Полезные материалы за все 6 курсов / Ответы к занятиям, экзаменам / 1. Морфология и ультраструктура

рующий раствор для отработанного материала и пипеток и дезинфицирую-

щий раствор для обработки рук.

Правила работы в бактериологических лабораториях кафедры

микробиологии и вирусологии №1.

Основная задача: предотвращение внутрилабораторных заражений со-

трудников и внутрилабораторной контаминации (загрязнения посторонними микробами) материала от больного во время микробиологического исследо-

вания, предупреждение распространения инфекций за пределы лаборатории.

Работу в бактериологической лаборатории проводят с инфицированным материалом, что требует тщательности, осторожности и соблюдения правил личной и общественной безопасности при ее выполнении.

Во избежание распространения инфекции работа обязательно проводит-

ся в халатах, шапочках, сменной обуви, без украшений на руках. Рукава ха-

лата должны прикрывать одежду, волосы следует полностью закрывать ша-

почкой. В помещении лаборатории необходимо соблюдать чистоту и поря-

док: на рабочем столе не должно быть посторонних предметов. В лаборато-

рии запрещен прием пищи. Во время работы не разговаривать и не ходить по лаборатории.

Все предметы, которые были использованы при работе с микроорганиз-

мами (петли, пипетки, предметные стекла, питательные среды и др.), должны быть сразу же обеззаражены, либо переданы для автоклавирования.

Если разбита лабораторная посуда или разлит заразный материал, об этом надлежит немедленно сообщить преподавателю и провести обеззаражи-

вающие мероприятия.

Вконце работы необходимо:

-сдать весь материал;

-привести в порядок рабочее место;

-обработать руки дезинфицирующим раствором и вымыть с мылом.

11

4. Основные методы лабораторной диагностики инфекционных заболе-

ваний.

МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД в зависимости от объекта исследо-

вания подразделяют:

бактериоскопический метод используют для диагностики первичного сифилиса, острой мужской гонореи, туберкулеза, лепры, возвратного тифа;

вирусоскопический метод – обнаружение вирусов в исследуемом ма-

териале с помощью электронного микроскопа. При использовании светового микроскопа в материале от больного можно выявить характерные внутрикле-

точные включения, которые образуются в пораженных клетках при некото-

рых вирусных инфекциях. Диагностическое значение имеет обнаружение включений Бабеша-Негри при бешенстве, обнаружение гигантских клеток с внутриядерными включениями при цитомегаловирусной инфекции. Такие клетки напоминают «совиный глаз».

Цитомегалия. Клетки с гигантскими ядрами («совиный глаз»).

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД в зависимости от объекта ис-

следования подразделяют:

бактериологический метод – посев материала от больного с подозре-

ние на бактериальную инфекцию на искусственные питательные среды с це-

лью обнаружения и идентификации возбудителя. Этот метод используют для диагностики холеры, брюшного тифа, дизентерии, туберкулеза и др.;

12

вирусологический метод – заражение материалом от больного с подоз-

рением на вирусную инфекцию куриного эмбриона (для диагностики грип-

па), культур клеток (для диагностики аденовирусной инфекции, полиомиели-

та), лабораторного животного (для диагностики клещевого энцефалита, бе-

шенства). Затем проводят идентификацию вируса;

микологический метод – посев материала от больного с подозрением на грибковую инфекцию на соответствующие питательные среды с после-

дующей идентификацией плесневых и дрожжеподобных грибов.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД (от лат. serum – сыворотка и logos –

учение) – определение в сыворотке крови больного антител к конкретному возбудителю инфекционного заболевания. Используют для диагностики бру-

целлеза, туляремии, ВИЧ-инфекции др.

АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД – определение состояния аллер-

гии – повышенной чувствительности макроорганизма к микробным аллерге-

нам.

Для диагностики инфекционных заболеваний используют следующие кожно-аллергические пробы:

-при туберкулезе – проба Манту с туберкулином;

-при бруцеллезе – проба Бюрне с бруцеллином;

-при туляремии – проба с тулярином;

-при сибирской язве – проба с антраксином.

МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ:

Полимеразная цепная реакция (ПЦР). С помощью ПЦР в исследуе-

мом материале определяют не сам микроорганизм, а специфический участок его нуклеиновой кислоты (НК). Этот фрагмент становится матрицей для многократного увеличения его копий (амплификация), что впоследствии дает возможность визуально обнаружить эти копии. Для проведения ПЦР необхо-

13

димы ДНК-полимераза или РНК-полимераза и специфический праймер.

Праймеры – это синтетические олигонуклеотиды, комплементарные фраг-

менту НК определяемого микроорганизма. ПЦР – чрезвычайно чувствитель-

ный метод, т.к. позволяет обнаружить небольшое количество микробной НК в исследуемом материале. В настоящее время этот метод широко применяет-

ся для диагностики ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов, хламидийной ин-

фекции и др.;

Метагеномные исследования. Метагеномика – изучает генетический материал (метагеном) сообществ микроорганизмов в совокупности. Цель ме-

тагеномики – получение и анализ всех геномов для установления видового состава и метаболических взаимосвязей в микробном сообществе. Определе-

ние видового состава микробов основано на анализе нуклеотидных последо-

вательностей хромосомных генов, кодирующих 16S p РНК. Эта РНК входит в состав меньшей субъединицы бактериальной рибосомы, а гены, которые ее кодируют, практически не подвергаются изменениям в ходе эволюции (т.е.

являются в высокой степени консервативными). Такой метод генетической идентификации позволяет определить фенотипическую принадлежность микроорганизмов, является основой геносистематики и позволяет определить степень родства организмов. В настоящее время метод широко используется как для изучения микробных сообществ, населяющих человеческий орга-

низм, так и для диагностики различных видов патологии.

БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД – обнаружение возбудителя путем зара-

жения материалом от больного лабораторных животных. Используют для ди-

агностики ботулизма. Кроме того, этот метод применяют для создания экспе-

риментальных моделей инфекционных заболеваний.

5.Систематика и номенклатура микробов.

Вбиологической классификации живых организмов, в том числе микро-

бов, самый верхний (крупный) уровень группировки организмов в системе –

14

это домен. Он включает в себя одно или несколько царств. Все царства объе-

динены в четыре домена: бактерии, археи, вирусы и эукариоты. К домену

«Bacteria» относят царство бактерий, к домену «Archaea» - царство архебак-

терий (самые древние, примитивные бактерии), к домену «Vira» - царство вирусов. Последний домен «Eucarya» (эукариоты) включает царство Protozoa

(простейшие) и Eumycota (грибы).

ДОМЕНЫ:

I. Bacteria (царство бактерий);

II. Archaea (царство архебактерий);

III. Vira (царство вирусов);

IV. Eucarya (царство простейших и грибов).

Микроорганизмы (бактерии, вирусы, грибы, одноклеточные простей-

шие) систематизированы по их сходству, различиям и взаимоотношениям между собой. В основе систематики лежит филогенетический принцип, осно-

ванный на генотипических, а, следовательно, и фенотипических различиях,

сформировавшихся в процессе эволюции. Систематика включает три части:

классификацию, таксономию (расположение, порядок) и идентификацию.

Основой идентификации микроорганизмов являются их морфологические,

физиологические, биохимические, молекулярно-биологические и генотипи-

ческие свойства. Все это позволяет разделять существующие царства на ти-

пы, классы, порядки, семейства, роды и виды.

6. Размеры и основные формы бактерий.

По размеру бактерии подразделяют:

мелкие (1-3 мкм);

средние (3-6 мкм);

крупные (> 6 мкм).

Основные формы бактерий:

1. Шаровидные – кокки.

15

2.Палочковидные.

3.Извитые.

4.Ветвящиеся.

КОККИ (в зависимости от взаиморасположения в мазке кокки подраз-

деляют):

микрококки (от греч. micros – малый) – в мазке располагаются одиночно;

диплококки (от греч. diplos – двойной) – в мазке располагаются попарно.

Диплококки могут быть: - бобовидной формы:

Neisseria gonorrhoeae – возбудитель гонореи;

Neisseria meningitidis – возбудитель менингококковой инфекции.

Чистая культура Neisseria gonorrhoeae. Окраска по Граму.

N.gonorrhoeae. Мазок отделяемого уретры пациента с острой мужской гонореей. Окраска метиленовым синим.

16

Чистая культура Neisseria meningitides. Окраска по Граму.

- ланцетовидной формы:

Streptococcus pneumoniaе – возбудитель крупозной пневмонии;

Чистая культура Streptococcus pneumoniaе. Окраска по Граму.

тетракокки (от греч. tetra – четыре) – располагаются в мазке по четыре;

сарцины (от греч. sarcio – связываю) – располагаются пакетами по 8-16

клеток:

Sarcina ventriculi – нормальный симбионт желудка.

Тетракокки и сарцины, как правило, не вызывают заболеваний у челове-

ка.

стрептококки (от греч. streptos – цепочка) – располагаются в мазке цепоч-

кой:

17

Streptococcus pyogenes – возбудитель скарлатины, рожи, ревматизма и др.;

Чистая культура Streptococcus pyogenes. Окраска по Граму.

Enterococcus faecalis – нормальный симбионт толстого кишечника, мо-

жет быть причастен к урологическим инфекциям;

Peptostreptococcus anaerobius – нормальный симбионт организма чело-

века, может быть причастен к анаэробной инфекции;

стафилококки (от греч. staphylе – виноградная гроздь) – в мазке распола-

гаются гроздьевидными скоплениями:

Staphylococcus aureus – нормальный симбионт организма человека, мо-

жет быть причастен к гнойно-септической патологии;

Чистая культура Staphylococcus aureus. Окраска по Граму.

Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus – нормальные

симбионты кожи и слизистых оболочек, могут быть причастны к урологиче-

ским инфекциям.

18

ПАЛОЧКОВИДНЫЕ:

 неспорообразующие палочковидные бактерии:

Psеиdomonas aeruginosa – синегнойная палочка, возбудитель госпиталь-

ной инфекции;

Escherichia coli – кишечная палочка, нормальный симбионт толстого кишечника;

Vibrio choleraе – возбудитель холеры (изогнутые в виде запятой палоч-

ки).

Чистая культура Escherichia coli.

Чистая культура Vibrio choleraе.

 спорообразующие палочковидные бактерии.

Расположение споры в бактериальной клетке может быть центральным,

субтерминальным и терминальным. В зависимости от размера споры палоч-

ковидные бактерии делят:

19

- бациллы – диаметр споры меньше диаметра клетки, поэтому спора не

деформирует клеточную стенку:

Bacillus anthracis – возбудитель сибирской язвы (спора располагается

центрально);

Чистая культура Bacillus anthracis. Окраска по Граму.

- клостридии (от лат. closter – веретено) – диаметр споры превышает диаметр клетки, поэтому спора деформирует клетку:

Clostridium perfringens – возбудитель газовой гангрены. Спора распола-

гается центрально, клетка имеет форму веретена;

Clostridium tetani – возбудитель столбняка. Спора располагается терми-

нально, что придает клетке сходство с барабанной палочкой;

Clostridium botulinum – возбудитель ботулизма. Спора располагается субтерминально, что придает клетке сходство с теннисной ракеткой.

Чистая культура Clostridium perfringens. Окраска по Граму.

20