Глава 8. Приложения

8.2 Оборудование и безопасность

8.2.1 Основные расходные материалы, необходимые в андрологической лаборатории

Ниже приведен список расходных материалов и оборудования, необходимых андрологической лаборатории для проведения базовых исследований, описанных в данном руководстве.

Если вам требуется помощь в поиске источника любых из нижеследующих расходных материалов, обратитесь к опубликованной научной литературе, ссылки на которую приведены в данном руководстве или в других источниках.

8.2.1.1 Общее оборудование и расходные материалы

•Лабораторные весы (для взвешивания сосудов с эякулятом)

•Лабораторные столы с непромокаемой рабочей поверхностью

•Контейнеры:

•для утилизации острых предметов

•для опасных отходов

•Экземпляр Руководства по лабораторной биобезопасности (48)

•Морозильная камера для низкотемпературного замораживания (–20°C)

•Дезинфицирующее средство или гипохлорит натрия, 0,1% (v/v) и 1% (v/v) в очищенной воде

•Дезинфицирующее мыло или антисептическое средство для очищения кожи

•Одноразовые перчатки

•Раствор или средство для промывания глаз

•Аптечка первой помощи

•Вытяжной шкаф для хранения токсичных реактивов, химикатов и красителей и работы с ними

•Холодильник

•Душ.

249

Лабораторное руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека, шестое издание

8.2.1.2 Расходные материалы и оборудование для базового исследования эякулята

•Центрифуги:

•стендовая центрифуга, способная достигать 300–500g (для обычной работы с эякулятом и мочой), 1000g (для маркеров эякулята) и 2000g (для вязких образцов). В центрифуге должна быть предусмотрена возможность использования герметичных емкостей для минимизации риска образования аэрозолей.

•высокоскоростные центрифуги, достигающие 3000g (для приготовления образцов с предполагаемой азооспермией) или 16 000g (для получения семенной плазмы без сперматозоидов). В центрифугах должна быть предусмотрена возможность использования герметичных емкостей для минимизации риска образования аэрозолей.

•Пробирки для разведения

•Фильтровальная бумага, 90 г/м2 (для фильтрования красителей)

•Гемоцитометры: усовершенствованный гемоцитометр Нейбауэра или альтернативный гемоцитометр, глубиной 100 мкм с толстым покровным стеклом (толщина № 4, 0,44 мм)

•Инкубатор (37°C)

•Лабораторная пленка, самогерметизирующаяся, гибкая

•Лабораторный многоклавишный счетчик (шесть или девять клавиш)

•Предметные стекла для микроскопа:

•с матовой или текстурированной поверхностью для записей и покровными стеклами (толщина № 1,5, 0,16–0,19 мм)

•обычные предметные стекла для размазывания капли эякулята по поверхности другого стекла в целях получения мазков эякулята

•Ручки/карандаши:

•для письма на матовых предметных стеклах подходит графитовый карандаш мягкости HB (по американской системе № 2)

•несмываемый маркер

•Индикаторная бумага для определения pH (диапазон 6–10)

•Фазово-контрастный микроскоп (для оценки концентрации, подвижности и морфологии сперматозоидов) и следующие принадлежности (см.

приложение 8.3 на стр. 257):

•объективы ×10, ×20 (или ×25), ×40 (или ×63) с положительной фазой, объектив с масляной иммерсией ×100

250

Глава 8. Приложения

•широкопольный окуляр ×10 (или ×12,5)

•окулярная сетка (для определения области, изучаемой при оценке подвижности сперматозоидов)

•объект-микрометр (для морфологической оценки сперматозоидов)

•подогреваемый предметный столик (по желанию, но настоятельно рекомендуется; для измерения скорости сперматозоидов)

•Пипетки и наконечники для пипеток:

•пипетки Пастера с латексными дозаторами, пластиковые одноразовые пипетки для переноса материала или автоматические пипетки для перемешивания эякулята

•пипетки с вытеснением воздуха

•пипетки с прямым вытеснением для отмеривания 10–100 мкл

•Формы для записи результатов исследования эякулята и слизи (см.

приложение 8.5 на стр. 270)

•Миксеры для образцов:

•двухмерный шейкер или вращающееся колесо для перемешивания эякулята (по желанию)

•вихревой смеситель для разведенных и фиксированных образцов эякулята

•Контейнеры для сбора эякулята:

•одноразовые контейнеры с широким горлом и крышками

•планшет с лунками, фарфоровый или из боросиликатного стекла (для эозин-нигрозинового теста)

•бумажное полотенце, безворсовое.

8.2.1.3 Дополнительное оборудование

•Аналитические весы для взвешивания химических веществ

•Оборудование для криоконсервации (по желанию)

•Презервативы, без спермицидов, нетоксичные (по желанию)

•Флуоресцентный микроскоп и объективы (по желанию; для высокочувствительных измерений концентрации сперматозоидов, тестов на акросомную реакцию)

•Инкубатор (37°C), с контролируемым процентным содержанием (v/v) CO2 (по желанию)

251

Лабораторное руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека, шестое издание

•Люминометр (по желанию; для исследования на активные формы кислорода (АФК))

•Ручки/карандаши: восковой/жирный карандаш (ручка для обозначения границ) (по желанию; для ограничения области нанесения раствора антител на предметное стекло)

•pH (ISFET) электрод (по желанию; для вязких образцов эякулята)

•Оборудование для микроскопа

•Объектив с отрицательной фазой ×40 (по желанию; для эозинового теста на жизнеспособность)

•England Finder (предметное стекло с сеткой; по желанию; для оценки КК)

•Герметизирующая лента для 96-луночных планшетов (по желанию; для исследования на фруктозу)

•Камеры для предметных стекол, одноразовые (по желанию; для приготовления образцов для КК)

•Спектрофотометр (по желанию; для биохимических анализов эякулята)

•Объект-микрометр (по желанию; для морфологической оценки сперматозоидов)

•Секундомер (по желанию; для приготовления образцов для КК)

•Нагревательнаяповерхность,настольная(пожеланию;дляпредварительного нагрева предметных стекол при оценке подвижности сперматозоидов)

•Прибор CASA (по желанию).

8.2.1.4 Химические вещества

•Краситель по Папаниколау (рекомендуется)

•Антитела (по желанию; CD45 для лейкоцитов)

•Противовспениватель (по желанию; для приготовления образцов для КК)

•Набор для определения клеточной пероксидазы (по желанию)

•Среда для криоконсервации (по желанию)

•Средадляградиентаплотности(пожеланию;дляпрепаратовсперматозоидов)

•Набор для оценки содержания фруктозы (по желанию)

•Набор для определения нейтральной -гликозидазы (по желанию)

•Вазелиновое масло (по желанию)

252

Лабораторное руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека, шестое издание

8.2.3 Потенциальные биологические риски в андрологической лаборатории

Жидкости организма человека, такие как эякулят, являются потенциально инфекционными, и их следует обрабатывать и утилизировать с особой осторожностью. Для андрологической лаборатории наиболее опасными инфекционными микроорганизмами, которые могут быть обнаружены в семенной жидкости, являются ВИЧ и вирусы гепатита В и С (HBV и HCV). Сотрудники лаборатории должны относиться ко всем биологическим образцам как к потенциально инфекционным и принимать соответствующие меры предосторожности при работе с ними.

8.2.4 Процедуры обеспечения безопасности для сотрудников лаборатории

•Общая рекомендация заключается в том, что сотрудники лаборатории, работающие с образцами человека, должны быть иммунизированы против гепатита В.

•В андрологической лаборатории нельзя есть, пить, курить, наносить косметику или хранить продукты питания.

•Пипетирование ртом не допускается. При обращении с жидкостями всегда следует использовать приборы для механического пипетирования.

•Все сотрудники лаборатории должны носить лабораторную одежду (халат, одноразовый халат или другую одежду, предназначенную для работы в лаборатории), ограниченную рамками лаборатории. Сотрудники должны надевать одноразовые перчатки (резиновые, латексные или виниловые, опудренные или неопудренные), в частности при работе со свежими или замороженными образцами эякулята, семенной плазмы или другими биологическими образцами и любыми контейнерами, которые контактировали с ними. Перчатки необходимо снимать и выбрасывать при выходе из лаборатории и при пользовании телефоном, компьютером или другим оборудованием. Перчатки нельзя использовать повторно.

•Персонал должен регулярно мыть руки, особенно перед выходом из лаборатории, после работы с образцами и после снятия халатов и перчаток.

•Персонал должен принимать меры предосторожности для предотвращения случайных травм острыми инструментами, которые могут быть загрязнены эякулятом, и не допускать контактов эякулята с открытой кожей, порезами, ссадинами или местами других повреждений.

•Следует принимать меры для предотвращения и, при необходимости, локализации разлива образцов эякулята, крови или мочи.

•Все острые предметы (иглы, лезвия и т.д.) после использования необходимо помещать в маркированный контейнер. Этот контейнер следует герметично закрыть до его полного заполнения и утилизировать аналогично другим опасным лабораторным предметам.

254

Глава 8. Приложения

•Все потенциально опасные предметы (перчатки, контейнеры для эякулята) должны быть собраны и утилизированы надлежащим образом.

•Все сотрудники, выполняющие процедуры, которые потенциально могут приводить к образованию аэрозолей или капель, например вихревое перемешивание и центрифугирование открытых контейнеров, должны надевать лицевые или хирургические маски. Не следует с силой выдавливать из пипеток последние капли образцов эякулята, поскольку это может приводить к образованию капель или аэрозолей.

•При необходимости, например при работе с жидким азотом (раздел 8.2.6 на стр. 256), сотрудники должны надевать закрытые защитные очки, изолирующие перчатки, криофартук и закрытую обувь. Важно, чтобы эти предметы подходили всем сотрудникам по размеру.

8.2.5 Процедуры обеспечения безопасности для лабораторного оборудования

Рабочие поверхности и емкости многоразового пользования, которые контактировали с эякулятом или другими биологическими образцами, должны быть стерилизованы или дезинфицированы. Необходимо выполнять нижеследующие процедуры.

8.2.5.1 Ежедневные процедуры по завершении исследований

•Вымойте рабочее место дезинфицирующим средством, например гипохлоритом натрия 0,1% (1 г/л) или аналогичным дезинфицирующим средством, подождите не менее 1 часа (или оставьте на ночь) и затем смойте дезинфицирующее средство водой.

•Замочите счетные камеры и покровные стекла в гипохлорите натрия 0,1% (1 г/л) или аналогичном дезинфицирующем средстве на ночь и затем смойте дезинфицирующее средство водой.

8.2.5.2 После разлива

•Если внешняя поверхность контейнера для образцов загрязнена, промойте ее дезинфицирующим средством, например гипохлоритом натрия 0,1% (1 г/л) или аналогичным дезинфицирующим средством, и затем ополосните водой.

•Сразу же после разлива какой-либо жидкости обработайте рабочую поверхность дезинфицирующим средством, например гипохлоритом натрия 1,0% (10 г/л) или аналогичным дезинфицирующим средством, подождите не менее 4 часов и затем смойте дезинфицирующее средство водой.

255

Лабораторное руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека, шестое издание

8.2.5.3 Тепловая инактивация ВИЧ в сосудах для сбора эякулята

При необходимости тепловая инактивация ВИЧ в емкостях для сбора эякулята может быть достигнута следующими способами:

•стерилизация в сушильном шкафу в течение не менее 2 часов при температуре 170°C (340°F): накройте алюминиевой фольгой перед нагревом и дайте остыть перед обработкой;

•стерилизация паром (автоклавирование) в течение не менее 20 минут при температуре 121°C (250°F) при давлении 101 кПа (15 фунтов на кв. дюйм, или 1 атмосфера) выше атмосферного давления;

•непрерывное кипячение в течение 20–30 минут.

8.2.6 Меры предосторожности при работе с жидким азотом

•Жидкий азот опасен. При работе с ним всегда принимайте меры предосторожности, используйте только одобренные емкости и не пытайтесь герметически закрывать контейнеры. Для извлечения предметов, погруженных в жидкий азот, используйте щипцы.

•Используйте лицевой щиток или закрытые защитные очки, надевайте изолирующие перчатки, криофартук и закрытую обувь. Все эти предметы должны быть доступны в диапазоне размеров, необходимых для всех сотрудников, работающих в данной области.

•При разливе на поверхности жидкий азот стремится покрыть ее полностью и, тем самым, охлаждает большую площадь. Предметы, мягкие и гибкие при комнатной температуре, при температуре жидкого азота обычно становятся твердыми и хрупкими.

•Экстремально низкие температуры могут привести к серьезным травмам. Попадание жидкости на кожу может вызвать эффект, подобный ожогу. Газ, выделяющийся из жидкости, очень холодный. Он может не оказать воздействия на кожу лица и рук, но деликатные ткани, такие как ткани глаз, могут быть повреждены даже в результате его кратковременного воздействия.

•Держитесь на безопасном расстоянии от кипящего и разбрызгивающегося жидкого азота и выделяющегося из него холодного газа. При заполнении теплого контейнера жидким азотом и погружении в него предметов всегда происходят кипение и разбрызгивание. Для их минимизации всегда выполняйте эти действия медленно.

•Избегайтеприкосновенийкнеизолированнымтрубам.Никогданедопускайте контакта незащищенной части тела с трубами или сосудами, содержащими жидкий азот. Экстремально холодный металл может быстро прилипнуть к телу, и попытки отсоединить его приведут к разрывам плоти.

•Работайте в хорошо проветриваемых помещениях. Небольшое количество жидкого азота образует большое количество газа (при комнатной температуре примерно в 700 раз больше объема жидкости). При испарении газа из жидкого азота в закрытом помещении процентное содержание

256