85) Методы выделения чистой культуры м.О.

Чистая культура – популяция м.о., содержащая клетки одного вида и выращенная на искусственных питательных средах при определённых условиях.

Метод Пастера, или метод разбавлений. Из суспензий, содержащей смесь м.о., делается ряд последовательных разведений в стерильной среде (физиологический раствор, питательный бульон). С каждым разведением количество микробных клеток будет уменьшаться и можно получить такие разведения, в которых будет находиться только одна клетка, которая даёт начало чистой культуре.

Метод Коха. Исследуемый материал вносят бактериологической петлёй или пастеровской пипеткой в пробирку с расплавленным и охлаждённым до 45С МПА или МПЖ, равномерно размешивают, вращая пробирку между ладонями. Каплю из этого разведения переносят во вторую пробирку, из второй в третью и т.д. Содержимое каждой пробирки выливают в стерильные чашки Петри, оставляют для застывания среды, а затем помещают в термостат вверх дном во избежание осаждения конденсата. При посеве м.о. на плотную среду они размножаются только на том месте, куда попали первоначально. Из каждой жизнеспособной клетки образуется видимое невооружённым глазом скопление м.о. – колония.

Метод Дригальского. Основан на механическом разделении микробных клеток на поверхности плотной питательной среды. Для посева по этому методу используют чашки Петри, залитых плотной питательной средой. На поверхность застывшей среды в первую чашку вносят каплю исследуемого материала, содержащего м.о. Затем с помощью петли каплю растирают по всей поверхности среды. Этим же шпателем проводят по поверхности среды во второй и третьей чашках, в результате чего микробные клетки разделяются. После инкубации в первой чашке наблюдается рост в виде сплошного налёта. В следующих чашках количество становится меньше, и встречаются отдельно расположенные колонии, которые можно изолировать.

Метод нагревания исследуемого материала применяется для выделения чистых культур споровых форм микробов (бацилл, клостридий). Перед посевом исследуемый материал прогревают на водяной бане при 80-90С в течение 10…20 мин. При термической обработке вегетативные формы м.о. погибают, а споры остаются живыми и при последующих высевах на плотную среду прорастают, формируя колонии.

Химический метод используется при изолировании культур м.о., устойчивых к определённым химическим веществам. Исследуемый материал перед посевом заливают 15% р-ром кислоты и выдерживают в термостате 3…4ч. После воздействия кислоты или щелочи клетки возбудителя туберкулёза остаются живыми, а все другие м.о. погибают. После нейтрализации кислоты или щёлочи, материал высеивают на плотную питательную среду, на которой вырастает только возбудитель туберкулёза.

Метод Шукевича используется для выделения подвижных м.о. Делают посев в конденсационную жидкость скошенного МПА. Через несколько часов инкубации подвижные бактерии ( протеи) поднимаются вверх по поверхности среды, образуя налёт.

Биологический метод основан на заражении лабораторных животных.