88) Изучение культуральных свойств выделенной культуры.

Выполняем посев исследуемого материала по методу Дригальского на МПА в чашках Петри. Для этого на поверхность МПА наносим каплю смеси при помощи профламбированной бактериологической петли. Распределяем каплю по поверхности шпателем. Затем этим же шпателем, не обжигая его, проводят по поверхности среды во второй чашке Петри, в третьей и т.д. Посевы инкубируют при температуре 37С в термостате в течение 3 дней. В результате на поверхности МПА образуются колонии – потомство одной клетки, образующие видимые скопления на плотной питательной среде.

С целью изучения культуральных свойств, колонии сначала рассматривают невооружённым глазом, а затем с помощью бинокулярной лупы.

Отмечают следующие культуральные признаки:

Размер колоний (диаметр в мм). Размер колоний определяют измерением при помощи линейки со стороны дна чашки Петри. Если диаметр колонии < 1мм, то их называют точечными, 1…2 мм – мелкими, 2…4 мм – средними, 4…6 мм – крупными, более 10 мм – очень большими.

Форма колоний бывает правильной (округлой, эллипсоидной) и неправильной (мицеливидной, амёбовидной, листовидной, веретеновидной и т.д.).

Цвет колоний может быть белым, желтым, розовым, зелёным и т.д. Окрашивание колоний связано со способностью бактерий вырабатывать пигмент.

Поверхность колоний может быть гладкой, складчатой, шероховатой, бугристой и др.

Рельеф колоний бывает плоским, выпуклым, с вогнутым центром, кратерообразным и др.

Оптический свойства – колонии могут быть прозрачными, полупрозрачными, непрозрачными, блестящими, матовыми.

Консистенция колоний может быть мазеобразной, слизистой, сухой, вязкой, плёнчатой

Край колоний бывает ровным, извилистым. Зубчатым, волнистым, бахромчатым, локонообразным.

Структура колоний может быть гомогенной, неоднородной, грубозернистой, волокнистой и т.д.

Описываются колонии достаточно изолированные друг от друга.

89) Изучение биохимических свойств выделенной культуры.

Выполняем посев исследуемого материала по методу Дригальского на МПА в чашках Петри. Для этого на поверхность МПА наносим каплю смеси при помощи профламбированной бактериологической петли. Распределяем каплю по поверхности шпателем. Затем этим же шпателем, не обжигая его, проводят по поверхности среды во второй чашке Петри, в третьей и т.д. Посевы инкубируют при температуре 37С в термостате в течение 3 дней. В результате на поверхности МПА образуются колонии – потомство одной клетки, образующие видимые скопления на плотной питательной среде.

Бактериальную массу из одной колонии берут петлёй, предварительно хорошо профламбированной и охлаждённой, и переносят в пробирку с МПБ. При изучении особенностей роста на на МПБ обращают внимание на следующие показатели: степень помутнения, наличие пристеночного кольца, наличие поверхностоной плёнки, наличие осадка, наличие цвета.

Для дальнейшей работы удостоверяемся что культура является чистой: делаем мазок, окрашиваем по Граму и микроскопируем. Если обнаруживаем бактериальные клетки, одинаковые по форме и исходной колонией, то культура – чистая. Чистую культуру используют для изучения ферментативных свойств.

Сахаролитическую способность определяют по ферментативному расщеплению углеводов на кислоты, альдегиды и газообразные продукты (СО2, Н2, СН4). Чаще всего используют полужидкие среды Гисса (основа - пептонная вода, к которой добавлен моноуглевод: лактоза, глюкоза, сахароза), агар-агар, и индикатор (например фуксин), которые обесцвечены щёлочью или розоловой кислотой.

Если углевод расщепляется под действием ферментов бактерий, то образуется органическая кислота, которая нейтрализует щёлочь или розоловую кислоту. В результате цвет индикатора восстанавливается и среда окрашивается в розовый (фуксин) или голубой (водно-голубой индикатор). Если углевод расщепляется до конечных продуктов (газов и воды), то наличие газа обнаруживают в виде пузырьков.

Протеолитические свойства. Протеазы расщепляют белки до пептонов, полипептидов, аминокислот. Некоторые способны расщеплять аминокислоты до индола, сероводорода, аммиака.

Определение желатиназы. Наблюдается разжижение столбика желатина.

Определение казеиназы. При наличии фермента казеиназы м.о. вызывают пептонизацию молока. Пептонизация сопровождается растворением сгустка казеина, выпадением осадка и появлением молочной сыворотки.

Тест на индол. Образование индола определяют по способности м.о. расщеплять триптофан с помощью фермента. Индол обнаруживают с помощью реактивов Эрлиха или Ковача, которые добавляют в бульонную культуру. При наличии индола на границе появляется малиновое кольцо.

Тест на сероводород. Для обнаружения используют индикаторные бумажки, пропитанные раствором ацетата свинца, которые в положительном случае окрашиваются в чёрный цвет вследствие образования сульфита свинца.

Тест на аммиак. Для этого под пробку с бульонной культурой помещают розовую лакмусовую индикаторную бумажку, инкубируют в течение 1…5 суток. В положительном случае лакмусовая бумажка приобретает синюю окраску.