32. Опишите метод определения количества соматических клеток с помощью прибора «Соматос».

Вискозиметрический анализатор молока "Соматос-Мини" предназначен для контроля качества молока и определения количества соматических клеток в молоке по условной вязкости, измеряемой по времени вытекания контролируемой пробы через капилляр.

Принцип работы «Соматос-Мини» слишком прост

Анализатор соматических клеток в молоке работает по принципу вискозиметра:

Залейте в колбу 5 мл раствора препарата «Мастоприм»

Залейте в колбу 10 мл пробы молока

Нажмите «Ввод», подождите 2 минуты, происходит перемешивание и истечение смеси

Смотрите результат на индикаторе: время истечения смеси и количество соматических клеток в молоке

32. Опишите метод определения количества соматических клеток с применением микроскопа

Сущность метода

Анализируемую пробу молока распределяют тонким слоем на предметном стекле, получая мазок. Мазок подсушивают и окрашивают, затем под микроскопом подсчитывают количество окрашенных клеток. Для определения количества клеток в 1 см пробы число клеток, подсчитанное на четко установленной площади, умножают на рабочий коэффициент.

Реактивы

Используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если нет других указаний, дистиллированную или деминерализованную воду или воду, эквивалентную по чистоте.

Растворы красителей

Модифицированный окрашивающий раствор Newman-Lampert: Этанол с объемной долей спирта 95%, Тетрахлорэтан, Метиленовый синий, Ледяная уксусная кислота.

Окрашивающий раствор бромида этидия

Фосфатно-буферный раствор (PBS)

Подготовка к анализу

До начала определения или консервации анализируемые пробы хранят при температуре (4±2) °C.

Определение проводят в течение 6 ч после отбора проб.

Анализируемую пробу (см. 7.1) нагревают на водяной бане (см. 5.1) до температуры 40°C. Пробу тщательно перемешивают. Охлаждают пробу до температуры, на которую калиброван микрошприц (см. 5.4), например до 20°C.

Разводят анализируемые пробы с предполагаемым количеством соматических клеток выше 1000000 клеток/см фосфатно-буферным раствором (см. 4.2), чтобы получить количество соматических клеток около 500000 клеток/см в каждой разведенной анализируемой пробе.

Проведение определения

Для каждой анализируемой пробы приготовляют как минимум два мазка и отбирают лучший из них (например, мазок, не поврежденный в процессе окрашивания). Погружают предметные стекла в этанол (95% по объему). Стерилизуют пламенем и охлаждают.

Приготовление мазка и окрашивание

Приготовление мазка и окрашивание окрашивающим раствором Newman-Lampert

Микрошприцем отбирают 0,01 мл анализируемой пробы (разведенной соответствующим образом). Промывают микрошприц анализируемой пробой. При необходимости тщательно и аккуратно очищают внешнюю сторону микрошприца, которая контактировала с анализируемой пробой.

Пробу помещают на чистое предметное стекло площадью 1 см². Используя иглу, равномерно распределяют анализируемую пробу на всей указанной поверхности, при этом контролируют, чтобы площадь, прилегающая к внешним границам, была также равномерно покрыта. Мазок подсушивают при комнатной температуре до состояния полной сухости.

Погружают высушенный на предметном стекле мазок в модифицированный окрашивающий раствор Newman-Lampert) не менее чем на 15 мин. Мазок высушивают при комнатной температуре.

Затем мазок осторожно промывают водопроводной водой для удаления излишков краски. Опять высушивают и хранят, защищая от пыли.

Окрашивание с использованием окрашивающего раствора этидиум бромида и приготовление мазка

Смешивают 1 мл подготовленной анализируемой пробы с 1 мл окрашивающего рабочего раствора бромида этидия в пробирке. Смесь хранят в защищенном от света месте. Нагревают пробирку на водяной бане (см. 5.1) при температуре 50°C в течение 3 мин. Охлаждают до комнатной температуры.

При помощи микрошприца отбирают 0,01 мл смеси. Микрошприц промывают смесью. При необходимости тщательно и аккуратно очищают внешнюю сторону микрошприца, которая контактировала со смесью.

Помещают смесь на чистое предметное стекло площадью 1 см². При помощи иглы равномерно распределяют анализируемую пробу по всей указанной поверхности, при этом контролируют, чтобы площадь, прилегающая к внешним границам, была также равномерно покрыта. Мазок подсушивают при комнатной температуре до состояния полной сухости.

Решите следующие задачи:

1. Составьте среднесуточную пробу молока в количестве 250мл. Если от коровы «Сирень» было надоено: утром 12 л молока, в обед ‒ 18 л, вечером ‒ 15 л.

Решение:

1)1200+1800+1500=4500 кг;

2)250:4500=0,055мл/кг;

3)V(У)=0,055*1200=66мл 4)V(О)=0,055*1800=99мл 5)V(В)=250-66-99=85мл 6)V(ср)=66+99+85=250мл.

2. Составьте среднесуточную пробу молока в количестве 300мл. Если от группы коров было надоено: утром 1900 кг молока, в обед ‒ 2300 кг, вечером ‒ 2200 кг.

Решение: 1) 1900+2300+2200=6400кг(объем);

2)300:6400=0,0469мл/кг;

3)V(У)=1900*0,0469=89,11мл

4)V(В)=300-89,11-107,87=103,02мл

5)V(О)=2300*0,0469=107,87мл 6)V(ср)=89,11+103,02+107,87=300мл

3. СПК «Дружба» на молокозавод доставило молоко в двух цистернах: в одной было 9 т молока, а в другой 5,5 т. Составьте среднесуточную пробу молока в количестве 300 мл.

Решение: 1)9000+5500=14500кг

2)300:14500=0,021мл/кг

3)V(1)=0,021*9000=189мл

4)V(2)=250-189=61мл.

5)V(ср)=189+61=250мл.

4. Какой будет плотность молока при 20°С, если показания ареометра следующие: температура ‒ 16°С; плотность ‒ 1,030 г/см³.

Решение: 1) 20-16=4℃;

2)4*0,2=0,8 o А;

3) p(ист)=30-0,8=29,2 или 1029,2кг/м3.

5. Температура молока, доставленного на молокозавод равна 17°С, плотность 1029,5 кг/м³. По таблице, определите, чему равна истинная плотность молока в кг/м³.

Ответ:

p (ист)=1028,0 кг/м3

6. С помощью таблицы определите истинную плотность молока в г/см³ и кг/м³, если его температура составила 22°С, плотность 1,030 г/см³.

Ответ:

p (ист)= 1,036г/см3, 1036кг/м3.

7. Определите свежесть двух проб молока методом предельной кислотности (со щелочью), если на титрование 10 мл молока пошло 2 мл 0,1 н. раствора щелочи, а на 5 мл – 1 мл.

Решение:

На 10 мл-20 °Т, а на 5мл-10 °Т, но если приводить до 10 мл, то тоже 20 °Т.

8. Какова кислотность молока, если на титрование 5 мл его пошло 0,9 мл 0,1 – нормального раствора щелочи?

Решение: На 5 мл ушло 0,9 мл щёлочки, на 10 ушло в 2 раза больше. Кислотность молока:1,8*10=18°Т

9. При определении кислотности без воды на титрование 10 мл молока пошло 2,1 мл 0,1– нормального раствора щелочи. Какова кислотность молока?

Ответ:

Кислотность 21 °Т

10. При определении кислотности молока по методике на его титрование пошло 1,8 мл 0,1– нормального раствора щелочи. Какова истинная кислотность молока?

Ответ:

Кислотность 18 °Т