3. Материалы и методы

Эксперименты были выполнены на базе института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН в лаборатории физиологии почки и водно-солевого обмена в октябре-ноябре 2013 года.

3.1. Экспериментальные животные

Эксперименты проводились на крысах линии Вистар в возрасте 4 месяцев весом 160-220 г. До дня эксперимента крысы находились на стандартном водном и пищевом режиме: утром предыдущего дня они получали корм, и в течение последующего времени до проведения опыта им не давали пищи при свободном доступе к воде.

Перед началом эксперимента каждой из пяти крыс, находящихся в одной клетке, ставили особую метку красным или черным фломастером на голове, спине, хвосте, правом или левом боку. Затем крысу помещали в картонную коробку, которую ставили на предварительно откалиброванные лабораторные весы. Вес каждой крысы фиксировался в протоколе.

В контрольной группе было 6 крыс. А также 20 крыс, которым произведена водная нагрузка, из которых 10 крысам – первым способом, 10 крысам – вторым способом.

3.2. Ход экспериментальной работы

После взвешивания производился наркоз препаратом золетил в/м с расчетом 3мг/100г массы крысы.

Через 15 минут после введения наркоза осуществлялся первый забор крови. Производился надрез на кончике хвоста, и 3-4 капли капали на стекло, после чего запускался секундомер. Далее каждые 30 с по этой капле проводилось иглой по направлению снизу вверх, для определения времени свертывания. В какой-то момент за иглой начинала тянуться нить фибрина, а еще через некоторое время сгусток стал одним целым, это означало, что кровь свернулась. Данные (время образования первой нити фибрина и время полного свертывания) вносились в протокол работы. Сразу после того, как капнули на стекло, у крыс было взято 200 мкл крови, что сопровождалось механическим воздействием на хвост, в виде надавливания на основание хвоста крысы, для притока венозной крови.

После первого забора крови всем крысам, кроме тех, которые в контрольной группе, производилась водная нагрузка двумя способами (половине крыс одним способом, половине другим).

Первый способ: введение воды через зонд в желудок в количестве 2% от массы тела крысы.

Второй способ: введение гипотонического раствора (0,6% NaCl) внутрибрюшинно, с расчетом 5 мл на 100 г массы животного.

Оба способа создают равный избыток воды в организме.

Крысам в контрольной группе вводилось 0,1 мл физиологического раствора внутрибрюшинно.

Через 5 и 30 мин после водной нагрузки делали следующий забор крови. Производился новый надрез на кончике хвоста. По описанной выше технологии замерялись данные по коагуляции и вносились в протокол. И пятиминутный забор, как и первый, включал взятие 200 мкл крови, а значит и механическое воздействие.

3.3. Статистическая обработка.

Все данные представлены в виде M±SE (среднее арифметическое ± стандартная ошибка среднего). Для сравнения групп использовали парный и непарный критерий Стьюдента. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

4. Результаты и их обсуждение