Лемешевский В.О.,Безрученок Н.Н.,Каленчук Т.В
.pdfЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 2
Цель: изучить функции эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, уметь определять их количество в периферической крови человека и животных, понимать роль крови как внутренней среды организма, обеспечивающей его жизнедеятельность и работу многих его функциональных систем, направленных на обеспечение нормального уровня метаболических процессов в тканях.
ÏолесÃÓОпыт № 1
Подсчёт количества эритроцитов в периферической крови
Эритроциты – красные кровяные тельца, имеющие форму двояковогнутого ди ка, не имеющие ядра и содержащи в своем составе гемоглобин. Увеличение количества эритроцитов в крови называ т я эритроцитозом, уменьшени их количества – эритроп ни й. Выделяют относительный и абсолютный эритроцитоз. Относительный – за счет потери плазмы и сгущ ния крови, при этом общее количество эритроцитов в организме остается в пределах нормы. Аб ютный – истинное увеличение количества эритроцитов за счет уси енн й их продукции костным мозгом. Эритр пения также бывает относительной и абсолютной. Относительная – увеличение объема плазмы (разведение кр ви) без уменьшения общего количества эритроцитов. Абсолютная – уменьшение общего количества эритроцитов в результате усиленного разрушения эритроцитов или снижения их продукции костным мозгом. Подсчет эритроцитов, лейк цитов и тромбоцитов производят в определенном объеме крови (1 мм3) при помощи специальных счетных камер, с предварительным разбавлением крови. Разработаны также автоматические методы подсчета с помощью фотометрических и электронных приборов. Форменные элементы подсчитывают в цельной или стабилизированной крови. Для подсчета форменных элементов наиболее часто применяется
41
камера типа Бюркера с выгравированной на ней сеткой Горяева. Счетная камера состоит из толстого предметного стекла с особым углублением. На дне углубления счетной камеры выгравирована сетка, в клетках которой и подсчитываются форменные элементы. По краям углубления имеются возвышения, куда накладывается покровное стекло. Между нижней поверхностью этого стекла и дном углубления образуется замкнутое пространство, которое и представляет собой счетную камеру. Глубина камеры 0,1 мм.
|
|
Сетка Горяева (Рис. 10) |
|
|||
|
|
ÏолесÃÓ |
||||
состоит из 225 больших квад- |
|
|||||
ратов (В, 2), каждый третий |
|
|||||
из которых разделен продоль- |
|
|||||
ными и поперечными линия- |
|
|||||
ми на 16 маленьких квадратов |
|
|||||
(В, 1). Общая площадь сетки |
|
|||||
равна 9 мм2. Сторона малень- |
|
|||||
кого квадрата равна 1 / 20 мм, |
|
|||||
площадь – 1 / 20 × 1 / 20 = |
|
|||||
= 1 / 400 мм2, |
объем кам ры |
|
||||
над ним (400 × 1) / 10 = 1 |
÷ |
|
||||
÷ |
4000 мм3. |
|
|
|
||
|
Оснащение: |
микр скоп, |
Рис. 10 – Счетная камера |
|||
кровь, капилляр |
т гем метра |
Горяева: |
||||
Сали, штатив с пр бирками, |
А – вид сверху; |
|||||
3 % раствор NaCl, счетная ка- |
Б – вид в разрезе; |
|||||
мера |
Горяева |
с |
покровным |
В – сетка Горяева: |
||
1 – малый квадрат; |
||||||
стеклом, стеклянная палочка, |
2 – большой квадрат |
ватные шарики, марлевые салфетки.
Х д работы:
В сухую, чистую пробирку наливают 4 мл 3 % раствора NaCl для разведения крови. Кровь набирают в капилляр от гемометра Сали до метки (0,02 мл) и добавляют в пробирку, тщательно перемешивают, достигая разведения в 200 раз. Затем суспензией эритроцитов заполняют камеру
42
Горяева и, поместив ее под микроскоп, производят подсчет эритроцитов в 5 больших квадратах (разделенных на 16 маленьких квадратиков), расположенных по диагонали.
При подсчете количества эритроцитов руководствуются правилом Егорова: «Относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его верхней и левой границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе в данном квадратике, не подсчитываются».
Количество эритроцитов (Эр) в 1 л крови рассчитывают поÏолесÃÓформуле: Эр A 4000 200 106 ,
80
где А – умма эритроцитов в 80 маленьких квадратиках; 1 / 4000 мм3 – объем камеры Горяева над одним малень-
ким квадратиком;
200 – разв дени крови в 3 % NaCl;
80 – число мал ньких квадратиков, в которых подсчитывают эритроциты.
Р зу ьтаты раб ты:
Выводы.
43
Опыт № 2 Подсчёт количества лейкоцитов
в периферической крови
Лейкоциты – белые кровяные тельца, имеющие ядро. Увеличение количества лейкоцитов в крови – лейкоцитоз, уменьшение их количества – лейкопения.
Различают физиологические лейкоцитозы: пищеварительный (возникает после еды), миогенный (при физической
нагрузке), эмоциональный, при болевых воздействиях.
вает ядраÏолесÃÓлейк цит в. Кр вь набирают в капилляр от гемометра Са и до метки (0,02 мл) и добавляют в пробирку, тща-
Снижение числа лейкоцитов ниже нормы (лейкопении) возможны по генетическим причинам или в результате повреждения стромы кроветворных органов, например, вслед-
ствие облучения.
О нащение: микроскоп, кровь, капилляр от гемометра Сали, штатив с пробирками, 5 % ра твор ук усной кислоты, подкрашенный метиленовым иним, ч тная камера Горяева с покр вным стеклом, ст клянная палочка, ватные шарики,
марлевые салфетки.
Ход работы:
В ухую, чистую пр бирку наливают 0,4 мл 5 % раство-
ра уксусн й кис |
ты, п дкрашенной метиленовым синим. |
Кислота разрушает |
б л чки эритроцитов, а краска окраши- |
тельно перемешивают, достигая разведения в 20 раз. Затем полученным раствором заполняют камеру Горяева и, поместив ее под микроскоп, производят подсчет лейкоцитов в 25 бо ьших квадратах, каждый из которых условно состоит из 16 маленьких квадратиков. В клинической практике лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах (1600 маленьких) и соответственно, в числителе формулы указывается значение не 400, а 1600. Количество лейкоцитов (Л) в 1 л рассчитывают по формуле:
44
|
Л |
B 4000 20 |
106 |
|
|
||
|
400 |
, |
|
где В |
– сумма лейкоцитов в 25 больших квадратах; |
||
1 / 4000 мм3 – объем камеры Горяева над одним малень- |
|||
ким квадратиком; |
|
||
20 |
– разведение крови в 5 % растворе уксусной кисло- |
||
ты; |
|
|
|
400 – число маленьких квадратиков, в которых подсчи-
тывают лейкоциты.
ных?
ÏолесÃÓРезультаты работы:
Выв ды.
В пр сы и задания для самоконтроля:
1. Понятие о системе крови.
Основные функции крови, их краткая характерстика. Каково общее количество крови у человека и живот-
2. Наз вите физико-химические свойства крови.
3. Эритроциты и их функции. Гемоглобин и его функции.
4.Методы определения количества эритроцитов и гмоглобина.
5.Физиологическая роль лейкоцитов.
45
Лейкоцитарная формула. Т- и B-лимфоциты и их значение в процессах иммунитета.
6.Охарактеризуйте иммунную систему крови.
7.Что такое фагоцитоз и каково его значение?
8.Тромбоциты, их количество, строение, функции.
9.Плазма крови, ее основные константы и функции. Понятие о кровозамещающих растворах.
10.Функциональные системы, обеспечивающие постоянство важнейших констант крови (рН, осмотическое давле-
ние). 11ÏолесÃÓ.О н вны физиологические константы крови и механизмы их р гу яции.
12.С вр м нны клинические методы исследования крови.
46
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3
Цель: изучить роль крови как важнейшего компонента внутренней среды организма, характеристику, механизмы поддержания и методы определения важнейших констант крови.
Опыт № 1 Расчет цветового показателя
еслиÏоколичестволесÃэритроцитов меньшеÓ1,0 × 1012 / л, то первые две цифры.
Цветовой показатель характеризует соотношение между количеством гемоглобина крови и числом эритроцитов. Цветовой показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином и соответствует максимальному содержанию гемоглобина в одном нормальном эритроците,
величина его условно принимает я за единицу.
Если цветовой показатель выше нормы, возникает ги-
перхромия, ниже нормы – гипохромия.
Ход работы:
Цветовой показат ь рассчитывают по формуле:
|
ЦП Hb 3 |
|
Эр * , |
где Hb |
– к нц нтрация г моглобина, г / л; |
Эр* |
– п рвы три цифры числа эритроцитов, |
Р зу ьтаты работы:
ЦП
Выводы.
47
Опыт № 2 Расчет кислородной ёмкости крови
Кислородная емкость крови – максимальное количество кислорода, которое может содержаться в определенном объеме крови (1 л) при полном насыщении гемоглобина кислородом. В норме кислородная емкость крови 180–220 мл О2 в 1 л крови.
|
Ход работы: |
|
ÏолесÃÓ |
ле: |
Кислородная емкость крови рассчитывается по форму- |
|
КЕ Hb Г , |
где Hb – концентрация гемоглобина, г/л; |
|
|
Г – константа Гюфнера, 1,36 мл О2 /г. |
|
Константа Гюфн ра – это колич тво мл кислорода, |
присоединяемых 1 г гемоглобина. |
|
|
Результаты работы: |
|
КЕ |
|
Выв ды. |
|
Опыт № 3 |
|
Изучени осмотической резистентности эритроцитов |
|
Осмотическая резистентность эритроцитов – устойчи- |
вость эритр цит в к действию гипотонических растворов. |
|
|
Выраженные признаки гемолиза у здорового человека |
начинаются в 0,48 % растворе NaCl, в 0,34 % растворе разрушаются все эритроциты.
48
Оснащение: штатив с 9 пробирками, содержащими по 3 мл раствора NaCl в убывающей концентрации (0,9 %, 0,8 %, 0,7 %, 0,6 %, 0,5 %, 0,4 %, 0,3 %, 0,2 % и 0,1 %-й), про-
бирка с донорской кровью, 2 пипетки.
Ход работы:
Пробирки последовательно ставят в штатив. Затем, с помощью пипетки, в каждую из пробирок добавляют по 2 капли цитратной крови. Через 5 мин оценивают результа-
ты – наличие или отсутствие гемолиза, степень выраженностиÏолесÃÓгемолиза.
Рекомендации к оформлению работы:
Зарисуйте девять пробирок, укажите концентрацию раствора NaCl в каждой пробирке. Определите верхнюю и нижнюю границы резистентно ти эритроцитов и сравните данные с нормой. Оцените степень выраженности гемолиза: + – первые признаки г молиза, ++ – выраженный гемолиз, +++ – полный гемолиз.
Результаты работы. Выв ды.
Опыт № 4 Анализ различных видов гемолиза
Г молиз – это разрушение эритроцитов, сопровождающееся выходом гемоглобина в раствор (окрашивается в красный цвет и становится прозрачной – «лаковая кровь»).
Виды г м иза: осмотический, химический, биологический, температурный (холодовой, тепловой), механический.
Наименьшую резистентность имеют эритроциты овец, коз и свиней, наибольшую – птиц и рыб. В летний период времени резистентность эритроцитов у животных повышается.
49
Оснащение: штатив с пятью пробирками, пипетки, физиологический раствор, дистиллированная вода, 0,1 % раствор HCl, 5 %-й раствор глюкозы, сапонин, исследуемая донорская кровь.
Ход работы:
В штатив ставят 5 пробирок, в каждую из которых наливают по 3 мл, соответственно, физиологического раствора, дистиллированной воды, 0,1 % раствора HCl, 5 % раство-
ра глюкозы, раствора сапонина. Во все 5 пробирок вносят пипеткойÏолесÃÓпо 2 капли крови. Рассматривая содержимое всех 5 пробирок, сравнивают результаты.
Рекомендации к оформлению работы:
Определите наличие или отсутствие гемолиза в каждой пробирке.
Опишите механизм гемолиза в каждой пробирке.
Результаты работы. Выводы.
Опыт № 5 Опред ление ск р сти оседания эритроцитов (СОЭ)
СОЭ – п казат ль, характеризующий оседание эритроцитов крови при добавлении антикоагулянта. Главным фактором, от которого зависит СОЭ, является соотношение белковых фракций плазмы. Альбумины, имеющие самую мощную гидратную б чку, уменьшают СОЭ. При увеличении содержания крупнодисперсных белков (фибриноген, глобулины) СОЭ увеличивается.
СОЭ зависит от заряда самих эритроцитов: чем слабее заряжены эритроциты, тем выше их способность к агрегации и СОЭ. Определяется СОЭ также размерами эритроцитов, чем меньше диаметр эритроцитов, тем выше СОЭ.
50