и контрольных крысят существенно не различались, от-
липание ушей происходило на 4-5 день, а на 16-17 день открывались глаза,
частичный волосяной покров появлялся у всех крысят на 5-6 день рождения,
а через 16-17 дней они полностью покрывались шерстью, на 18-20 день мог-
ли принимать прикорм. Средняя масса тела одного крысенка в опытной группе существенно не отличалась от массы тела контрольных животных.
Врожденных дефектов в развитии всех крысят не отмечено.
142
Таблица 32 – Результаты изучения влияния тиононтрита-S на
репродуктивную функцию белых крыс (n=12, M±m)
|
N п/п |
Показатели |
Опыт |
Контроль |
|
|
|
|
|
|
|
Внутриутробный период |
|
|
|
1 |
Число желтых тел в яичнике |
10,62±0,53 |
11,42±0,41 |
|
2 |
Число мест имплантации в матке |
9,86±0,47* |
10,54±0,69 |
|
3 |
Процент предимплантационной смерт- |
7,2% |
7,7% |
|
ности |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
4 |
Число резорбций |
0,46 |
0,48 |
|
5 |
Кол-во живых плодов всего в одном |
9,1±0,58* |
9,6±0,61 |
|
помете |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
6 |
Число погибших плодов (на 1 самку) |
0,36 |
0,44 |
|
7 |
Процент постимплантационной смерт- |
7,7% |
8,9% |
|
ности |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
8 |
Масса эмбрионов |
4,92±0,18** |
4,88±0,20 |
|
9 |
Аномалии развития внутренних орга- |
отсутствуют |
отсутствуют |
|
нов и скелета |
|||
|
|
|
|
|
|
|
Лактационный период |
|
|
|
10 |
Число живых крысят (на одну самку) к |
8,5±0,44 |
9,0±0,47 |
|
концу лактации |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
11 |
Средняя масса 1 крысенка (г) |
5,08±0,09** |
4,96±0,12 |
|
12 |
Уродства и аномалии скелета и внут- |
отсутствуют |
отсутствуют |
|
ренних органов |
|||
|
|
|
|
|
Примечание: * - степень достоверности Р ≤ 0,05, ** - Р ≤ 0,01, *** - Р ≤ 0,001 |
Таким образом, скармливание тиононтрита-S в субтоксической дозе крысам не оказывает отрицательного влияния оплодотворяющую способность самок, на эмбриональное развитие и постнатальный период жизни плодов.
Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия нонтронита
были проведены на 12 половозрелых беспородных белых самках, которым ежедневно внутрижелудочно задавали нонтронит дозе 0,71 г/кг массы тела.
Контрольные животные никаких препаратов не получали.
В результате проведенного эксперимента установлено, что назначение нонтронита в субтоксической дозе беременным белым крысам не оказывало негативного влияния на течение беременности и ее продолжительность, а так-
же на плодовитость. Число желтых тел в яичниках опытных крыс в среднем на
143
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
одну самку составило 13,4±0,68, а у контрольных – 13,0±0,89. Среднее количе-
ство имплантационных эмбрионов в опытной группе достигало 12,8±0,66 и в контрольной группе 12,4±0,6. Постимплантационная гибель плодов у живот-
ных опытной группы достигала 4,5 %, а в контроле 4,6 %. Аномалий в разви-
тии плодов, как у опытных, так и у контрольных животных не отмечали.
Внешние признаки развития как опытных, так и контрольных крысят не раз-
личались и проходили примерно в одинаковое время, уродств и аномалий в развитии крысят не отмечено.
Во второй серии опытов влияние нонтронита на течение беременности изучали на глубокосупоросных свиноматках. С этой целью по принципу пар аналогов было сформировано 3 группы свиноматок крупно-белой породы по
3 матки в каждой, за 8-10 дней до опороса. В 1-ой группе за 8 дней до опоро-
са и 8 дней после назначали нонтронит в дозе 0,71 г/кг массы тела. Во 2-ой группе в аналогичные дни скармливали смесь макро- и микроэлементов в ре-
комендуемых дозах. Животным 3-ей группы (контрольной) лекарственные средства не назначали. На протяжении всего эксперимента следили за клини-
ческим состоянием свиноматок и народившегося молодняка, у которого учи-
тывали уродства и аномалии.
В контрольной группе от трех свиноматок было получен 31 поросенок со средней массой тела 1,25 кг, от 2-ой группы – 30 поросят со средней мас-
сой тела 1,1 кг, от маток 3-ей группы – 31 поросенок со средней массой тела
0,98 кг. Отклонений от нормы развития, наличия уродств и аномалий у поро-
сят во всех группах не отмечали. В опытных группах наблюдали более ин-
тенсивный рост поросят.
У всех свиноматок на протяжении всего периода наблюдений не регистри-
ровали существенных отклонений от нормы в поведении, общем состоянии и ап-
петите, реакции на внешние раздражители и рефлексы были сохранены. Явлений интоксикации у животных, получавших нонтронит, не наблюдали.
144
Таким образом, длительное применение нонтронита беременным жи-
вотным не оказывает повреждающего действия на эмбриональное развитие и не вызывает тератогенного эффекта.
В ходе проведения эксперимента по изучению эмбриотоксического и те-
ратогенного действия имунокора установили, что скармливание препарата в субтоксической дозе не вызывало уменьшения количества желтых тел в яични-
ках, не оказывало отрицательного влияния на оплодотворение и плодовитость,
на ростовые процессы плодов и не приводило к дисморфогенезу плодов.
В яичниках желтые тела располагались равномерно, были покрыты со-
единительной капсулой, имели округлую или овальную форму.
Значения до- и постимплантационной гибели в группе животных, полу-
чавших исследуемый препарат в дозе 0,71 г/кг массы тела, не показали значи-
мых отличий от контрольной группы. Средняя масса одного эмбриона у крыс,
получивших препарат, составила 5,73 г, а у контрольных – 5,88 г, уродств и аномалий развития у крысят не отмечено. При изучении внутренних органов и скелета эмбрионов и крысят патологических изменений не выявляли.
Таким образом, назначение имунокора самкам крыс не влияет отрица-
тельно на репродуктивную функцию и не оказывает тератогенного и эмбрио-
токсического действия.
3.2.7 Патморфология внутренних органов при применении препаратов
Изучение влияния на макро- и микроструктуры внутренних органов для изучения патогенеза интоксикации после применения исследуемых пре-
паратов были проведены на белых крысах, цыплятах-бройлерах и поросятах,
у которых изучали параметры хронической токсичности. Животные и птица были убиты быстрой декапитацией (перерезанием спинного мозга) и под-
вергнуты патологоанатомическому вскрытию.
Для гистологического исследования отбирали внутренних органов (ку-
сочки сердца, легких, печени, почек, селезенки, желудка, кишечника) и фик-
145
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
сировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. После фиксации их заливали в парафин, готовили срезы толщиной 4-6 мкм, окрашивали ге-
матоксилин-эозином и микроскопировали. Исследования проводили под микроскопом МС 300 (Австрия), увеличение х5, х10. При проведении гисто-
логических исследований учитывали наличие структурных изменений и жи-
ровой инфильтрации в паренхиме внутренних органов, считающихся харак-
терными признаками токсикоза.
Патоморфология органов при применении имунокора. Изучение влия-
ния на макро- и микроструктуры внутренних органов проведены на белых крысах, у которых изучали хроническую токсичность в максимальной дози-
ровке. Наружный осмотр убитых животных и вскрытие их не выявили види-
мых изменений покровных тканей и внутренних органов. Упитанность вы-
ражена, волосяной покров блестящий, без очагов аллопеции. Расположение внутренних органов, как у опытных, так и контрольных крыс было анатоми-
чески правильным. В плевральной и брюшной полости жидкости не обнару-
жены, серозные оболочки полостей имели ярко-розовый цвет, гладкую и бле-
стящую поверхность (рисунок 8).
Рисунок 8 – Внутренние органы при вскрытии опытной крысы.
146
Просветы трахеи и бронхов были свободны, плевра имела гладкую по-
верхность. Легкие не увеличены, симметрично расположены, ткань розового цвета. Печень с заостренными краями, плотной консистенции, темно-
вишневого цвета, капсула органа гладкая, блестящая. Сердце не увеличено,
поверхность перикарда и эпикарда блестящая, гладкая. Миокард ярко-
красного цвета, представлен правильно ориентированными пучками волокон с сохраненной поперечной исчерченностью (рисунок 9).
Рисунок 9 – Печень, легкое и сердце опытной крысы
При гистологическом исследовании у контрольных крыс выявляли ишемию сердца и геморрагический инфаркт (рисунок 10, 11).
Рисунок 10 – Ткань сердца крысы (контроль), ишемия сердца (окраска гематоксилин-эозином, ув. 10)
147
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Рисунок 11 – Ткань сердца крысы (контроль), геморрагический инфаркт
(окраска гематоксилин-эозином, ув. 10)
Печень не увеличена, с гладкой капсулой и заостренными краями. На разрезе темно-вишневого цвета, балочный рисунок хорошо выражен. Цен-
тральные вены и внутридольковые капилляры умеренно кровенаполнены
(рисунок 12).
Рисунок 12 – Ткань печени крысы (опыт), (окраска гематоксилин-эозином, ув. 10)
148
У двух контрольных крыс наблюдали жировое перерождение печени, в
отдельных гепатоцитах белковую зернистую дистрофию (рисунок 13). Гепа-
тоциты, находящиеся в состоянии жировой дистрофии, были набухшие, имели округлую форму, ядра сморщены, расположены в центральной части клеток.
Рисунок 13 – Ткань печени крысы (контроль), жировое перерождение, (окраска гематоксилин-эозином, ув. 10)
Почки не увеличены, темно-вишневого цвета, расположены симмет-
рично. Капсула почки снималась легко, корковое и мозговое вещество на разрезе хорошо различимы, слизистая лоханок гладкая, светло-розового цве-
та. У двух контрольных крысы определяли пролиферацию в почках и очаги некроза (рисунок 14, 15).
Селезенка в размере не увеличена, с гладкой капсулой. На разрезе гра-
ницы фолликулов четкие, центры пролиферации выражены хорошо.
Слизистая оболочка желудка и кишечника серо-розового цвета, без изъязвлений и кровоизлияний, хорошо развита. Дистрофических и воспали-
тельных явлений не обнаружено.
149
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Рисунок 14 – Ткань почек крысы (контроль), пролиферация (окраска ге-
матоксилин-эозином, ув. 10)
Рисунок 15 – Ткань почек крысы (контроль), некротический очаг в строме почек (окраска гематоксилин-эозином, ув. 10)
Таким образом, длительное назначение имунокора в 1/10 от макси-
мально токсической дозы, не оказывает токсического действия на внутрен-
ние органы и ткани животных и не изменяет их структуру.
Выявленные патоморфологические и гистологические изменения во внутренних органах контрольных крыс, возможно, обусловлены погрешно-
150