Полезные материалы за все 6 курсов / Ответы к занятиям, экзаменам / 3_Микробный_фактор_и_инфекционный_процесс
.pdfТаблица 1 – Виды противоинфекционного иммунитета по происхождению
Врожденный |
|
Адаптивный (приобретенный) |
|
|
|
||||
|
естественный |
|
искусственный |
||||||
|
|
|
|
|
|||||
видовой – гене- |
|
постинфекционный – после перене- |
активный |
||||||
тически |
закоди- |
|
сенного инфекционного заболевания. |
(поствакцинальный) – |
|||||
рован и переда- |
|
Бывает стерильным и нестерильным: |
возникает |
в резуль- |
|||||
ется |
по |
наслед- |
|
стерильный – сохраняется длитель- |
тате введения в ор- |
||||
ству |
(например: |
|
но после полного микробиологиче- |
ганизм вакцин и ана- |
|||||
видовая |
невос- |
|
ского выздоровления; |
характерен |
токсинов |
|
(препара- |
||
приимчивость |
|
для большинства инфекционных за- |
ты, содержащие ан- |
||||||
человека к чум- |
|
болеваний |
|
тигены |
возбудите- |
||||
ке собак, имму- |
|
нестерильный – сохраняется до тех |
лей). |
Формируется |
|||||
нитет животных |
|
пор, пока в организме присутствует |
через 7-10 дней по- |
||||||
к сифилису) |
|
возбудитель; характерен для сифи- |
сле введения препа- |
||||||
|
|
|
|
лиса, туберкулеза, лепры |
|
рата, |
сохраняется в |
||
|
|
|
|
трансплацентарный – передача ан- |
течение |
нескольких |
|||
|
|
|
|
тител (IgG) от матери к плоду через |
лет |
|
|
|
|
|
|
|
|
плаценту |
|
пассивный – возни- |
|||
|
|
|
|
алиментарный – передача антител (в |
кает |
в |
|
результате |
|
|
|
|
|
основном секреторных IgA) ребенку с |
введения в организм |
||||
|
|
|
|
грудным молоком при естественном |
иммунных |
сыворо- |
|||
|
|
|
|
вскармливании |
|
ток и иммуноглобу- |
|||
|
|
|
|
латентный – формируется в резуль- |
линов |
|
(препараты, |
||
|
|
|
|
тате взаимодействия макроорганизма |
содержащие готовые |
||||
|
|
|
|
с малыми дозами антигена в природ- |
антитела). |
Создается |
|||
|
|
|
|
ных очагах инфекции (например, |
сразу после введения |
||||
|
|
|
|
клещевой энцефалит). Латентной им- |
препарата, |
сохраня- |
|||
|
|
|
|
мунизации подвержен также меди- |
ется в течение 1 ме- |
||||
|
|
|
|
цинский персонал инфекционных от- |
сяца |
|
|
|
|
|
|
|
|
делений и бактериологических лабо- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
раторий |
|
|
|
|
|
|
4. |
Основные механизмы противоинфекционного иммунитета. |
|||||||
|
|
|
|
Иммунитет |
|
|
|
|
|
|
|
Врожденный |
Адаптивный |
|
|
||||
|
физиологический |
клеточный |
|
|
|
||||
|
клеточный |
|
гуморальный |
|
|
|
|||
|
гуморальный |
|
|
|
|
|
11
1. Физиологический (врожденный) механизм обусловлен следующими факторами:
выделением микробов из организма при кашле, чихании, с мочой, испражнениями, секретами потовых и сальных желѐз;
механическими барьерами (кожа, слизистые оболочки) на пути проникновения микробов в организм;
бактерицидными свойствами кожных покровов и желудка за счет кислой реакции среды; колонизационной резистентностью кожи и слизистых оболочек открытых
полостей организма за счѐт резидентной микробиоты; барьерными функциями лимфатических узлов; лихорадкой, воспалением – как защитными реакциями.
2.Клеточный (врожденный) механизм обусловлен действием естественных киллеров (NК-клетки, natural killer (англ.)) и фагоцитов. NК-клетки составляют около 10% всех лимфоцитов крови. Это крупные лимфоциты, содержащие много гранул белков перфоринов и гранзимов. Мишенью для NК-клеток является любая клетка организма, инфицированная бактериями, вирусами, простейшими и утратившая характерные для организма маркеры «своего» – молекулы главного комплекса гистосовместимости (МНСI). В этих случаях NКклетка осуществляет так называемый контактный цитолиз клетки-мишени, выбрасывая из гранул активные молекулы перфоринов и гранзимов. Перфорины образуют поры в мембране клетки-мишени, а гранзимы вызывают ее апоптоз.
Клеточный (адаптивный) механизм обусловлен действием цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) (см. занятие №3).
3.Гуморальный механизм подразделяют на:
специфический (адаптивный) – выработка антител (см. занятие №2); неспецифический (врожденный) – обусловлен рядом факторов иммунитета, присутствующих в сыворотке крови.
5. Гуморальные неспецифические факторы врожденного иммунитета:
Комплемент – подробно рассмотрен ниже (стр.13).
Дефензины – пептиды, создающие поры в оболочке бактерий. Продуцируются нейтрофилами и эпителиальными клетками ЖКТ и дыхательных путей.
Лизоцим синтезируется лейкоцитами и содержится в слезной жидкости, слюне, крови, грудном молоке и др. Представляет собой фермент мурамидазу, который разрушает пептидогликан (муреин) клеточной стенки бактерий, что приводит к их лизису. Наибольшую активность лизоцим проявляет в отношении грамположительных бактерий, обладает также противогрибковой активностью.
Трансферрин относится к β-глобулинам сыворотки крови. Благодаря его способности связывать железо, попавшие в кровь микробы оказываются в ус-
12
ловиях пониженного содержания железа, необходимого для их роста и жизнедеятельности.
Белки острой фазы воспаления:
С-реактивный белок – вырабатывается в печени в ответ на повреждение тканей и клеток, активирует комплемент, стимулирует фагоцитоз, является индикатором воспаления; маннозосвязывающий белок – активирует комплемент;
ЛПС-связывающий белок – активирует макрофаги.
Интерфероны – гликопротеины, которые могут быть синтезированы любыми клетками организма (в большей степени – лейкоцитами) в ответ на внедрение вирусов. Более подробно интерфероны будут рассмотрены в разделе «Введение в вирусологию. Бактериофаги. Генетика и изменчивость бактерий».
6.Фагоцитоз. Стадии фагоцитоза. Завершенный и незавершенный фагоцитоз.
В1883 г. И.И. Мечников впервые обнаружил способность некоторых клеток макроорганизма поглощать, переваривать и очищать организм от инородных тел, в том числе микробов и продуктов распада клеток. Это явление было названо «фагоцитозом», а клетки – «фагоцитами». В процессе фагоцитоза участвуют гранулоциты крови (в основном, нейтрофилы), тканевые макрофаги, эпидермоциты, эпителиоидные клетки и некоторые другие.
Стадии фагоцитоза:
1.Хемотаксис – приближение фагоцита к микробам;
2.Адгезия микробов на фагоците;
3.Поглощение фагоцитом микробов. Внутри фагоцита микробы погибают под действием активных форм кислорода (О2-, Н2О2), а также кислороднезависимых факторов (лизоцим, катионные белки и др.);
4.Внутриклеточное переваривание убитых микроорганизмов с помощью ферментов лизосом.
Возможны два основных исхода фагоцитоза:
завершенный – когда микробы внутри фагоцита погибают и полностью перевариваются; незавершенный – при котором микробы не погибают, а размножаются в
фагоцитах (при туберкулезе, гонорее, менингококковой инфекции др.).
7. Комплемент как защитная система организма, пути его активации.
Комплемент (complement (лат.) – дополнение) – комплекс сывороточных белков, которые последовательно активируются и вызывают лизис бактерий (бактериолиз) и других чужеродных клеток (цитолиз).
13
Функции комплемента: лизис бактерий и других чужеродных клеток, усиление фагоцитоза, участие в аллергических реакциях немедленного типа.
Комплемент (С) состоит из 9 белковых компонентов (фракций) – от С1 до С9. Кроме того, первый компонент (С1) состоит из трѐх подфракций.
Все компоненты комплемента можно условно разделить на три блока:
I блок – распознающий (С1 с подфракциями); II блок – активирующий (С2 – С4);
III блок – мембраноатакующий (С5 – С9).
При появлении в организме микробов или их продуктов запускается активация комплемента по типу каскадной реакции.
Процесс активации и самосборки системы комплемента может запускаться тремя путями, получившими названия классический, лектиновый и альтернативный (рис.1) и всегда заканчивается образованием мембраноатакующего комплекса.
КЛАССИЧЕСКИЙ |
ЛЕКТИНОВЫЙ |
АЛЬТЕРНАТИВНЫЙ |
|
Комплекс |
Поверхность микроба |
Поверхность микроба |
|
«антиген + антитело» |
(манноза) |
(эндотоксин) |
|
|
связывается |
связывается |
связывается |
|
С1 |
маннозосвязывающий |
В + D + Р |
|
|
лектин |
|
|
|
|
|
С4 |
С2 |
|
|
|
С3 |
|
С3 |
С5 С6 С7
С8 С9 бактериолиз, цитолиз
Рисунок 1 – Пути активации комплемента
Классический путь активации комплемента. В нем участвуют все ком-
поненты комплемента. Инициатором активации классического пути является
14
иммунный комплекс «антиген + антитело». Мембраноатакующий блок образует в мембране клетки-мишени многочисленные поры. Это приводит к выходу содержимого клетки и ее гибели.
Лектиновый путь активации комплемента запускается поверхностными полисахаридами бактерий и грибов, содержащими маннозу. Манноза распознается циркулирующим в крови белком, который называется маннозосвязывающий лектин. Этот белок активирует С4-С2 фракции комплемента. Далее активация совпадает с классическим путем.
Альтернативный путь активации комплемента в отличие от классиче-
ского пути активируется не иммунным комплексом, а отдельными компонентами микробных клеток. В нем не участвуют фракции С1, С4 и С2. Их функции выполняют сывороточные белки: факторы В, D и пропердин (Р). Каскадная цепная реакция при альтернативном пути начинается с взаимодействия микробного антигена (например, липополисахарида) с факторами В, D и Р, с последующей активацией компонента С3. В дальнейшем все этапы активации комплемента осуществляются в той же последовательности, как при классическом пути.
На ранних этапах инфекции, когда нет еще комплексов Аг+Ат , лизис бактерий осуществляется при активации комплемента лектиновым и альтернативным путѐм. По мере накопления антител и образования иммунных комплексов большее значение приобретает классический путь активации.
Практическая работа.
1.Способы выявления ферментов инвазии (плазмокоагулаза, лецитиназа, ДНК-аза) у стафилококков (демонстрация).
2.Определение наличия гемолизинов (экзотоксинов) у стафилококков (демонстрация).
15
Занятие № 2
Тема. Антигены. Антитела. Серологические реакции.
Цель занятия. Изучить характеристику антигенов и антител. Изучить поста-
новку и учет простых (реакция агглютинации, реакция преципитации) и слож-
ных (реакция нейтрализации, реакция непрямой гемагглютинации) двухкомпо-
нентных серологических реакций. Изучить постановку и учет трехкомпонент-
ных серологических реакций (реакция связывания комплемента, реакция имму-
нофлюоресценции, иммуноферментный анализ).
I. Теоретические знания:
1. Антигены, их признаки, классификация.
2. Антитела (иммуноглобулины).
3. Серологические реакции. Классификация серологических реакций.
II.Практические навыки:
1.Изучить схему постановки и учета реакции агглютинации на предметном стекле.
2.Учет реакции преципитации в геле для определения токсигенности дифте-
рийной культуры.
3.Учет реакции связывания комплемента.
16
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ
1. Антигены, их признаки, классификация.
Антигены – это генетически чужеродные вещества, которые вызывают в организме иммунный ответ, направленный на их устранение: образование антител и активацию лимфоцитов. Антигены способны специфически взаимодействовать с антителами и активированными лимфоцитами.
Антиген состоит из 2 частей: высокомолекулярного носителя – шлеппера (schlepper (англ.) – тягач) и низкомолекулярных антигенных детерминант (эпитопов). Носитель чаще является белком, а детерминантами могут быть простые химические группировки (кислотные радикалы, дипептиды и др.).
Признаки антигенов:
1.Иммуногенность – потенциальная способность антигена вызывать иммунный ответ в организме.
Иммуногенность определяется:
-степенью чужеродности антигена по отношению к макроорганизму;
-молекулярной массой и химической природой носителя (шлеппера). Наиболее выраженной иммуногенностью обладают белки.
2.Антигенность – способность антигена специфически активировать компоненты иммунной системы (антитела, Т-лимфоциты) и специфически взаимодействовать с ними.
3. Специфичность – определяется только эпитопами антигена. Один антиген может иметь несколько эпитопов.
Классификация антигенов по иммунологической активности:
полноценные антигены обладают иммуногенностью и антигенностью. По химической природе это белки или комплексы белков с липидами, полисахаридами, нуклеиновыми кислотами.
неполноценные антигены (гаптены) не обладают иммуногенностью и самостоятельно не вызывают иммунного ответа, но могут взаимодействовать с антителами или активированными лимфоцитами. При соединении с каким-либо белком, присутствующим в организме, гаптены становятся полноценными антигенами и вызывают иммунный ответ в организме. Причем, антитела, образовавшиеся к комплексу «белок + гаптен», реагируют не только с этим полноценным антигеном, но и со свободным гаптеном, не соединенным с белком. Примеры гаптенов: липиды, нуклеиновые кислоты, антибиотики и др.
Антигенная структура бактерий и еѐ диагностическое значение.
О-антиген – соматический, связан с клеточной стенкой, термостабильный. Его основу составляет липополисахарид. У грамотрицательных бактерий О-антиген является эндотоксином.
Н-антиген – жгутиковый, по химической природе белок, термолабильный.
17
К-антигены – капсульные (у капсульных бактерий) и оболочечные (у грамотрицательных бактерий). Эти антигены располагаются на поверхности клеточной стенки. По химической природе чаще полисахариды, реже полипептиды с разной степенью термостабильности.
Экзотоксин – белок.
Диагностическое значение антигенной структуры бактерий: для идентификации возбудителей по антигенным свойствам в серологических реакциях.
Антигены бактерий по функциональному значению:
1.Протективные антигены – первыми распознаются иммунной системой, т.к. обладают высокой иммуногенностью. Благодаря этому развивается полноценный иммунный ответ, защищающий организм от микроба в целом. Они различаются по химической природе и локализации в микробной клетке. Благодаря обнаружению и изучению протективных антигенов у патогенных микроорганизмов создаются высокоэффективные вакцины, содержащие эти антигены и формирующие прочный искусственный иммунитет.
2.Перекрестно реагирующие антигены – имеют общие эпитопы для кле-
ток микроорганизма и тканей макроорганизма. Возбудитель дизентерии имеет перекрестные антигены с тканью кишечника, стрептококки – с тканью сердечной мышцы, почек и др. На эти антигены не вырабатываются антитела, не формируется иммунитет, поэтому они являются факторами патогенности возбудителей инфекционных заболеваний.
Положительная роль перекрестно реагирующих антигенов проявляется в возможности формирования симбионтной микробиоты организма человека из непатогенных и условно-патогенных микробов, которые имеют эти антигены.
2.Антитела (иммуноглобулины).
Антитела (Ig) – высокоспециализированные белки, которые вырабатываются в ответ на появление антигена в организме и взаимодействуют с этим антигеном, образуя иммунный комплекс.
Иммуноглобулины вырабатываются плазматическими клетками и циркулируют в крови и других биологических жидкостях организма.
Основная функция молекул Ig – специфическое распознавание чужеродных антигенов и связывание с ними. Это приводит к удалению микробов и/или их токсинов из организма. Некоторые антитела специфически метят антигены и делают их более доступными для уничтожения фагоцитами. Эта функция называется «опсонизация» – усиление фагоцитоза.
Существует 5 классов иммуноглобулинов: IgМ, IgG, IgА, IgЕ, IgD. Основной структурной единицей всех классов иммуноглобулинов является IgG.
Структура и свойства молекулы IgG (рис. 2).
Молекула иммуноглобулина G состоит из двух идентичных лѐгких (L) и двух тяжѐлых (H) полипептидных цепей, различающихся по длине и молеку-
18
лярной массе. Тяжелые и легкие цепи связаны между собой попарно дисульфидными (S-S) связями.
Каждая из цепей имеет вариабельные и константные участки. Легкая цепь имеет один вариабельный участок (VL) и один константный участок (CL).
Тяжелая цепь имеет один вариабельный участок (VH) и три константных участка (CH1, CH2, CH3). Константные участки CH2 и CH3 формируют Fcфрагмент. Этот фрагмент связывает комплемент, фиксирует молекулу иммуноглобулина на мембранах клеток и обеспечивает проникновение IgG через плаценту.
Вариабельные участки легких и тяжелых цепей формируют два активных центра, вступающих во взаимодействие с эпитопами антигена.
В месте перегибов тяжѐлых цепей находятся шарнирные участки, что придаѐт молекуле иммуноглобулина гибкость при взаимодействии с антигеном.
АКТИВНЫЕ ЦЕНТРЫ
ШАРНИРНЫЙ
УЧАСТОК
Fc-фрагмент
Условные обозначения: L – лѐгкая цепь; Н – тяжѐлая цепь; VL, и VH – вариабельные участки, СL, CH, CH2, CH3 – константные участки. Утолщѐнные линии Н-цепей соответствуют шарнирному участку; Fc – константный фрагмент.
Рисунок 2 – Схематическое изображение молекулы lgG.
Свойства антител:
-гетерогенность (многообразие);
-специфичность – способность реагировать с конкретным антигеном;
19
-аффинность – сила связи одного из активных центров Ig с одним эпитопом антигена;
-авидность (жадность) – показывает, какое количество антигенов может связать молекула антитела. Авидность зависит от количества активных центров, взаимодействующих с антигенным эпитопом.
Классификация, функциональное и диагностическое значение отдельных классов иммуноглобулинов.
IgM (тяжѐлые): состоят из 5 молекул иммуноглобулина G; филогенетически самый древний класс иммуноглобулинов. Первыми синтезируются в организме плода. Появляются в сыворотке крови больного в начале инфекционного заболевания, что указывает на острое течение. Не проходят через плаценту. Содержание в сыворотке крови 5-10% от общего количества иммуноглобулинов. Обладают в основном антибактериальным действием, хорошо фиксируют своим Fc-фрагментом комплемент с последующей его активацией. Обладают самой высокой авидностью. Мономеры IgM находятся на поверхности В- лимфоцитов в виде мембранного Ig и образуют В-клеточный рецептор (BCR) (см. занятие №3).
IgG (лѐгкие): проходят от матери к плоду через плаценту, что определяет защиту новорожденного от инфекции. Образуются в организме в разгар острого заболевания. При реинфекции и рецидиве IgG образуются в начале заболевания. Являются универсальными, т.к. обладают антибактериальным, антивирусным, антитоксическим действием. Содержание в сыворотке крови – около 80% от общего количества Ig.
IgА бывают 2-х видов: сывороточные и секреторные.
Сывороточные IgА представлены мономерами IgG. Содержание их в сыворотки крови 10-15%. Через плаценту не проходят.
Секреторные IgA (SIgA) присутствуют на слизистых оболочках дыхательных путей, кишечника, мочеполовых органов, а также в слюне и грудном молоке. Встречаются чаще в виде димеров IgG. Для защиты от действия протеолитических ферментов имеют особую структуру – секреторный компонент (Sc). SIgA – это основной фактор местного иммунитета слизистых оболочек организма, т.к. предотвращает прикрепление микробов к слизистым оболочкам.
IgE (реагины): мономеры IgG, не проходят через плаценту, содержание в сыворотке крови 0,01-0,02%. Обладают цитофильностью – соединяются Fc– фрагментом с тучными клетками и базофилами. Играют важную роль в развитии аллергических реакций немедленного типа. Обладают антигельминтозной активностью.
IgD: мономеры IgG, не проходят через плаценту. Составляют 0,1% от общего количества иммуноглобулинов. Находятся на поверхности В-лимфоцита, контролируя его активацию.
20